目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响.方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP 激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组.干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达.结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明 显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨 密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P＜0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+V erteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状.

目的:探究圣草酚调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子(TAZ)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(hPDLSC)成骨分化的影响.方法:采用结扎法进行大鼠牙周炎造模,造模成功后随机分为模型组和圣草酚组,每组6只,另取6只正常大鼠作为对照组.体外培养hPDLSC,以10μg/mL的LPS诱导的同时采用0、40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚处理,采用试剂盒检测各处理组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性后筛选圣草酚最佳作用浓度.将hPDLSC随机分为对照组、LPS组、LPS+圣草酚组、LPS+空载组、LPS+圣草酚+YAP敲低组,诱导其成骨分化并以LPS、圣草酚和质粒分组处理.采用HE染色观察牙周组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织及细胞YAP、TAZ表达;采用ALP活性检测试剂盒、ALP染色及茜素红染色检测各组细胞成骨分化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清及细胞炎症因子前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织细胞成骨分化因子Runx2、OSX、骨桥蛋白(OPN)表达.结果:与对照组比较,模型组大鼠牙周组织呈现明显的病理损伤,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平增高,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组相比,圣草酚组大鼠牙周组织病理损伤减轻,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平下降,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达增高(P＜0.05).40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚均可升高LPS诱导的hP-DLSC中ALP活性(P＜0.05),其升高作用随着圣草酚浓度升高而增强并在320μmoL/L时达到平 台期,故选择320μmoL/L的圣草酚进行后续实验.与对照组相比,LPS组细胞 YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P＜0.05).与LPS组相比,LPS+圣草酚组细胞 YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达升高(P＜0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平降低(P＜0.05);LPS+空载组细胞各指标无明显变化(P＞0.05).与LPS+圣草酚组相比,LPS+圣草酚+YAP敲低组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P＜0.05).结论:圣草酚可减轻牙周炎大鼠的炎症损伤,并通过上调YAP/TAZ通路蛋白表达抑制LPS诱导的hPDLSC炎症,从而促使其成骨分化.

目前，在临床中仅应用自体骨已不能满足骨缺损治疗的需求。β-磷酸三钙（beta-tricalcium phosphate，β-TCP）类骨移植替代物因具有良好的修复效果和一定的骨诱导能力而受到广泛关注。可降解β-TCP植入人体后可有效调控炎症，促进血管再生，并以膜内成骨的方式形成新骨，实现骨缺损的愈合。对β-TCP诱导间质干细胞分化为成骨细胞机制的探索也从未停止，最初将骨诱导性归功于被释放钙磷离子和被吸附蛋白的功能，最近的研究热点是材料表面结构对细胞的影响（即整合素与细胞骨架被改变），以及调节信号通路的传导，包括丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK/extracellular regulated protein kinases，ERK）通路、WNT家族分泌蛋白通路、Hippo-Yes相关蛋白/转录共激活因子（Yes-associated protein，YAP/transcriptional coactivator with PDZ-binding motif，TAZ）通路等。目前，β-TCP产品的基础结构日趋成熟，宏观与微观设计也被不断创新，相关骨移植替代物广泛用于临床，经临床研究证实具有长期的安全性和有效性。

