目的:探讨Zeste基因抑制子12(SUZ12)在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取2019年1月到2022年1月商丘市第一人民医院收治的67例宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析肿瘤组织和癌旁组织SUZ12蛋白表达水平。将宫颈癌细胞系CaSki分为对照组和SUZ12 KD组，分别采用对照慢病毒和SUZ12短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染细胞，筛选稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和体外移植瘤实验分析两组细胞增殖能力；采用Transwell分析细胞的侵袭能力；采用划痕实验分析细胞迁移能力；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析SUZ12调控的靶基因表达水平。组间计量数据比较采用t检验。结果:宫颈癌组织中SUZ12蛋白相对表达水平(2.17±0.14)明显高于癌旁组织(0.77±0.09)，差异有统计学意义( t＝36.640， P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度( A)值(2.07±0.13)明显高于SUZ12 KD组细胞(1.39±0.10)，差异有统计学意义( t＝10.100， P<0.05)。对照组细胞在体内成瘤的体积[(1 055.70±125.27) mm 3]明显高于SUZ12 KD组细胞[(613.30±76.33) mm 3]，差异有统计学意义( t＝9.537， P<0.05)。对照组细胞在体内成瘤的重量[(5.57±0.52) g]明显高于SUZ12 KD组细胞[(3.28±0.83) g]，差异有统计学意义( t＝7.433， P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(142.17±9.45)个]明显高于SUZ12 KD组细胞[(76.50±7.74)个]，差异有统计学意义( t＝13.170， P<0.05)。对照组细细胞划痕愈合率[(87.36±4.95)%]明显高于SUZ12 KD组细胞[(50.68±7.63) mm 3]，差异有统计学意义( t＝9.884， P<0.05)。对照组细胞ROCK1和ROBO1 mRNA表达水平(0.47±0.07、0.54±0.12)明显高于SUZ12 KD组细胞(1.05±0.07、1.14±0.12)，差异有统计学意义( t＝14.750、8.667， P<0.05)。 结论:SUZ12通过调节KLF2和ROBO1基因表达，促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性细胞生物学行为。

目的:探讨表观遗传抑制因子PcG家族成员果蝇zeste基因增强子的人类同源物1/2（EZH1/EZH2）、胚胎外胚层发育蛋白（EED）及胚胎干细胞抑制蛋白（SUZ12）在常见皮肤T细胞淋巴瘤及淋巴组织增殖性疾病（CTCL/LPD）中的表达。方法:收集2012—2019年于中国医学科学院皮肤病医院确诊的93例CTCL/LPD及8例扁平苔藓皮损石蜡标本，行免疫组化染色，观察EZH2、EED、SUZ12及EZH1蛋白表达。采用SPSS 25.0软件进行卡方检验及Spearman相关分析。结果:93例中包括44例蕈样肉芽肿（MF）、17例NK/T细胞淋巴瘤（NK/TCL）及原发性皮肤间变大细胞淋巴瘤（PC-ALCL）、淋巴瘤样丘疹病（LyP）、种痘水疱病样淋巴组织增殖性疾病（HV-like LPD）及皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤（SPTCL）各8例。93例CTCL/LPD中83例（89.2%）EZH2、81例（87.1%）EED、78例（83.9%）SUZ12、37例（39.8%）EZH1阳性；8例扁平苔藓中1例EZH2、8例EZH1阳性，EED、SUZ12全阴性。CTCL/LPD与扁平苔藓4种蛋白的表达分级差异均有统计学意义（ χ2分别为41.75、39.74、39.36及32.83，均 P < 0.001），且MF、NK/TCL、PC-ALCL、LyP、HV-like LPD及SPTCL与扁平苔藓的表达差异亦均有统计学意义（α = 0.008 3，均 P < 0.001）。同时，EZH2与EZH1的表达评分在MF、NK/TCL、PC-ALCL、LyP、HV-like LPD及SPTCL中均呈负相关（ rs分别为-0.60、-0.68、-0.89、-0.74、-0.93、-0.80，均 P < 0.05）。 结论:PcG家族成员EZH2、EED、SUZ12及EZH1在CTCL/LPD中表达异常。

