目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响.方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP 激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组.干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达.结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明 显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨 密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P＜0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+V erteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状.

目的:探究圣草酚调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子(TAZ)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(hPDLSC)成骨分化的影响.方法:采用结扎法进行大鼠牙周炎造模,造模成功后随机分为模型组和圣草酚组,每组6只,另取6只正常大鼠作为对照组.体外培养hPDLSC,以10μg/mL的LPS诱导的同时采用0、40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚处理,采用试剂盒检测各处理组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性后筛选圣草酚最佳作用浓度.将hPDLSC随机分为对照组、LPS组、LPS+圣草酚组、LPS+空载组、LPS+圣草酚+YAP敲低组,诱导其成骨分化并以LPS、圣草酚和质粒分组处理.采用HE染色观察牙周组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织及细胞YAP、TAZ表达;采用ALP活性检测试剂盒、ALP染色及茜素红染色检测各组细胞成骨分化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清及细胞炎症因子前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织细胞成骨分化因子Runx2、OSX、骨桥蛋白(OPN)表达.结果:与对照组比较,模型组大鼠牙周组织呈现明显的病理损伤,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平增高,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组相比,圣草酚组大鼠牙周组织病理损伤减轻,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平下降,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达增高(P＜0.05).40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚均可升高LPS诱导的hP-DLSC中ALP活性(P＜0.05),其升高作用随着圣草酚浓度升高而增强并在320μmoL/L时达到平 台期,故选择320μmoL/L的圣草酚进行后续实验.与对照组相比,LPS组细胞 YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P＜0.05).与LPS组相比,LPS+圣草酚组细胞 YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达升高(P＜0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平降低(P＜0.05);LPS+空载组细胞各指标无明显变化(P＞0.05).与LPS+圣草酚组相比,LPS+圣草酚+YAP敲低组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P＜0.05).结论:圣草酚可减轻牙周炎大鼠的炎症损伤,并通过上调YAP/TAZ通路蛋白表达抑制LPS诱导的hPDLSC炎症,从而促使其成骨分化.

目的 初步探讨汉黄芩素(Wogonin,Wog)调节河马(Hippo)/Yes-相关蛋白(Yes associated protein,YAP)信号通路对肝硬化大鼠肝纤维化的影响.方法 将大鼠分为空白对照组(腹腔注射等量生理盐水+灌胃等量生理盐水)、模型组(腹腔注射等量生理盐水+灌胃等量生理盐水)、阳性对照组(0.8 g/kg复方鳖甲软肝片溶液灌胃)和Wog低、中、高剂量组(7、14、28 mg/kg Wog腹腔注射),每组 12只.除空白对照组外,其余各组腹腔注射四氯化碳溶液构建肝硬化模型.所有大鼠造模后给药干预,连续4周.检测大鼠血清肝功能指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,AST)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,ALT);ELISA法检测血清纤维化指标Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen,PCⅢ)、透明质酸(hyaluronic acid hyaluronan,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN);HE、Masson及免疫组织化学染色法观察肝硬化大鼠肝纤维化程度;Ishak评分判断肝组织纤维化程度,分析胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(collagen-Ⅲ,COL-Ⅲ)阳性表达;Western blot检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及Hippo/YAP信号通路蛋白表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组AST、ALT、PCⅢ、HA、LN、Ishak评分、CVF、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1表达升高(P<0.05),p-大肿瘤抑制因子 1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)/LATS1、p-YAP/YAP表达降低(P<0.05);与模型组比较,Wog低、中、高剂量组及阳性对照组AST、ALT、PCⅢ、HA、LN、Ishak评分、CVF、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1表达降低(P<0.05),p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表达升高(P<0.05).Wog各剂量组AST、ALT、PCⅢ、HA、LN、Ishak评分、CVF、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1水平均随剂量升高而降低(P<0.05);p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP水平随剂量升高而升高(P<0.05).结论 Wog可能通过抑制Hippo/YAP信号通路的激活,改善肝硬化大鼠肝纤维化.