目的:探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)与Hippo-Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路在甲状腺乳头状癌发生、发展中的影响。方法:收集福建医科大学附属第二医院2019年9月至2020年4月之间40例甲状腺乳头状癌及癌旁组织标本，分析GPR30、YAP、TAZ mRNA及蛋白表达，并分析三者mRNA表达量与甲状腺乳头状癌病理资料之间的关系。采用GPR30特异性激动剂G1及抑制剂G15处理人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)，分析GPR30、YAP、TAZ表达变化。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡，细胞衰老的检测应用β-半乳糖苷酶染色法，细胞迁移侵袭采用Transwell实验。采用配对 t检验分析各组数据差异。用 t检验评估GPR30、YAP、TAZ表达与具体病理资料之间的关系。用皮尔森(Person)相关分析评估GPR30表达量与YAP、TAZ表达量的关系。 结果:40例甲状腺乳头状癌组织中GPR30、YAP、TAZ的表达在转录及翻译水平均明显高于癌旁组织(癌与癌旁mRNA相对表达量分别为3.438±0.123比2.463±0.747， t＝7.786， P<0.01；3.325±0.111比2.638±0.541， t＝8.285， P<0.01；2.581±0.089比2.041±0.418， t＝8.068， P<0.01；癌及癌旁蛋白相对表达量分别为1.838±0.074比1.172±0.211， t＝13.333， P<0.01、1.735±0.152比1.200±0.321， t＝7.641， P<0.01、2.265±0.024比1.310±0.301， t＝13.915， P<0.01)，差异均有统计学意义。GPR30的mRNA表达与淋巴结转移(3.519±0.094比3.328±0.096， t＝3.786， P<0.01)和肿瘤大小(<2 cm为3.424±0.116，≥2 cm为3.600±0.099， t＝2.553， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。YAP、TAZmRNA表达与淋巴结转移(3.395±0.105比3.283±0.093， t＝3.519， P<0.01；2.627±0.117比2.554±0.053， t＝2.686， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、肿瘤大小、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。GPR30特异性激动剂G1处理TPC-1细胞后，GPR30 mRNA表达量高于对照组(1.224±0.067比0.976±0.048， t＝5.212， P<0.01)，YAP、TAZ表达量高于对照组(分别为1.359±0.096比0.995±0.004， t＝6.562， P<0.01；1.311±0.024比0.985±0.066， t＝8.040， P<0.01)，促进细胞的增殖(0.381±0.002、0.523±0.003、0.754±0.004比0.359±0.004、0.476±0.003、0.665±0.003， t＝8.521、19.190、30.830， P<0.01)、侵袭(422.33±7.23比210.00±3.61， t＝45.510， P<0.01)、迁移(550.67±10.69比229.67±8.33， t＝41.030， P<0.01)，抑制细胞的衰老(0.052±0.001比0.094±0.001， t＝51.440， P<0.01)、凋亡[(1.8±0.2)%比(5.8±0.3)%， t＝19.220， P<0.01]，差异均有统计学意义。 结论:GPR30、YAP、TAZ的的高表达可能与甲状腺乳头状癌淋巴结转移以及预后相关，GPR30可能通过Hippo-TAZ/YAP通路促进甲状腺乳头状癌的发生、发展。

