目的 探究血清微RNA(miR)-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4(SMAD4)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值.方法 选取2018年1月至2022年1月在平顶山市妇幼保健院就诊的PCOS不孕病人172例为PCOS组,另取同期体检的180例月经周期正常且已婚已育女性作为对照组.实时荧光定量PCR法检测血清中miR-130b-3p的水平;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清SMAD4水平.判断PCOS病人人工授精结局并分为临床妊娠组(n=146)和未临床妊娠组(n=26).Pearson法对PCOS病人血清SMAD4、miR-130b-3p、抗苗勒氏管激素(AMH)的相关性进行分析;logistic回归分析影响PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素,采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估miR-130b-3p、SMAD4水平预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的价值.结果 与对照组相比,PCOS组血清miR-130b-3p(1.02±0.24比2.16±0.34)水平较高(t=36.47,P<0.05),血清SMAD4[(71.15±11.62)ng/L比(36.05±6.37)ng/L]水平较低(t=34.92,P<0.05),与临床妊娠组相比,未临床妊娠组血清miR-130b-3p(2.04±0.31比2.85±0.51)水平较高(P<0.05),优势卵泡数≥2个比例(78.08％比50.00％)及血清AMH[(8.27±1.85)pg/L比(6.16±1.01)pg/L]、SMAD4[(38.27±6.99)ng/L比(23.60±2.91)ng/L]水平较低(P<0.05).Pearson分析显示,PCOS病人血清中SMAD4与miR-130b-3p呈负相关(r=-0.56,P<0.05),PCOS病人血清中miR-130b-3p与AMH呈负相关(r=-0.46,P<0.05),血清中SMAD4与AMH呈正相关(r=0.46,P<0.05).logistic分析显示,miR-130b-3p水平升高是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素(P<0.05),AMH和SMAD4水平降低是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的保护因素(P<0.05).ROC曲线分析显示,血清miR-130b-3p、SMAD4联合预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的曲线下面积(AUC)为0.95,其灵敏度为96.20％,特异度76.70％.结论 PCOS病人血清miR-130b-3p水平升高,SMAD4水平下降,二者对PCOS病人人工授精未临床妊娠有预测价值.

缺血性卒中仍然是第二大死亡原因，也是长期致残的主要原因，目前有效治疗脑卒中的药物屈指可数 [1]。临床指南中得到广泛推荐的是急性缺血性卒中4.5 h内应用rt-PA溶栓治疗，但溶栓治疗后的脑血管再灌注可加重脑损伤，称之为缺血-再灌注损伤 [2]。通过系统性回顾分析发现，他汀类药物可以减轻脑卒中的损伤，促进卒中后神经功能的恢复 [3]，但机制不完全清楚。

目的:鉴定非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者和健康对照组人血清外泌体微小RNAs（microRNAs）差异表达谱，探索miRNAs在NAFLD发病、诊断及治疗中的价值。方法:各取4例人口学特征、个人史相近的S2~3级NAFLD患者和健康对照者进行血清外泌体miRNAs高通量测序，对差异表达最显著的4条miRNAs按S1组、S2~3组、对照（Control）组每组各20例行qRT-PCR验证，并进行靶基因预测，对靶基因进行GO和KEGG富集分析。正态分布的计量资料使用 t检验或方差分析，等级资料和非正态分布资料使用秩和检验，计数资料使用Pearson χ2检验或Fisher精确检验。 结果:初步鉴定出差异有统计学意义（ P < 0.05）且差异表达在2倍以上的血清外泌体miRNAs共19条，hsa-miR-122-5p、hsa-miR-146b-5p、hsa-miR-197-3P的相对表达关系为：S2~3组>S1组>Control组，hsa-miR-483-3p的相对表达关系为：NAFLD组（S1或S2~3）>Control组。GO分析显示靶基因在分子功能、细胞组分、生物过程均有广泛的注释，靶基因显著富集的通路共84条，从20条与NAFLD最密切的通路中筛选出与至少10条通路都相关的靶基因共5个，即PIK3R2、AKT2、AKT3、MAPK1、NFKB1。 结论:初步分析了NAFLD患者和健康对照组血清外泌体miRNAs差异表达谱，研究了4条miRNAs对于判断肝脂肪变性程度的价值，预测了数以千计的靶基因及其参与的复杂信号通路，为寻找无创诊断NAFLD的生物标志物和特异性治疗的新靶点提供了新的参考。