目的 研究Zeste基因抑制子基因(SUZ)12 mRNA和蛋白在肺腺癌(LUAD)患者组织中的表达,并探讨其表达与患者临床病理特征的关系.方法 分别利用癌症基因组图谱(TCGA)和临床蛋白质组肿瘤分析联盟(CPTAC)数据库下载正常人和LUAD患者肺组织的SUZ12 mRNA和蛋白表达数据,并分析其在正常人和LUAD患者及不同临床特征LUAD患者的表达差异.结果 与正常人群比较,LUAD患者肺组织SUZ12 mRNA和蛋白表达量显著升高(P＜0.05);对患者SUZ12 mR-NA表达量分析显示,吸烟者显著高于不吸烟者和戒烟＜15年者,戒烟≥ 15年者显著高于戒烟＜15年者,白种人显著高于非裔人,透明细胞腺癌显著高于LUAD(未定型)、混合型腺癌、以实性为主的腺癌和腺泡腺癌,LUAD(未定型)和混合型腺癌显著高于黏液性(胶体)癌和乳头状腺癌,腺泡腺癌显著高于黏液性(胶体)癌(P＜0.05,P＜0.01);对患者SUZ12蛋白表达量分析显示,临床分级3级患者显著高于2级患者,p53、河马(HIPPO)、myc和无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)通路有改变者显著高于无改变者(P＜0.05).结论 LUAD患者肺组织中SUZ12表达升高,且其表达升高与患者临床病理特征和肿瘤相关通路改变有关.

背景 甲状腺自身抗体是诊断桥本甲状腺炎(HT)的标志,B淋巴细胞在HT的发病机制中发挥重要作用.Zeste同源物 2 增强子(EZH2)是一种表观遗传学蛋白,在淋巴细胞的发育与功能调控中扮演重要角色.目的 本研究探讨EZH2在HT甲状腺组浆母细胞及浆细胞中的表达,进一步探讨EZH2抑制剂在实验性自身免疫甲状腺炎(EAT)模型中的治疗作用.方法 收集北京大学第一医院 2010-2020 年 6 例行甲状腺手术的患者,取肿瘤对侧的甲状腺组织(HT及正常甲状腺组织各 3 例),通过RNA-seq筛选B淋巴细胞相关基因的表达情况;收集 16 例HT患者的甲状腺组织和 8 例健康对照(HD)甲状腺组织,分别利用免疫组化及免疫荧光验证EZH2 在HT甲状腺组织中B淋巴细胞中的表达;收集 25 例HT甲状腺细针穿刺液(FNA)、19 例HT外周血以及 12 例健康人外周血样本应用流式细胞分析检测EZH2 在浆母细胞及浆细胞中的表达改变.将 15 只 7 周龄NOD.H-2h4 小鼠EAT模型分为对照组(n=5)、EAT无注射(n=5)或注射EZH2 抑制剂GSK126 处理组(10 mg/kg,腹腔注射 3 次/周,n=5),8 周后观察甲状腺炎症程度及甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平的改变.结果 RNA-seq结果显示,相较于正常甲状腺组织,HT甲状腺组织中EZH2 水平上调,一些与B淋巴细胞表型相关的基因例如CD19、CD27、CD38、CD52 相应增加.免疫组化结果显示,16 例HT甲状腺组织标本中EZH2 免疫组化染色均可在生发中心(GC)见到阳性细胞,呈强阳性,8 例正常甲状腺组织染色中未观察到阳性细胞.HT甲状腺组织中EZH2染色高表达在GC区,EZH2特异性地表达在CD19+B淋巴细胞中.流式细胞术检测结果显示HT FNA样本中CD19+B淋巴细胞、浆母细胞及浆细胞比例均高于HD外周血、HT外周血样本(P<0.01),HT FNA样本中EZH2 在CD19+B淋巴细胞、浆母细胞中的阳性比例高于HT外周血(P<0.005).小鼠实验中,EAT组甲状腺的淋巴细胞浸润较对照组增加.GSK126 处理组炎症程度评分和TgAb水平高于对照组,低于EAT组(P<0.001).结论 EZH2 在HT甲状腺组织CD19+B淋巴细胞中表达异常升高,可能促进了B淋巴细胞分化成浆细胞进而促进自身抗体生成破坏甲状腺,EZH2 抑制剂可以减缓EAT模型甲状腺炎症程度.浆母细胞中EZH2 表达增加可能参与了HT的发病机制,EZH2 可能成为治疗HT的新靶点,相关机制需要进一步深入研究.