目的:探究Yes相关蛋白(YAP)和转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)在甲状腺乳头癌发生发展过程中的作用。方法:用特异性小干扰RNA(siRNA)转染人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)使其YAP或TAZ表达水平下调，转染NC为阴性对照组，YAP-si、TAZ-si和TAZ-si+YAP-si为实验组。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TPC-1中YAP和TAZ的表达水平，分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞仪、β-半乳糖苷酶染色法、Transwell实验检测YAP或(和)TAZ低表达对TPC-1增殖、凋亡、衰老、迁移、侵袭的影响。将小鼠随机分成5组，每组6只，将转染后的上述TPC-1接种至裸鼠背部皮下组织(接种体积为0.1 ml/只，接种数量为1×10 6/裸鼠)。观察并分析在体内YAP或(和)TAZ低表达对肿瘤生长的影响。两样本比较采用 t检验。 结果:YAP-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于NC组(0.327±0.015比0.361±0.011、0.397±0.021比0.450±0.017、0.560±0.030比0.760±0.036， t＝3.188、3.411、7.385， P<0.05；195.000±2.000比361.667±6.429， t＝42.875， P<0.01；108.000±8.660比205.333±7.234， t＝14.940， P<0.01)，衰老阳性、总凋亡率高于NC组[0.185±0.002比0.094±0.001， t＝-53.276， P<0.01；(26.367±3.250)%比(7.473±0.729)%， t＝-9.824， P<0.01]；TAZ-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于NC组(0.317±0.015比0.361±0.011、0.400±0.010比0.450±0.017、0.537±0.021比0.760±0.036， t＝4.056、4.330、9.291， P<0.05；199.677±8.326比361.667±6.429， t＝26.673， P<0.01；132.000±13.454比205.333±7.234， t＝8.315， P<0.01)，衰老阳性、总凋亡率高于NC组[0.183±0.002比0.094±0.001， t＝-59.719， P<0.01；(23.367±3.156)%比(7.473±0.729)%， t＝-8.479， P<0.01]。YAP-si组肿瘤的体积、重量小于NC组(0.566±0.056比1.021±0.125、2.778±0.257比5.324±0.362、19.877±1.660比31.171±1.962、48.583±3.668比86.441±4.158、80.619±1.243比194.014±9.460、137.865±3.430比331.738±10.514， t＝8.127、14.052、10.758、16.726、29.112、42.952， P<0.01；0.730±0.009比1.232±0.015， t＝69.917， P<0.01)，TAZ-si组肿瘤的体积、重量小于NC组(0.688±0.056比1.079±0.145、2.778±0.392比5.871±0.644、20.135±1.378比31.095±1.088、46.115±4.565比86.680±4.479、80.177±2.468比193.102±8.575、142.736±3.975比344.824±23.604， t＝6.178、10.048、15.295、15.536、30.402、20.681， P<0.01；0.743±0.014比1.220±0.008， t＝73.873， P<0.01)。YAP-si+TAZ-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于YAP-si组(0.293±0.015比0.337±0.021、0.333±0.025比0.450±0.017、0.427±0.015比0.547±0.038， t＝2.907、6.614、5.091， P<0.05；86.333±18.148比195.000±2.000， t＝10.309， P<0.01；81.667±7.506比108.000±8.66， t＝3.980， P<0.05)，衰老阳性、总凋亡率高于YAP-si组[0.336±0.004比0.185±0.001， t＝-61.707， P<0.01；(41.500±0.609)%比(26.500±0.755)%， t＝-14.615， P<0.01]；YAP-si+TAZ-si组TPC-1增殖、迁移、侵袭低于TAZ-si组(0.293±0.015比0.340±0.01、0.333±0.025比0.416±0.017、0.427±0.015比0.537±0.021， t＝4.427、4.702、7.379， P<0.05；86.333±18.148比199.667±8.327， t＝9.831， P<0.01；81.667±7.506比132.000±13.453， t＝5.659， P<0.01)。YAP-si+TAZ-si组肿瘤体积、重量低于YAP-si组(0.661±0.078比5.324±0.362、2.347±0.325比19.877±1.662、11.671±0.713比48.583±3.668、20.891±1.599比80.619±1.243、41.903±2.519比137.865±3.421， t＝30.873、25.325、24.199、72.241、55.407， P<0.01；0.314±0.006比0.730±0.009， t＝90.585， P<0.01)，YAP-si+TAZ-si组肿瘤体积、重量低于低于TAZ-si组(0.661±0.078比5.871±0.644、2.347±0.325比20.135±1.378、11.671±0.713比46.115±4.565、20.891±1.599比80.177±2.468、141.903±2.519比42.736±3.975， t＝19.666、30.733、18.260、49.358、52.546， P<0.01；0.314±0.006比0.743±0.014， t＝69.818， P<0.01)。以上差异均有统计学意义。 结论:YAP和TAZ表达促进甲状腺乳头癌发生发展，且两者具有协同效应。

