目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)在急性胰腺炎(AP)患者中的表达及与病情严重程度和预后的相关性.方法 选取2020年11月至2021年11月我院126例AP患者为AP组,其中轻度38例,中度43例,重度45例;90例正常健康体检者为对照组.根据AP患者入院后28 d的生存情况分为生存组(n=86)和死亡组(n=40).采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测circHIPK3的表达水平.Pearson法分析circHIPK3表达水平与A-PACHE Ⅱ评分及Ranson评分的相关性;Logistic回归分析影响AP患者预后的危险因素.结果 AP组的circHIPK3、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平显著高于对照组(P＜0.05);重度组circHIPK3、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平、APACHE Ⅱ评分及Ranson评分显著高于中度组及轻度组,中度组显著高于轻度组(P＜0.05);circHIPK3的表达水平与IL-6、IL-8、TNF-α水平、APACHE Ⅱ评分及Ranson评分均呈正相关(P＜0.05);生存组的Cr、CRP、cTn1、CK、BNP、circHIPK3水平均明显低于死亡组(P＜0.05);Logistic回归分析发现CK、BNP、circHIPK3高水平是影响AP患者预后的危险因素(P＜0.05).结论 AP患者血清circHIPK3表达水平异常增加,其水平与患者预后密切相关.

目的 分析环状RNA同源结构域相互作用蛋白激酶3(circ_HIPK3)靶向miR-381-3p/锌指蛋白217(ZNF217)轴对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元功能和形态的影响.方法 制备新生大鼠海马神经元,分为对照组、Aβ组、si NC1组、si HIPK3组、si HIPK3+inhibitor NC组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si NC2组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组,除对照组外其余组均通过40 μmol/L Aβ1～42诱导.qRT-PCR法测定海马神经元circ_HIPK3、miR-381-3p、ZNF217 mRNA表达,透射电镜观察细胞形态,CCK-8法测定海马神经元存活率,Hochesst 33342法测定海马神经元凋亡,流式细胞仪检测海马神经元内Ca2+荧光强度,Western blot法测定海马神经元磷酸化Tau蛋白(P-Tau)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、ZNF217蛋白表达,双萤光素酶报告基因分析miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217靶向关系.结果 对照组海马神经元结构正常,胞核形态正常,线粒体、内质网无病理改变;Aβ组海马神经元呈退行性改变,核形态异常,膜内陷,可见大量线粒体肿胀,胞浆内含大量脂滴空泡;与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元结构部分恢复;与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元结构损伤严重;与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元结构损伤减轻.与对照组相比,Aβ组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05);与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05);与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p水平、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05);与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元ZNF217 mRNA和蛋白表达水平、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05);miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217均靶向结合.结论 circ_HIPK3沉默可能通过调控miR-381-3p/ZNF217轴改善Aβ诱导的海马神经元结构功能损伤.

目的 探究慢性心力衰竭(CHF)患者血清环状RNA同源域相互作用激酶3(circHIPK3)和转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与心室重构及心功能的相关性.方法 选取2021年6月至2023年6月河南科技大学第一附属医院收治的152例慢性心力衰竭(CHF)患者为观察对象,作为CHF组,选取同期健康体检者110例,作为对照组,参照纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将CHF患者分为Ⅰ～Ⅱ级(53例)、Ⅲ级(50例)、Ⅳ级(49例),采用实时荧光定量PCR法检测血清样本中circHIPK3表达水平,酶联免疫吸附法检测血清中GATA4蛋白水平,彩色多普勒超声心动图检测心室重构及心功能指标:左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)、左心室后壁厚度(LVPW)、左室舒张内径(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF),多因素logistic回归分析CHF患者心功能分级的影响因素,Pearson法分析CHF患者血清circHIPK3、GATA4与LVMI、LVRI、LVPW、LVEDD、LVFS、CO、LVEF的相关性.结果 与对照组比较,CHF患者血清中circHIPK3[(1.14±0.25)比(1.89±0.59)]、GATA4[(17.26±2.52)pg/ml比(26.94±4.24)pg/ml]水平显著升高,差异存在统计学意义(t=12.538、21.363;P<0.05),circHIPK3、GATA4水平随心功能分级的增加而升高.circHIPK3、GATA4、LVMI是心功能分级为Ⅲ～Ⅳ级的独立危险因素,CO、LVEF是保护因素(P<0.05).CHF患者血清中circHIPK3、GATA4水平与LVMI、LVPW、LVEDD呈正相关,与LVRI、LVFS、CO、LVEF呈负相关(P<0.05);CHF患者血清中circHIPK3与GATA4呈正相关(P<0.05).结论 circHIPK3、GATA4在CHF患者血清中呈现高表达,与心室重构、心功能指标存在一定关联性,可能对该病的诊治、预后评估有重要参考价值.