目的:探讨微小RNA-146a(miR-146a)对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:体外培养HRMECs，采用含5.5 mmol/L D-葡萄糖或25 mmol/L D-葡萄糖的培养液培养48 h，分别记为正常对照组和高糖组。另取正常培养的HRMECs采用脂质体转染法将miR-146a mimics或相应mimics对照转染至HRMECs，并采用含25 mmol/L D-葡萄糖的培养液培养48 h，分别记为高糖+miR-146a拟似物组和高糖+拟似物对照组。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-146a的表达水平；采用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测各组细胞活力和凋亡率；采用Western blot法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及核转录因子-κB(NF-κB)信号相关蛋白NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达水平。结果:正常对照组、高糖组、高糖+拟似物对照组和高糖+miR-146a拟似物组细胞中miR-146a的相对表达水平分别为1.00±0.10、0.22±0.02、0.21±0.02和0.88±0.09，细胞活力分别为(100.00±10.06)%、(68.41±6.67)%、(67.91±6.74)%和(90.46±8.97)%，细胞凋亡率分别为(3.11±1.02)%、(27.28±3.56)%、(27.44±4.03)%和(7.29±2.11)%。高糖组细胞中miR-146a的相对表达水平和细胞活力值明显低于正常对照组，细胞凋亡率明显高于正常对照组；高糖+miR-146a拟似物组细胞中miR-146a的相对表达水平和细胞活力值明显高于高糖组和高糖+拟似物对照组，细胞凋亡率明显低于高糖组和高糖+拟似物对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。高糖组细胞中Bax和p-NF-κB p65蛋白表达水平明显高于正常对照组，Bcl-2蛋白表达水平明显低于正常对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；高糖+miR-146a拟似物组细胞中Bax和p-NF-κB p65蛋白相对表达水平明显低于高糖组和高糖+拟似物对照组，Bcl-2蛋白相对表达水平明显高于高糖组和高糖+拟似物对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。各组间细胞NF-κB p65蛋白相对表达水平比较，差异无统计学意义( F＝0.106， P＝0.955)。 结论:过表达miR-146a可抑制高糖所致的HRMECs凋亡，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取郑州大学第一附属医院2017年1月到2021年12月手术切除的59例胆囊癌及其癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-146b-5p表达水平；采用免疫组织化学分析两种组织Robo1蛋白表达水平。采用转染试剂转染miRNA对照和miR-146b-5p抑制剂至人胆囊癌细胞系GBC-SD，分别命名为miRNA对照组和miR-146b-5p KD组，采用噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验分析两组细胞活力和增殖能力；采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力；采用生物信息学和荧光素酶报告基因分析miR-146b-5p的靶基因；采用Western blot分析靶基因表达水平。计量数据比较采用 t检验。 结果:胆囊癌组织miR-146b-5p表达水平(1.01±0.16)明显低于癌旁组织(1.94±0.30)，差异有统计学意义( t＝20.860， P<0.05)。miRNA对照组细胞吸光度值高于miR-146b-5p KD组(2.22±0.10比1.76±0.06， t＝9.294， P<0.05)，miRNA对照组细胞克隆形成率高于miR-146b-5p KD组[(85.75±5.16)%比(63.20±5.66)%， t＝7.210， P<0.05]，miRNA对照组细胞划痕愈合率高于miR-146b-5p KD组[(72.85±5.91)%比(55.56±6.53)%， t＝4.806， P<0.05]，miRNA对照组细胞迁移数量多于miR-146b-5p KD组[(110.83±16.18)个比(75.66±11.70)个， t＝4.313， P<0.05]，miRNA对照组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平低于miR-146b-5p KD组(0.94±0.06比1.30±0.17， t＝5.081， P<0.05)，miRNA对照组细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和SNAIL蛋白表达水平高于miR-146b-5p KD组(1.28±0.10、0.91±0.09比0.84±0.08、0.52±0.10， t＝8.436、7.256， P<0.05)，差异均有统计学意义。Robo1是miR-146b-5p的靶基因。miRNA对照组细胞Robo1蛋白表达水平(1.19±0.16)明显高于miR-146b-5p KD组(0.64±0.11)，差异有统计学意义( t＝6.881， P<0.05)。胆囊癌组织Robo1蛋白表达水平(1.06±0.13)明显高于癌旁组织(0.60±0.11)，差异有统计学意义( t＝21.000， P<0.05)。 结论:miR-146b-5p参与胆囊癌细胞的增殖和凋亡，主要通过靶向Robo1蛋白来实现的。