目的:探讨小干扰RNA-Yes相关蛋白1(siRNA-YAP1)对转化生长因子β 2(TGF-β 2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮-间质转化(EMT)的抑制作用。 方法:将人LECs株HLEB-3细胞分为对照组和TGF-β 2诱导组，正常对照组采用无血清低糖培养基处理细胞，TGF-β 2诱导组采用10 ng/ml TGF-β 2处理细胞，分别培养24 h。另将HLEB-3细胞分为siRNA空载体组、siRNA-YAP1转染组、siRNA空载体+TGF-β 2组和siRNA-YAP1+TGF-β 2组，分别采用含有siRNA空载体和siRNA-YAP1序列的质粒转染细胞。采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色和Western blot法检测各组细胞中转录共激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)mRNA及其蛋白的相对表达量；采用细胞免疫荧光、Western blot法检测各组中LECs EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在细胞中的表达变化。 结果:TGF-β 2诱导组中E-cadherin蛋白相对表达量为0.830±0.104，低于正常对照组的1.180±0.118，TGF-β 2诱导组中Vimentin蛋白相对表达量为1.240±0.110，高于正常对照组的0.797±0.110，差异均有统计学意义( t＝3.857， P＝0.018； t＝-4.933， P＝0.008)；TGF-β 2诱导组YAP1 mRNA和蛋白的相对表达量分别为2.200±0.193和1.203±0.121，显著高于正常对照组的1.136±0.123和0.967±0.025，差异均有统计学意义( t＝-9.288， P<0.01； t＝-3.329， P＝0.029)。与siRNA空载体组比较，siRNA-YAP1转染组细胞中YAP1 mRNA及蛋白相对表达量明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。与siRNA空载体+TGF-β 2组比较，siRNA-YAP1+TGF-β 2组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量明显升高，Vimentin蛋白相对表达量明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:YAP1参与TGF-β 2诱导的HLEB-3细胞EMT过程，siRNA-YAP1抑制TGF-β 2诱导的人LECs EMT过程。

目的:探讨年龄对人增生性瘢痕硬度和成纤维细胞（Fb）纤维化表型的影响及其可能的分子机制。方法:采用实验研究方法。收集2020年1—6月解放军总医院第四医学中心烧伤整形外科收治的10例瘢痕患者（男4例、女6例）手术切除的增生性瘢痕组织和10例患者（男5例、女5例，年龄7~41岁）手术后剩余的正常全层皮肤组织。根据患者年龄，将6例患者［（10.7±1.6）岁］瘢痕组织纳入年轻组，将4例患者［（40.0±2.2）岁］瘢痕组织纳入年长组。对正常皮肤和2组瘢痕组织，行苏木精-伊红（HE）染色观察组织形态，行Masson染色观察胶原形态、排列并测定胶原含量，冻干及金属镀膜后在扫描电子显微镜下观察真皮层胶原纤维微观形态。采用原子力显微镜在液相下测量2组瘢痕组织硬度。取2组瘢痕组织，分离和培养Fb，采用倒置相差显微镜观察其形态，并采用细胞免疫荧光法检测桩蛋白的表达以反映细胞形态，采用细胞免疫荧光法检测促纤维化蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β 1（TGF-β 1）和Ⅰ型胶原表达及机械力转导相关蛋白Yes相关蛋白（YAP）和增殖相关蛋白Ki67的表达，采用实时荧光定量反转录PCR法检测促纤维化基因 TGF- β 1、α- SMA和Ⅰ型胶原，抑制纤维化基因 TGF- β 3及机械力转导相关基因Rho相关激酶1（ ROCK1）和 YAP mRNA表达。对数据行单因素方差分析、LSD- t检验。 结果:HE染色可见，正常皮肤表皮层凹凸不平，真皮层可见血管和汗腺等附属器；年轻组、年长组瘢痕组织表皮层均较为扁平，真皮层血管和汗腺等附属器罕见。Masson染色和扫描电子显微镜下可见，正常皮肤胶原纤维排列松散、无序，而2组瘢痕组织胶原纤维排列均较为致密、整齐，且年轻组瘢痕组织胶原纤维较年长组更为致密。