目的 探究zeste基因增强子同源物(EZH)2 在前列腺癌中表达及其抑制剂对前列腺癌细胞生物行为学的影响.方法 荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌组织(20 例)、癌旁组织(20 例)及前列腺正常上皮RWPE-1 细胞、前列腺癌细胞PC-3、LNCaP和DU145 中EZH2 的表达,将PC-3细胞随机分为4 组,对照组不做处理,低、中、高剂量GSK126 组细胞分别应用EZH2 甲基转移酶抑制剂(GSK126),浓度 5、25、50 μmol/L溶于培养基中进行传代培养,通过噻唑蓝(MTT)法进行各组细胞增殖情况检测,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹检测凋亡相关蛋白及信号通路相关蛋白表达.结果 前列腺癌组织EZH2 的相对表达量较癌旁组织明显升高(P<0.05).与对照组相比,低、中、高剂量GSK126 组前列腺癌PC-3 细胞中EZH2 的相对表达水平均降低,中剂量GSK126 组降低较其他两组更为明显,具有统计学差异(P<0.05).转染 12、36 和72 h后,与对照组相比,低、中、高剂量GSK126 组B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白均降低,OD值、凋亡率及Bcl-2 相关 X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3均升高,中剂量GSK126 组较其他两组效果更为明显,具有统计学差异(P<0.05).结论 EZH2 在前列腺癌组织及细胞中呈高表达,EZH2 抑制剂GSK126 可有效降低前列腺癌细胞中EZH2 表达,抑制增殖并诱导细胞凋亡.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)Hotair在慢性肾脏病(CKD)小鼠模型肾脏纤维化中的作用及其机制.方法 采用随机数字表法将36只小鼠分为对照组、CKD组、CKD+短发夹RNA-对照(sh-Ctrl)组、CKD+短发夹RNA-Hotair(sh-Hotair)组,每组9只.对照组喂食正常饲料,其余3组均予0.2％腺嘌呤饲料喂养造模.造模6周后,CKD+sh-Ctrl组和CKD+sh-Hotair组分别予尾静脉注射100μL(1011基因拷贝)包装了对照shRNA和Hotair-shRNA的腺相关病毒,对照组和CKD组予尾静脉注射100 μL 0.9％氯化钠注射液.观察8周后处死,检测血清肌酐、尿素氮水平,取肾组织行HE染色和Masson染色观察肾脏纤维化情况.采用qRT-PCR法检测肾皮质Hotair、多梳抑制复合体2(PRC2)复合物[Zeste增强子同源物2(EZH2)、Zeste12同源物抑制因子(SUZ12)、胚胎外胚层发育蛋白(EED)]和赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)mRNA表达水平,Western blot法检测肾皮质纤维化相关蛋白胶原蛋白1A1(COL1A1)、胶原蛋白4A1(COL4A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cad-herin)的表达水平,并检测PRC2复合物和LSD1的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,CKD组小鼠体重下降、肾功能恶化,出现肾脏纤维化,肾皮质Hotair表达升高;与CKD+sh-Ctrl组比较,CKD+sh-Hotair组小鼠血清肌酐、尿素氮水平均降低(均P＜0.01),病理检查显示肾脏纤维化程度减轻,肾皮质Hotair表达下降(P＜0.01).与对照组比较,CKD组小鼠COL1A1、COL4A1和α-SMA蛋白表达水平均增加,E-cadherin表达水平减少,PRC2复合物中EZH2、EED和LSD1 mRNA和蛋白表达水平均升高(均P＜0.01).与CKD+sh-Ctrl组比较,CKD+sh-Hotair组小鼠COL1A1、COL4A1 和α-SMA蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平恢复,PRC2复合物中EZH2、EED和LSD1 mRNA和蛋白表达水平均下降(均P＜0.01).结论 lncRNA Hotair在CKD小鼠模型中表达升高,敲低Hotair可缓解肾脏纤维化,可能与Hotair作为PRC2和LSD1的分子支架介导的表观遗传修饰相关.