目的:研究Elabela(ELA)改善自发性2型糖尿病db/db小鼠肾损伤的作用及其相关机制。方法:将16只8周龄雄性db/db小鼠分为db/db组( n＝8)和ELA组( n＝8)，选取db/m小鼠为对照组( n＝8)。ELA治疗组按ELA21制剂5 mg·kg －1·d －1进行腹腔注射，db/db组和db/m组小鼠以等量生理盐水注射，干预8周。实验结束时采集小鼠血液、尿液，检测HbA 1C、尿白蛋白/肌酐比值等指标。免疫组化法观察ELA在小鼠肾脏组织中的表达情况。HE染色、Masson染色观察肾脏组织病理形态变化。蛋白免疫印迹法检测肾脏组织Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达及Yes相关蛋白(YAP)磷酸化水平。 结果:ELA在db/db小鼠肾组织中的表达明显低于db/m小鼠。ELA干预后db/db小鼠血压、尿白蛋白/肌酐水平明显降低( P<0.05)，但体重、HbA 1C无明显改变。db/db小鼠的肾小管上皮细胞水肿、管腔变小和胶原纤维沉积增加在ELA干预后减轻。db/db组小鼠肾组织TGF-β1、Col-Ⅳ蛋白表达较db/m组明显增加(0.98±0.08对0.68±0.10、1.10±0.14对0.51±0.08，均 P<0.05)，YAP磷酸化水平升高(3.38±0.72对0.81±0.13， P<0.05)，ELA干预后，TGF-β1、Col-Ⅳ表达及YAP磷酸化水平显著下降(0.80±0.06、0.51±0.05、2.21±0.22，均 P<0.05)。 结论:ELA可改善db/db小鼠肾损伤，延缓糖尿病肾病进展，其机制可能与调控YAP信号通路有关。

目的:分析结直肠癌患者循环微小RNA(miR-375)和组织Yes相关蛋白1(YAP1)表达的相关性，探讨两者与临床病理特征的关系。方法:以嘉兴学院附属第二医院2016年6月至2017年12月收治的87例结直肠癌患者[男45例，女42例，年龄(64.5±11.4)岁]为研究对象，以80例健康志愿者为对照，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验测定外周血miR-375表达水平，采用免疫组织化学实验测定结直肠癌病理组织和癌旁健康组织YAP1表达水平，分析两项指标与临床病理特征及预后的关系，进一步根据miR-375和YAP1的表达情况将研究组分为低miR-375且高YAP1组(A组， n＝21)，中间组(B组， n＝32，包含低miR-375且低YAP1，高YAP1且高miR-375两种情况)，高miR-375且低YAP1组(C组， n＝34)，分析两项指标与患者预后的关系。应用SPSS 22.0统计软件分析。 结果:结直肠癌患者循环miR-375表达水平为0.132±0.085，低于对照组(0.521±0.186)，癌组织YAP1表达水平为2.201±0.856，明显高于癌旁健康组织(0.814±0.262)，差异有统计学意义( t＝51.826、51.175， P<0.05)。miR-375表达和YAP1表达之间呈负相关( r＝－0.691， P<0.05)，双荧光素酶实验报告证实两者具有相互作用，差异有统计学意义( t＝9.564， P<0.05)。miR-375和YAP1表达与Dukes分期明显相关，C期患者miR-375表达低于A和B期，YAP1表达高于A和B期，差异有统计学意义( F＝4.347、3.724， P<0.05)。miR-375联合YAP1检查有助于预测结直肠癌复发/转移和死亡(AUC＝0.739、0.699， P<0.05)，差异有统计学意义，其中低miR-375且高YAP1者中位生存期最短，高miR-375且低YAP1者中位生存期最长，组间差异有统计学意义( χ2＝4.685， P<0.05)。 结论:miR-375和YAP1存在交互作用，两者共同参与结直肠癌的发生与发展。

脑胶质瘤恶性程度高，复发率高，预后差，对此分析了脑胶质瘤中Hippo/YAP、PI3K/AKT/mTOR、miRNA、WNT/β-catenin、Notch、Hedgehog及TGF-β等信号通路及关键酶的作用机制，得出 YAP1抑制剂可能成为未来治疗脑胶质瘤有效的靶点，抑制PI3K/AKT/mTOR、Shh、WNT/β-catenin及HIF-1α可降低肿瘤细胞的迁移能力及耐药性，进而改善脑胶质瘤的预后。分析得出Notch1与Sox2呈正反馈调控机制，Notch4预示脑胶质瘤的恶性程度，这样不仅在临床上可针对脑胶质瘤干细胞进行治疗，也能将Notch作为判断预后的一个指标，为治疗脑胶质瘤的方向提供探索性的尝试。miRNA在诊断中具有重要意义，而在治疗脑胶质瘤中可借助纳米颗粒的运载协同替莫唑胺发挥进一步的作用。相信这些研究会让大家对脑胶质瘤有更深入的认识，以期更好的寻找新的治疗方案来逐步攻克脑胶质瘤这道难题。