年轻组、年长组瘢痕组织胶原含量明显高于正常皮肤组织（ t=8.02、3.15， P<0.05或 P<0.01），年长组瘢痕组织胶原含量明显低于年轻组（ t=4.84， P<0.05）。年长组瘢痕组织真皮层硬度为（50.3±1.1）kPa，明显高于年轻组的（35.2±0.8）kPa（ t=11.43， P<0.05）。2组瘢痕Fb在倒置相差显微镜下及经细胞免疫荧光法观察，在形态上无明显差异。年长组瘢痕Fb细胞质中Ⅰ型胶原和TGF-β 1表达较年轻组明显升高，2组瘢痕Fb细胞质中α-SMA表达相近。年长组瘢痕Fb细胞质和细胞核中YAP表达较年轻组明显增多，2组瘢痕Fb细胞核中Ki67表达无明显差异。年长组瘢痕Fb中 TGF- β 1和Ⅰ型胶原mRNA表达量明显高于年轻组（ t=2.87、4.85， P<0.05或 P<0.01）， TGF- β 3 mRNA表达量明显低于年轻组（ t=3.36， P<0.05）， α- SMA mRNA表达量与年轻组无明显差异（ t=1.14， P>0.05）。年长组瘢痕Fb中 ROCK1和 YAP mRNA表达量明显高于年轻组（ t=2.98、7.60， P<0.05或 P<0.01）。 结论:年长者皮肤损伤后更容易发生瘢痕愈合，其分子机制可能是由于创面愈合过程中会产生硬度较高的细胞外基质成分使得组织硬度增加，从而激活 ROCK和 YAP/转录共激活因子PDZ结合基序基因的表达，进而促进促纤维化基因和蛋白的表达。

目的:探讨外源性硫化氢(H 2S)对心肌梗死(心梗)后大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。 方法:43只SD大鼠按随机数字表法分为4组：对照组12只、心梗组13只、硫化氢组6只和心梗+硫化氢组12只。采用异丙肾上腺素腹腔注射法(50 mg/kg，1次/d，共2 d)建立急性心梗大鼠模型，末次给药后48 h记录心电图及肌钙蛋白变化确定造模情况。造模成功后，心梗组和心梗+硫化氢组大鼠每日腹腔注射硫氢化钠(56 μmol/kg，1次/d，持续6周)。6周后比较各组大鼠心脏彩色超声观察心功能变化情况，Masson染色观察各组大鼠心肌胶原容积分数，TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率，酶联免疫吸附(Western blot)法检测Yes相关蛋白1(YAP1)、含有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)、哺乳动物STE20样激酶2(MST2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、基质金属蛋白酶3(MMP3)/基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)比值、B细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)等蛋白在各组大鼠心肌组织的表达变化情况。结果:与对照组比较，心梗组大鼠心肌胶原容积分数增加( P<0.05)，心肌细胞凋亡率升高( P<0.05)，心肌组织YAP1、TAZ、MST2、Bax、Caspase-3蛋白表达及MMP3/TIMP2比值增加(均 P<0.05)，而Bcl-2蛋白表达降低( P<0.05)；心梗+硫化氢组较心梗组大鼠心肌组织中胶原容积分数减少( P<0.05)，心肌细胞凋亡率降低( P<0.05)，心肌组织YAP1(2.406±0.024比2.830±0.063)、TAZ(0.964±0.090比1.329±0.018)、MST2(0.780±0.082比1.788±0.097)、Bax(1.500±0.008比0.613±0.003)、Caspase-3(0.620±0.024比0.780±0.012)蛋白表达及MMP3/TIMP2比值降低(均 P<0.05)，而Bcl-2蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:硫化氢可改善心梗后心肌纤维化，该作用与抑制YAP1/TAZ信号通路表达和减少心肌细胞凋亡有关。

经典的Hippo通路通过激酶反应导致下游效应分子Hippo-Yes相关蛋白（Yap）和转录共激活因子（Taz）丝氨酸位点的磷酸化，从而在促进细胞增生、控制细胞极性、改变细胞骨架、上皮细胞-间充质转化和细胞接触抑制等多种病理生理过程中发挥重要调控作用。研究表明，Yap/Taz会影响玻璃体视网膜疾病的进展过程，为糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、视网膜缺血再灌注损伤等发病机制研究和临床治疗开辟了新的前景。探索Yap/Taz的分子机制为未来研究治疗糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变等视网膜纤维化疾病提供一个可能的治疗靶点。同时，调控视网膜局部Yap/Taz的活性也将成为视网膜缺血再灌注损伤中损伤-修复的有效治疗靶点。但Yap抑制剂有潜在的视网膜毒性，目前仍处于临床前研发阶段，进一步研究Yap抑制剂的作用机制和临床安全性将为视网膜疾病的治疗提供新方法。