目的 探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性.方法 纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组).实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平.Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性.单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值.结果 DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P＜0.05).DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果 显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P＜0.05).三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P＜0.05).结论 糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标.

目的 探究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)通过海绵吸附微小RNA-124-3p(miR-124-3p)对神经胶质瘤细胞增殖和转移的影响.方法 按照LipofectamineTM 3000试剂说明书将circHIPK3短发夹RNA(sh-circHIPK3)、pcDNA3.1-circHIPK3、miR-124-3p模拟物(miR-124-3p mimics)和pcDNA3.1-WEE1转染T98G细胞;实时荧光定量PCR检测circHIPK3和miR-124-3p在神经胶质瘤组织和细胞系中的表达情况;CCK-8法检测T98G细胞增殖情况;TranswellTM法检测T98G细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因验证miR-124-3p与circHIPK3和丝氨酸/苏氨酸激酶WEE1的靶向关系;Western blot法检测WEE1和上皮间质转化(EMT)相关蛋白[上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)]的表达情况;此外,circHIPK3和WEE1竞争性结合miR-124-3p后,采用CCK-8法检测T98G细胞增殖,TranswellTM检测T98G细胞侵袭.结果 circHIPK3在神经胶质瘤组织和细胞中高表达,敲减circHIPK3抑制T98G细胞增殖和侵袭能力,并抑制其EMT;双荧光素酶报告基因结果证实miR-124-3p是circHIPK3的靶基因,WEE1是miR-124-3p的靶基因;同时过表达miR-124-3p与circHIPK3或WEE1,或共转染sh-circHIPK3和pcDNA3.1-WEE1可恢复过表达miR-124-3p对T98G细胞增殖、侵袭和EMT的抑制作用.结论 circRNA-HIPK3与WEE1海绵吸附miR-124-3p促进神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和EMT.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)低表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡的影响.方法 采用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证微小RNA-124(miR-124)与HIPK3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)的靶向关系;将体外培养的原代海马神经元分为对照组(正常培养)、Aβ组(给予Aβ刺激)、Aβ+siSTAT3-NC组(转染siSTAT3-NC后给予Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3组(转染siHIPK3后给予Aβ刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-NC组(共转染siHIPK3和inhibitor-NC后给予Aβ 刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-124组(共转染siHIPK3和miR-124 inhibitor后给予Aβ刺激)、Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3-NC组(共转染siHIPK3、miR-124 inhibitor和siSTAT3-NC后给予Aβ刺激)和Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3组(共转染siHIPK3、miR-124 inhibitor和siSTAT3后给予Aβ 刺激).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HIPK3和miR-124表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测海马神经元存活率和凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.结果 生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验证实HIPK3可与miR-124靶向结合;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot实验证实,miR-124可靶向调控STAT3蛋白表达.与对照组比较,Aβ组海马神经元中HIPK3表达水平、STAT3蛋白表达水平、凋亡率和Caspase-3活性明显升高,而海马神经元存活率和miR-124表达水平明显降低(P<0.05);与Aβ+siHIPK3-NC组比较,Aβ+siHIPK3组中上述各指标明显逆转(P<0.05);与Aβ+siHIPK3+antimiR-NC组比较,Aβ+siHIPK3+antimiR-124组中各指标呈明显变化(P<0.05),且趋势与Aβ+siHIPK3组相反;与Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3-NC组比较,Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3组中各指标呈明显变化(P<0.05),且趋势与Aβ+siHIPK3+antimiR-124组相反;而Aβ组与Aβ+siHIPK3-NC组之间、Aβ+siHIPK3组与Aβ+siHIPK3+antimiR-NC组之间以及Aβ+siHIPK3+antimiR-124组与Aβ+siHIPK3+antimiR-124+siSTAT3-NC组之间各指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 CircHIPK3低表达可抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡,其作用机制与调控miR-124/STAT3轴有关.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)促进三阴乳腺癌(TNBC)细胞增殖和迁移的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circHIPK3在TNBC细胞系HCC1806、MDA-MB-231、HCC-70和人正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达水平.将circHIPK3高表达的TNBC细胞系分为sh-NC组、sh-circHIPK3组,分别转染NC敲减质粒、circHIPK3敲减质粒;将circHIPK3低表达的TNBC细胞系分为oe-NC组、oe-circHIPK3组,分别转染NC过表达质粒、circHIPK3过表达质粒.采用qRT-PCR检测各组细胞中circHIPK3表达水平,通过细胞增殖实验(MTS)检测各组细胞增殖活性,采用Transwell实验检测各组细胞迁移能力,采用TOP/FOP Flash双荧光素酶报告基因检测各组细胞荧光素酶活性,并通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、c-MYC和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达.结果 circHIPK3在3种TNBC细胞系中的表达水平(MDA-MB-231细胞中表达水平最高,HCC-70细胞中表达水平最低)均高于人正常乳腺细胞系MCF-10A,差异有统计学意义(F=30.110,P＜0.001).qRT-PCR结果显示,circHIPK3在sh-circHIPK3组中的相对表达量为(0.36±0.06),低于sh-NC组的(0.98±0.03),差异有统计学意义(t=16.008,P＜0.001);circHIPK3在oe-circHIPK3组中的相对表达量为(6.29±0.71),高于oe-NC组的(0.99±0.05),差异有统计学意义(t=12.897,P＜0.001).sh-circHIPK3组MDA-MB-231细胞增殖活性和迁移能力均低于sh-NC组,oe-circHIPK3组HCC-70细胞增殖活性和迁移能力均高于oe-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.001).sh-circHIPK3组MDA-MB-231细胞荧光素酶活性低于sh-NC组,oe-circHIPK3组HCC-70细胞荧光素酶活性高于oe-NC组,差异有统计学意义(P＜0.001).sh-circHIPK3 组 MDA-MB-231 细胞 Wnt3a、β-catenin、c-MYC 和 MMP-2 蛋白表达均低于 sh-NC组,oe-circHIPK3组HCC-70细胞Wnt3a、β-catenin、c-MYC和MMP-2蛋白表达均高于oe-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 circHIPK3通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进TNBC细胞的增殖和迁移.