目的:观察卒中后认知障碍(PSCI)患者执行功能特征及其在卒中急性期时血浆miR-146a-5p、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平，并寻找能早期预测PSCI的标志物。方法:从神经内科随访的急性脑梗死(ACI)患者中选取PSCI患者及卒中后认知正常(PSCN)患者各40例，分别纳入PSCI组和PSCN组。另招募同时期年龄相匹配的健康体检者纳入年龄相匹配对照组(AMC组)。采用执行功能量表[包括数字广度测试(DST)、Stroop色词测试(CWT)、连线测试B(TMT-B)及语义流畅性测试(SFT)等]评估3组受试者的执行功能情况，并检测3组受试者基线时血浆miR-146a-5p及IL-6、TNF-α表达量。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析基线时患者血浆miR-146a-5p、IL-6、TNF-α含量及MoCA得分对PSCI的预测价值。结果:基线时PSCI组血浆miR-146a-5p表达量明显低于PSCN组和AMC组( P<0.05)，PSCN组血浆miR-146a-5p含量显著高于AMC组( P<0.05)；PSCI组血浆IL-6含量明显高于PSCN组和AMC组( P<0.05)，PSCN组血浆IL-6含量亦显著高于AMC组( P<0.05); PSCI组血浆TNF-α含量明显高于AMC组( P<0.05)，但较PSCN组无显著差异( P>0.05)，PSCN组血浆TNF-α含量亦显著高于AMC组( P<0.05)。3个月后随访时，发现PSCI组DST、SFT得分均显著低于PSCN组和AMC组( P<0.05); PSCI组TMT-B耗时数、SIE耗时数均明显超过PSCN组( P<0.05)和AMC组( P<0.05)。PSCN组DST得分、SFT得分与AMC组差异均无统计学意义( P>0.05)；PSCN组TMT-B耗时数明显超过AMC组( P<0.05)，SIE耗时数较AMC组有增多趋势( P>0.05)。基线时血浆miR-146a-5P含量联合MoCA得分预测PSCI的曲线下面积(AUC)为0.9013，其敏感度为72.5%，在最佳临界点的特异性为97.5%。 结论:ACI患者无论是否进展为PSCI其执行功能均会出现某些方面异常，并以PSCI患者执行功能的受损程度较严重。高水平miR-146a-5p在ACI患者急性期能通过抑制神经炎症反应对其认知功能发挥保护作用，联合应用急性期miR-146a-5p表达量及MoCA得分能有效预测PSCI的发生。

目的:探讨微小RNA(miR)-146b-5p对甲状腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:收集河南科技大学第一附属医院2018年1月至2020年10月72对病理确诊为甲状腺癌患者手术标本，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-146b-5p在甲状腺癌及癌旁组织、正常人甲状腺上皮细胞TEC、甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133中的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-146b-5p对靶基因Smad4的直接靶向调控作用；甲状腺细胞中过表达或沉默miR-146b-5p表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)、蛋白质印迹法(Western blot)实验检测miR-146b-5p的不同表达对甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133细胞增殖能力的影响及细胞核增殖抗原(Ki-67)、Smad4蛋白表达变化。两组间比较采用独立样本 t检验、 χ2检验，多组间差异检验采用方差分析。 结果:状腺癌组织中miR-146b-5p表达明显高于癌旁组织( t＝5.028， P<0.05)，并与性别、肿瘤大小、TNM分期显著相关( χ2＝5.445、4.531、4.589， P<0.05)。miR-146b-5p在甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133中表达明显高于正常人甲状腺上皮细胞TEC( t＝3.723、5.332， P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示，Smad4是miR-146b-5p的靶基因。CCK-8、Western blot实验结果显示，miR-146b-5p mimic组的细胞增殖能力、Ki-67蛋白表达水平明显高于mimic-NC组，Smad4蛋白表达水平明显低于mimic-NC组；而miR-146b-5p inhibitor处理的细胞增殖能力、Ki-67蛋白表达水平明显低于inhibitor-NC组，Smad4蛋白表达水平明显高于inhibitor-NC组( F＝6.202、5.324， P<0.05)。 结论:miR-146b-5p在甲状腺癌组织及细胞中表达上调，且其可能通过靶向Smad4促进甲状腺癌细胞增殖。