目的 探讨微小RNA-138(miR-138)对zeste同源增强子2( EZH2)的靶向调控作用及甲状腺癌细胞8505C侵袭迁移的影响.方法 miR_pathway在线分析miR-138在甲状腺癌组织中的表达及调控的生物学过程;脂质体法向8505C细胞转染miR-138模拟物(过表达组)或阴性对照序列(NC组)并设未转染的细胞为对照组,采用实时定量PCR( QPCR)检测miR-138水平,活细胞计数CCK-8试剂盒检测增殖情况,划痕实验和Transwell小室实验分别检测划痕愈合率和穿膜细胞数, QPCR检测EZH2、基质金属蛋白酶-9( MMP-9)、Janus激酶1(JAK1)和信号转导和转录激活因子3( STAT3)的mRNA水平, Western blotting检测EZH2、MMP-9、JAK1、磷酸化JAK1(p-JAK1)、STAT3、磷酸化STAT3( p-STAT3)和MMP-9的蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-138对EZH2的靶向调控作用.结果 miR_pathway在线分析发现miR-138在甲状腺癌中调控多个生物学过程,且在甲状腺癌组织中的表达低于正常组织(P＜0. 05).过表达组的miR-138水平为12. 657±2. 263,高于对照组的1. 025±0. 087和NC组的1. 109±0. 097(P＜0. 05);与对照组和NC组相比,过表达组转染24、48 h的细胞增殖活力降低(P＜0. 05).过表达组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为( 22. 571± 2. 168)%和(152. 3± 16. 5)个,低于对照组的(59. 424± 3. 624)%和(287. 4±17. 5)个及NC组的(61. 280±4. 035)%和(278. 5±16. 3)个( P＜0. 05);miR-138模拟物对EZH2野生型3’端非翻译区的荧光素酶活性有抑制作用( P＜0. 05),但对突变型无影响(P＞0. 05).与其余两组相比,过表达组的 MMP-9、EZH2、p-JAK1和p-STAT3水平降低(P＜0. 05),而JAK1和STAT3水平的差异无统计学意义( P＞0. 05).对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P＞0. 05).结论 miR-138在甲状腺癌组织中低表达,且该miRNA在甲状腺癌中发挥抑制增殖和侵袭迁移的抑癌作用,可能与靶向调控EZH2和JAK1／STAT3／MMP-9通路有关,有作为甲状腺癌治疗候选靶点的潜能.

目的 探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126体外对急性白血病和淋巴瘤细胞增殖和细胞凋亡的作用.方法 采用CCKˉ8法测定不同浓度GSK126作用不同时间对人T淋巴细胞白血病CEM细胞、人急性单核细胞白血病U937细胞和人伯基特淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,采用Annexin V／PI双染法测定GSK126对细胞凋亡的影响,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测GSK126对EZH2、bclˉ2、bclˉxL基因表达的影响.结果 作用24、48、72 h后,与相应阴性对照组(0 μmol／L)比较,5、10、15、20、25 μmol／L GSK126 对 CEM 细胞,5、10、15、20 μmol／L GSK126 对U937细胞和5、10、15、20、25、30 μmol／L GSK126对Raji细胞的增殖均具有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(均P＜0.05). GSK126作用于CEM、U937、Raji细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(13.46±0.83)、(11.65±1.02)、(15.00±0.19)μmol／L.与相应阴性对照组(0 μmol／L)比较,8、12、16 μmol／L GSK126均可不同程度促进CEM、U937细胞凋亡,凋亡率差异均有统计学意义(F＝167.995, P＜0.01;F＝158.400,P＜0.01);而Raji细胞,16 μmol／L GSK126较阴性对照组有更高的细胞凋亡率,差异有统计学意义(t＝47.998,P＜0.05). 8、12、16 μmol／L GSK126均较阴性对照组降低CEM、U937、Raji细胞EZH2 mRNA的表达水平(F＝82.035,P＜0.05;F＝252.712,P＜0.05;F＝690.536,P＜0.01)和凋亡相关基因 bclˉ2、bclˉxL mRNA 的表达水平(bclˉ2:F＝1 900.525,P＜0.01;F＝431.324,P＜0.01;F＝216.184,P＜0.01;bclˉxL:F＝256.751,P＜0.01;F＝147.019,P＜0.01;F＝209.325,P＜0.01).结论 EZH2对急性白血病和淋巴瘤的发生发展有重要作用,GSK126作为EZH2高选择性小分子抑制剂之一,可为血液系统恶性肿瘤临床用药提供新的可能.