目的 探究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circ-HIPK3)通过调控微小RNA-1207-5p(miR-1207-5p)促进结直肠癌(CRC)细胞增殖和转移的作用机制.方法 体外培养人CRC细胞系HCT166细胞,分别以pcDNA3.1-NC(空白组)与pcDNA3.1-circ-HIPK3(研究组)转染HCT166细胞48 h,于倒置荧光显微镜下观察转染效率,以不做任何处理的HCT166细胞作为对照组;采用荧光定量PCR检测细胞circ-HIPK3及miR-1207-5p mRNA表达,采用MTT实验及划痕实验分别检测细胞增殖及迁移能力,双荧光素酶实验检测circ-HIPK3与miR-1207-5p的靶向作用,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路蛋白表达情况.结果 研究组细胞增殖促进率、划痕愈合率、细胞中circ-HIPK3、miR-1207-5p mRNA相对表达水平及Wnt、β-catenin蛋白表达水平均高于对照组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组与空白组上述各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05);双荧光素酶实验结果显示circ-HIPK3上存在miR-1207-5p的结合位点.结论 circ-HIPK3通过下调CRC中miR-1207-5p的相对表达,促进细胞增殖和转移,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin通路有关.

环状 RNA(circRNA)首先作为一种"共价闭环的单链RNA类病毒"被人们所认识.1979 年 Hsu 和 Coca-Prados提出环状 RNA可能源于病毒,1980 年 Arnberg 等又在酵母菌中发现 circRNA.20 世纪末发现,circRNA同样存在于人体细胞中,但由于早期技术条件的限制,circRNA 曾被认为是由 mRNA前体错误剪接而产生.随着高通量测序技术的发展,人们对 circRNA的认识逐步加深.circRNA参与各种心血管疾病的发生和发展.例如,Xu 等[1]通过构建小鼠心肌肥大模型发现,在心脏组织中,由同源域相互作用蛋白激酶 3(HIPK3)基因的第二个外显子环化而成的环状 RNA HIPK3(circHIPK3)水平上调,circHIPK3 可作为微小 RNA (miR)-185-3p海绵,降低心肌细胞 miR-185-3p 水平.