目的 探讨25-OH维生素D(25-OH vitamin D,25-OH-VD)对新生儿感染性肺炎(neonatal infectious pneumonia,NIP)的抗炎作用及其作用机制.方法 选取2022年1月～2023年1月成都市妇女儿童中心医院收治的65例NIP患儿,根据病情严重程度,分为轻症组(n=34)和重症组(n=31),另选取同期60例健康新生儿为对照组.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清25-OH-VD,白细胞介素-2(inteleukin-2,IL-2)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β水平;蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中维生素 D 受体(vitamin D receptor,VDR)、细胞核转化生长因子 β(transforming growth factor β,TGF-β)/Yes相关蛋白(nucleus-Yes-associated protein,n-YAP)和细胞核转录共激活因子 PDZ 结合基序(nucleus-transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,n-TAZ)通路相关蛋白表达.脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肺上皮细胞构建NIP体外模型,分为Control组、LPS组和LPS+VD组;CCK-8检测细胞活力;qRT-PCR检测各组细胞中细胞色素P450家族成员28B1(recombinant cytochrome P450 27B1,CYP27B1)和VDR的mRNA表达;免疫细胞化学法检测各组细胞YAP阳性细胞核数;免疫荧光检测各组细胞YAP/TAZ复合物核转位;蛋白免疫印迹法检测各组细胞炎性因子相关蛋白表达.结果 与对照组相比,轻症组和重症组患儿血清中IL-2(1.91±0.18 μg/L,2.63±0.27 μg/Lvs 1.05±0.12 μg/L),IFN-γ(1.73±0.13 μg/L,2.18±0.19 μg/Lvs 1.03±0.07 μg/L),TNF-α(1.79±0.08 μg/L,2.38±0.13 μg/L vs 0.97±0.04μg/L)和 IL-1β(2.18±0.07 μg/L,2.59±0.11 μg/L vs 0.96±0.02 μg/L)含量以及 TGF-β(1.67±0.21,2.43±0.42 vs 1.02±0.04),n-YAP(2.08±0.11,4.23±0.37 vs 0.99±0.02)和 n-TAZ(2.47±0.42,4.21±0.58 vs 1.03±0.05)蛋白表达逐渐升高,25-OH-VD(12.57±2.21 μg/L,7.85±2.03μg/L vs 16.76±1.02 μg/L)含量和 VDR(0.73±0.09,0.51±0.06 vs 1.03±0.08)蛋白表达逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.983～56.782,均P＜0.001).细胞实验结果显示,与 Control 组相比,LPS 组细胞存活率在 12h(76.23％±0.73％vs 116.72％±2.14％),24 h(57.23％±0.94％vs 125.76％±1.67％)和 48 h(41.23％±0.56％vs 138.56％±1.35％)时显著降低(t=10.342,26.562,37.821);YAP 阳性细胞数(47.35±3.47 个 vs 12.46±1.34 个)和 YAP/TAZ 复合物核转位率(2.56％±0.32％vs 1.01％±0.06％)升高(t=46.362,26.921);IL-2(2.03±0.09 vs 1.03±0.08),IFN-γ(2.07±0.21 vs 1.02±0.04),TNF-α(2.18±0.11 vs 0.99±0.02)和 IL-1β(3.17±0.42 vs 1.03±0.05)的蛋白表达水平升高(t=28.341,26.713,31.235,47.823),差异具有统计学意义(均P＜0.001),而两组间CYP27B1和VDRmRNA表达差异无统计学意义(t=0.872,0.786,均P＞0.05).与 LPS 组比较,LPS+VD 组在 12 h(85.23％±0.36％),24 h(79.82％±0.63％),48 h(76.28％±0.72％)的细胞存活率和CYP27B1(4.42±0.14),VDRmRNA(5.13±0.56)表达升高,YAP阳性细胞核数(24.41±3.23个)和 YAP/TAZ 复合物核转位率(1.47％±0.26％)降 低,IL-2(1.21±0.06),IFN-γ(1.13±0.42),TNF-α(1.03±0.37)和 IL-1β(1.61±0.58)蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=7.263,19.892,23.145,27.872,26.982,14.762,13.623,18.273,25.314,27.873,22.134,均 P＜0.01).结论 血清 25-OH-VD 水平与 NIP 严重程度相关,外源性给予VD补充可通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制发挥抗炎作用,减轻NIP损伤.