目的:探讨血清miR-134及miR-146b表达水平预测老年急性缺血性脑卒中(AIS)患者预后的价值。方法:选取2017年1月至2019年10月海口市第三人民医院收治的162例老年AIS，根据改良Rankin量表(mRS)分为预后良好组(98例)和预后不良组(64例)，采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组(46例)、中度组(75例)、重度组(41例)。采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-134及miR-146b表达水平。应用多因素Logistic回归分析老年AIS患者预后不良的危险因素。应用ROC曲线分析血清miR-134及miR-146b表达水平预测老年AIS患者预后不良的价值，Pearson相关分析老年AIS患者血清miR-134及miR-146b表达水平与NIHSS及mRS评分的相关性。结果:AIS组血清miR-134(3.26±1.13比0.85±0.38)及miR-146b(2.27±0.93比0.56±0.21)表达水平明显高于对照组( t＝14.360、12.527， P<0.01)。预后不良组血清miR-134(4.35±1.46比2.28±0.85)及miR-146b(3.07±1.04比1.51±0.66)表达水平明显高于预后良好组( t＝13.520、11.242， P<0.01)。重度组血清miR-134及miR-146b表达水平均明显高于中度组和轻度组( t＝10.815、9.462， P<0.01)，且中度组血清miR-134及miR-146b表达水平均明显高于轻度组( t＝13.627、11.611， P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示，血清miR-134[ OR(95% CI)：2.470(1.603～4.927)]及miR-146b[ OR(95% CI)：1.914(1.350～3.406)]水平升高是老年AIS患者预后不良的危险因素( P<0.05)。ROC曲线分析显示，血清miR-134及miR-146b表达水平预测老年AIS患者预后不良的最佳截值分别为3.84、2.68，两项联合预测老年AIS患者预后不良的曲线下面积(0.926，95% CI：0.865～0.987)明显高于单项，其敏感度和特异度为92.4%和86.2%。相关分析显示，老年AIS患者血清miR-134及miR-146b表达水平与NIHSS评分及mRS评分均呈正相关( r＝0.806、0.871、0.785、0.842，均 P<0.01)。 结论:血清miR-134及miR-146b表达水平升高与老年AIS患者神经功能缺损的严重程度及预后相关，两项联合预测老年AIS患者预后不良的价值较高。

目的:探讨miR-20a-5p对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞系SH-SY5Y增殖、侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:将miR-20a-5p过表达及抑制基因分别转染至SH-SY5Y细胞，根据实验需要分为miR-20a-5p过表达组、NC过表达组、miR-20a-5p抑制组、NC抑制组，通过体外实验研究miR-20a-5p对NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移的影响。根据生物信息学预测软件初步预测NFKBIB（IκB β）可能为miR-20a-5p的下游靶基因，运用双荧光素酶报告实验、定量反转录PCR (qRT-PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）验证miR-20a-5p靶向调控NFKBIB基因。通过细胞集落形成实验、CCK-8实验、细胞侵袭实验、细胞划痕实验、流式细胞术研究miR-20a-5p在SH-SY5Y细胞中增殖、侵袭和迁移的生物学功能。在mRNA水平上，运用qRT-PCR检测每组细胞中NFKBIB mRNA的表达量；用Western blot检测在每组细胞中NFKBIB、NF-κB蛋白的表达量。结果:细胞集落形成实验显示miR-20a-5p过表达组细胞集落形成数为（146±16）个，较NC过表达组（39±1）个显著增高，差异有统计学意义（ P<0. 01）。CCK-8实验结果显示miR-20a-5p过表达组较NC过表达组显著促进SH-SY5Y细胞增殖。细胞侵袭实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞侵袭数量为（117±5）个，较NC过表达组（55±2）个显著增多，差异有统计学意义（ P<0. 001）。细胞划痕实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞愈合率为（0. 