目的:评价Yes相关蛋白(YAP)/视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号通路在丙泊酚减轻小鼠海马神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用。方法:取正常培养处于对数生长期的HT22小鼠海马神经元，采用随机数字表法分为4组( n＝54)：对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、丙泊酚组(P组)和丙泊酚＋YAP沉默组(P＋ siRNA-YAP组)。采用无糖无氧孵育6 h、复氧复糖培养24 h的方法制备神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型。P组于复氧复糖即刻加入丙泊酚终浓度50 μmol/L。P＋ siRNA-YAP组于模型制备前48 h转染siRNA-YAP。采用CCK-8法检测神经元活力，采用流式细胞术检测ROS含量和凋亡率，采用分光光度法检测MDA含量、SOD活性以及线粒体膜电位(MMP)，采用荧光素荧光酶发光法检测线粒体ATP含量，采用免疫荧光法观察YAP核转位，Western blot法检测YAP、磷酸化YAP(p-YAP)以及OPA1的表达。 结果:与C组比较，OGD/R组神经元活力降低，ROS、MDA含量和凋亡率升高，SOD活性、MMP和线粒体ATP含量降低，p-YAP表达上调，OPA1表达下调( P<0.05)，核内YAP荧光强度减弱；与OGD/R组比较，P组神经元活力升高，ROS、MDA含量和凋亡率降低，SOD活性、MMP和线粒体ATP含量升高，p-YAP表达下调，OPA1表达上调( P<0.05)，核内YAP荧光强度增强；与P组比较，P＋siRNA-YAP组神经元活力降低，ROS、MDA含量和凋亡率升高，SOD活性、MMP和线粒体ATP含量降低，p-YAP、YAP和OPA1表达下调( P<0.05)，核内YAP荧光强度减弱。 结论:丙泊酚减轻小鼠海马神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤的机制可能与激活YAP/OPA1信号通路有关。

目前，在临床中仅应用自体骨已不能满足骨缺损治疗的需求。β-磷酸三钙（beta-tricalcium phosphate，β-TCP）类骨移植替代物因具有良好的修复效果和一定的骨诱导能力而受到广泛关注。可降解β-TCP植入人体后可有效调控炎症，促进血管再生，并以膜内成骨的方式形成新骨，实现骨缺损的愈合。对β-TCP诱导间质干细胞分化为成骨细胞机制的探索也从未停止，最初将骨诱导性归功于被释放钙磷离子和被吸附蛋白的功能，最近的研究热点是材料表面结构对细胞的影响（即整合素与细胞骨架被改变），以及调节信号通路的传导，包括丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK/extracellular regulated protein kinases，ERK）通路、WNT家族分泌蛋白通路、Hippo-Yes相关蛋白/转录共激活因子（Yes-associated protein，YAP/transcriptional coactivator with PDZ-binding motif，TAZ）通路等。目前，β-TCP产品的基础结构日趋成熟，宏观与微观设计也被不断创新，相关骨移植替代物广泛用于临床，经临床研究证实具有长期的安全性和有效性。

目的:探讨白藜芦醇(Res)调控肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的作用和分子机制。方法:本研究为实验研究。体外分离培养大鼠原代PASMCs，采用免疫荧光法鉴定PASMCs，选用第3～6代细胞进行后续实验。比较不同浓度Res(10 μmol/L Res干预组、30 μmol/L Res干预组、100 μmol/L Res干预组和300 μmol/L Res干预组)对半乳糖凝集素3(Gal-3)诱导PASMCs增殖的影响，确定Res的最终干预浓度。根据给予Gal-3、Res、TD139处理和转染control干扰小RNA(siRNA)、Yes相关蛋白(YAP) siRNA的情况不同，将PASMCs分为7组：对照组(无处理)、Gal-3刺激组(30 nmol/L Gal-3刺激48 h)、Res刺激组(100 μmol/L Res刺激48 h)、Res干预组(100 μmol/L Res处理1 h，再加入30 nmol/L Gal-3刺激48 h)、TD139干预组(10 μmol/L TD139作用1 h，再加入100 μmol/L Res干预1 h和30 nmol/L Gal-3刺激48 h)、si-control组(转染control siRNA 24 h，再加入100 μmol/L Res干预1 h和30 nmol/L Gal-3刺激48 h)和si-YAP组(转染YAP siRNA 24 h，再加入100 μmol/L Res干预1 h和30 nmol/L Gal-3刺激48 h)。采用CCK-8实验检测PASMCs增殖能力。采用蛋白质印迹法检测对照组、Res刺激组PASMCs中Gal-3和YAP的表达水平，以及对照组、Gal-3刺激组、Res干预组和TD139干预组PASMCs中YAP的表达水平。结果:Gal-3刺激组细胞增殖能力高于对照组，100 μmol/L Res干预组、300 μmol/L Res干预组细胞增殖能力均低于Gal-3刺激组[(1.36±0.10)比(0.87±0.13)，(1.11±0.09)比(1.36±0.10)，(1.00±0.11)比(1.36±0.10)，均 P<0.05]，后续实验中将100 μmol/L作为Res的干预浓度。Res刺激组Gal-3和YAP的表达水平均低于对照组[(0.49±0.12)比(1.00±0.10)，(0.62±0.13)比(1.00±0.09)，均 P<0.05]。Gal-3刺激组YAP表达水平高于对照组，Res干预组YAP表达水平低于Gal-3刺激组，TD139干预组YAP表达水平低于Res干预组[(1.84±0.09)比(1.00±0.10)，(1.13±0.11)比(1.84±0.09)，(0.82±0.15)比(1.13±0.11)，均 P<0.05]。Gal-3刺激组细胞增殖能力高于对照组，Res干预组细胞增殖能力低于Gal-3刺激组，TD139干预组细胞增殖能力低于Res干预组，si-YAP组细胞增殖能力低于si-control组[(1.28±0.08)比(0.77±0.09)，(1.03±0.07)比(1.28±0.08)，(0.82±0.10)比(1.03±0.07)，(0.80±0.06)比(1.02±0.09)，均 P<0.05]。 结论:Res可能通过抑制Gal-3/YAP信号通路抑制PASMCs增殖。