上皮样肉瘤(ES)是一种临床上比较少见的、极具侵袭性的软组织肉瘤.多发群体为20～40岁青壮年,男女患病比例为2:1.ES患者目前尚无特别有效的治疗方法,初始诊断后的中位总生存期为30个月.复发或转移患者,生存期不超过一年.治疗ES首创新药,氢溴酸泰泽司他(tazemetostat hydrobromide)是果蝇zeste基因增强子人体同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)编码的组蛋白甲基化转移酶(histone methyl transferase,HMT)的抑制药,若EZH2被异常激活,将导致控制细胞增殖的基因失调,引起多种实体瘤细胞的无限制迅速生长.EZH抑制药通过抑制EZH2酶活性发挥抗肿瘤作用,用于治疗不适合手术的、转移性或局部晚期上皮样肉瘤.氢溴酸泰泽司他是一种高活性、高选择性的表观遗传药物,于2011年3月,由美国Epizyme生物制药公司和日本卫材株式会社共同研制发现,并合作进行全球开发和商业化.2015年5月,Epizyme制药公司从日本卫材制药公司重新获得除日本之外的全球开发权.若Epizyme公司决定对亚洲第三方谈判许可授权,卫材公司拥有有限的优先权.2019年5月30日Epizyme公司向美国食品药品管理局(FDA)递交氢溴酸泰泽司他片治疗ES的上市新药申请(NDA),2019年7月25日美国FDA接受泰泽司他新药上市许可申请,并给予优先审评的地位;2019年12月18日美国FDA肿瘤学药物咨询委员会(ODAC)以全票通过,支持该公司开发的首创EZH2抑制药,氢溴酸泰泽司他片用于治疗不适合手术治疗的转移性或局部晚期上皮样肉瘤.2020年1月23日,FDA批准氢溴酸泰泽司他片上市,商品名为Tazverik?,这是FDA首次批准治疗ES的新药.该文对氢溴酸泰泽司他片的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍.

目的 观察Zeste同源复合物2(EZH2)基因表达对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞炎症反应的影响.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入不同浓度(0、25、50、100μg/mL)ox-LDL作用12、24 h,采用ELISA法检测细胞上清白细胞介素6(IL-6)水平;结果 显示,100μg/mL ox-LDL作用后上清IL-6水平升高最明显(P均<0.05),因0μg/mL ox-LDL作用24 h后上清IL-6水平升高,故选择100μg/mL ox-LDL作用12 h作为后续实验条件.将HUVEC分为两部分,一部分分为实验A组(EZH2腺病毒+100μg/mL ox-LDL)、阳性对照A组(对照腺病毒+100μg/mL ox-LDL)、阴性对照A组(100μg/mL ox-LDL)及空白A组(未处理),另一部分分实验B组(EZH2特异性抑制剂GSK126+100μg/mL ox-LDL)、阳性对照B组(1％DMSO+100μg/mL ox-LDL)、阴性对照B组(100μg/mL ox LDL)及空白B组(未处理),均作用12 h.采用Western blotting法检测细胞EZH2蛋白表达,ELISA法检测上清IL-6水平,Real-time PCR法检测细胞EZH2及IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮合酶(e-NOS)、IL-8、C反应蛋白(CRP)mRNA表达.结果 与空白A组比较,实验A组细胞EZH2 mRNA、蛋白表达明显升高(P均<0.05),阳性对照A组、阴性对照A组细胞EZH2 mRNA、蛋白表达无明显变化(P均>0.05).与空白A组比较,实验A组、阳性对照A组、阴性对照A组上清IL-6水平及细胞TNF-α、e-NOS、IL-8 mRNA表达均升高,实验A组升高更明显(P均<0.05).与空白B组比较,实验B组细胞EZH2 mRNA、蛋白表达明显降低(P均<0.05),阳性对照B组、阴性对照B组细胞EZH2 mRNA、蛋白表达无明显变化(P均>0.05).与空白B组比较,实验B组、阳性对照B组、阴性对照B组上清IL-6水平及细胞TNF-α、e-NOS、IL-8 mRNA表达均升高,阳性对照B组、阴性对照B组升高更明显(P均<0.05).各组细胞CRP mRNA表达比较均无统计学差异(P均>0.05).结论 EZH2过表达可通过靶向调节炎症因子TNF-α、e NOS、IL-8、IL-6而促进ox-LDL诱导内皮细胞炎症反应,抑制EZH2表达则具有相反作用.