56±0. 05）%，NC过表组细胞愈合率为（0. 40±0. 08）%，差异有统计学意义（ P<0. 05）。流式细胞术实验结果显示抑制miR-20a-5p后，SH-SY5Y细胞早期凋亡的细胞数较NC抑制组增多。抑制miR-20a-5p的表达后，上述实验结果与过表达miR-20a-5p时相反，差异均有统计学意义（ P<0. 05）。过表达miR-20a-5p后，qRT-PCR结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB mRNA表达含量为（0. 36±0. 24），较NC过表达组（1. 00）显著降低；Western blot结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB表达量为（1. 15±0. 30），较NC过表达组的表达量（1. 92±0. 31）显著降低；NF-κB表达量为（4. 17±0. 45），较NC过表达组的表达量（1. 64±0. 39）显著增加，差异均有统计学意义（ P< 0. 05）。 结论:miR-20a-5p促进NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移能力，可能是通过抑制NFKBIB的表达来激活NF-κB通路，或可作为促进NB细胞增殖、侵袭和迁移的潜在干预靶点。

目的:探讨微RNA-146b（miR-146b）、信号转导及转录激活因子（STAT）1与STAT3在原发性痛风性关节炎（GA）患者PBMCs中的表达变化及可能的临床意义。方法:收集120例男性原发性GA[含57例急性期（AG）、63例间歇期（IG）]及66名健康体检者（HC组）的外周血标本、临床资料及实验室检查指标，采用实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）检测PBMCs中miR-146b、STAT1与STAT3的表达水平，比较其在3组间差异并与临床指标间进行相关性分析；构建受试者工作特征曲线（ROC）评估其在GA中的诊断效能。18名健康体检者的PBMCs经100 μg/ml的MSU刺激3 h模拟急性痛风炎症环境后，RT-qPCR检测IL-1β和miR-146b、STAT1与STAT3的转录变化，蛋白质印迹法检测IL-1β、STAT1与STAT3蛋白及磷酸化蛋白表达变化。符合正态计量资料采用 t检验、单因素方差分析及LSD- t检验，非正态分布数据采用Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验，变量间相关采用Spearman相关分析，ROC来评估诊断价值。 结果:① miR-146b、STAT1、STAT3在3组表达中差异均有统计学意义（ F=7.02、19.52、17.07， P均<0.001），miR-146b在原发性GA组（0.32±0.28）显著高于HC组（0.19±0.18），而STAT1（0.019±0.012）、STAT3（0.014±0.010）则显著低于HC组[（0.038±0.029），（0.025±0.016）， t=2.96，6.26，5.56， P均<0.01]；进一步亚组分析显示miR-146b在AG与IG组的表达均高于HC组[（0.26±0.17），（0.38±0.35），（0.19±0.18）， t=2.09，3.30， P均<0.05]，但AG组低于IG组（ t=2.02， P<0.05）；STAT1 mRNA在AG与IG组的表达均低于HC组[（0.020±0.012），（0.019±0.012），（0.038±0.029）， t=4.89，4.56， P均<0.001]，而AG和IG组间差异无统计学意义（ t=0.24， P>0.05）；STAT3 mRNA在AG与IG组的表达均低于HC组[（0.016±0.012），（0.013±0.008），（0.025±0.016）， t=5.64，3.33， P均<0.01]，且AG组高于IG组（ t=2.12， P<0.05）。②Spearman相关分析显示：GA中miR-146b的表达与同型半胱氨酸呈负相关（ r=-0.37， P=0.014）；STAT1与血肌酐呈负相关（ r=-0.29， P=0.019），与肾小球滤过率估算值呈正相关（ r=0.25， P=0.047）；STAT3与HDL-C呈负相关（ r=-0.27， P=0.033）。③ROC曲线显示：miR-146b、STAT1、STAT3的ROC曲线下面积（95% CI）AUC分别为0.679（0.582，0.776）、0.710（0.629，0.791）、0.705（0.626，0.783），三者联合为0.836（0.765，0.907），提示对痛风诊断有一定价值（ P均<0.001）。④18例HC的PBMCs经MSU刺激3 h后，与空白对照组和阴性对照组相比，miR-146b表达显著降低（ H=14.44， P=0.003），而IL-1β、STAT1、STAT3 mRNA表达显著升高（ H=26.44、27.26、15.90， P均<0.001）。且模型组的IL-1β、STAT、STAT3蛋白及磷酸化蛋白表达明显高于空白对照组，差异均有统计学意义（ t=9.97、6.63、7.48、11.25、6.28， P均<0.01）。 结论:miR-146b、STAT1、STAT3在GA的异常表达与部分临床指标相关，提示可能参与了痛风免疫炎症反应和代谢的调节，具体机制值得进一步研究。