目的:探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)与Hippo-Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路在甲状腺乳头状癌发生、发展中的影响。方法:收集福建医科大学附属第二医院2019年9月至2020年4月之间40例甲状腺乳头状癌及癌旁组织标本，分析GPR30、YAP、TAZ mRNA及蛋白表达，并分析三者mRNA表达量与甲状腺乳头状癌病理资料之间的关系。采用GPR30特异性激动剂G1及抑制剂G15处理人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)，分析GPR30、YAP、TAZ表达变化。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡，细胞衰老的检测应用β-半乳糖苷酶染色法，细胞迁移侵袭采用Transwell实验。采用配对 t检验分析各组数据差异。用 t检验评估GPR30、YAP、TAZ表达与具体病理资料之间的关系。用皮尔森(Person)相关分析评估GPR30表达量与YAP、TAZ表达量的关系。 结果:40例甲状腺乳头状癌组织中GPR30、YAP、TAZ的表达在转录及翻译水平均明显高于癌旁组织(癌与癌旁mRNA相对表达量分别为3.438±0.123比2.463±0.747， t＝7.786， P<0.01；3.325±0.111比2.638±0.541， t＝8.285， P<0.01；2.581±0.089比2.041±0.418， t＝8.068， P<0.01；癌及癌旁蛋白相对表达量分别为1.838±0.074比1.172±0.211， t＝13.333， P<0.01、1.735±0.152比1.200±0.321， t＝7.641， P<0.01、2.265±0.024比1.310±0.301， t＝13.915， P<0.01)，差异均有统计学意义。GPR30的mRNA表达与淋巴结转移(3.519±0.094比3.328±0.096， t＝3.786， P<0.01)和肿瘤大小(<2 cm为3.424±0.116，≥2 cm为3.600±0.099， t＝2.553， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。YAP、TAZmRNA表达与淋巴结转移(3.395±0.105比3.283±0.093， t＝3.519， P<0.01；2.627±0.117比2.554±0.053， t＝2.686， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、肿瘤大小、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。GPR30特异性激动剂G1处理TPC-1细胞后，GPR30 mRNA表达量高于对照组(1.224±0.067比0.976±0.048， t＝5.212， P<0.01)，YAP、TAZ表达量高于对照组(分别为1.359±0.096比0.995±0.004， t＝6.562， P<0.01；1.311±0.024比0.985±0.066， t＝8.040， P<0.01)，促进细胞的增殖(0.381±0.002、0.523±0.003、0.754±0.004比0.359±0.004、0.476±0.003、0.665±0.003， t＝8.521、19.190、30.830， P<0.01)、侵袭(422.33±7.23比210.00±3.61， t＝45.510， P<0.01)、迁移(550.67±10.69比229.67±8.33， t＝41.030， P<0.01)，抑制细胞的衰老(0.052±0.001比0.094±0.001， t＝51.440， P<0.01)、凋亡[(1.8±0.2)%比(5.8±0.3)%， t＝19.220， P<0.01]，差异均有统计学意义。 结论:GPR30、YAP、TAZ的的高表达可能与甲状腺乳头状癌淋巴结转移以及预后相关，GPR30可能通过Hippo-TAZ/YAP通路促进甲状腺乳头状癌的发生、发展。