目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取郑州大学第一附属医院2017年1月到2021年12月手术切除的59例胆囊癌及其癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-146b-5p表达水平；采用免疫组织化学分析两种组织Robo1蛋白表达水平。采用转染试剂转染miRNA对照和miR-146b-5p抑制剂至人胆囊癌细胞系GBC-SD，分别命名为miRNA对照组和miR-146b-5p KD组，采用噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验分析两组细胞活力和增殖能力；采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力；采用生物信息学和荧光素酶报告基因分析miR-146b-5p的靶基因；采用Western blot分析靶基因表达水平。计量数据比较采用 t检验。 结果:胆囊癌组织miR-146b-5p表达水平(1.01±0.16)明显低于癌旁组织(1.94±0.30)，差异有统计学意义( t＝20.860， P<0.05)。miRNA对照组细胞吸光度值高于miR-146b-5p KD组(2.22±0.10比1.76±0.06， t＝9.294， P<0.05)，miRNA对照组细胞克隆形成率高于miR-146b-5p KD组[(85.75±5.16)%比(63.20±5.66)%， t＝7.210， P<0.05]，miRNA对照组细胞划痕愈合率高于miR-146b-5p KD组[(72.85±5.91)%比(55.56±6.53)%， t＝4.806， P<0.05]，miRNA对照组细胞迁移数量多于miR-146b-5p KD组[(110.83±16.18)个比(75.66±11.70)个， t＝4.313， P<0.05]，miRNA对照组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平低于miR-146b-5p KD组(0.94±0.06比1.30±0.17， t＝5.081， P<0.05)，miRNA对照组细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和SNAIL蛋白表达水平高于miR-146b-5p KD组(1.28±0.10、0.91±0.09比0.84±0.08、0.52±0.10， t＝8.436、7.256， P<0.05)，差异均有统计学意义。Robo1是miR-146b-5p的靶基因。miRNA对照组细胞Robo1蛋白表达水平(1.19±0.16)明显高于miR-146b-5p KD组(0.64±0.11)，差异有统计学意义( t＝6.881， P<0.05)。胆囊癌组织Robo1蛋白表达水平(1.06±0.13)明显高于癌旁组织(0.60±0.11)，差异有统计学意义( t＝21.000， P<0.05)。 结论:miR-146b-5p参与胆囊癌细胞的增殖和凋亡，主要通过靶向Robo1蛋白来实现的。

目的:探讨微小RNA(miR)-146b-5p对甲状腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:收集河南科技大学第一附属医院2018年1月至2020年10月72对病理确诊为甲状腺癌患者手术标本，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-146b-5p在甲状腺癌及癌旁组织、正常人甲状腺上皮细胞TEC、甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133中的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-146b-5p对靶基因Smad4的直接靶向调控作用；甲状腺细胞中过表达或沉默miR-146b-5p表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)、蛋白质印迹法(Western blot)实验检测miR-146b-5p的不同表达对甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133细胞增殖能力的影响及细胞核增殖抗原(Ki-67)、Smad4蛋白表达变化。两组间比较采用独立样本 t检验、 χ2检验，多组间差异检验采用方差分析。 结果:状腺癌组织中miR-146b-5p表达明显高于癌旁组织( t＝5.028， P<0.05)，并与性别、肿瘤大小、TNM分期显著相关( χ2＝5.445、4.531、4.589， P<0.05)。miR-146b-5p在甲状腺癌细胞TPC-1、FTC133中表达明显高于正常人甲状腺上皮细胞TEC( t＝3.723、5.332， P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示，Smad4是miR-146b-5p的靶基因。CCK-8、Western blot实验结果显示，miR-146b-5p mimic组的细胞增殖能力、Ki-67蛋白表达水平明显高于mimic-NC组，Smad4蛋白表达水平明显低于mimic-NC组；而miR-146b-5p inhibitor处理的细胞增殖能力、Ki-67蛋白表达水平明显低于inhibitor-NC组，Smad4蛋白表达水平明显高于inhibitor-NC组( F＝6.202、5.324， P<0.05)。 结论:miR-146b-5p在甲状腺癌组织及细胞中表达上调，且其可能通过靶向Smad4促进甲状腺癌细胞增殖。

目的:鉴定非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者和健康对照组人血清外泌体微小RNAs（microRNAs）差异表达谱，探索miRNAs在NAFLD发病、诊断及治疗中的价值。方法:各取4例人口学特征、个人史相近的S2~3级NAFLD患者和健康对照者进行血清外泌体miRNAs高通量测序，对差异表达最显著的4条miRNAs按S1组、S2~3组、对照（Control）组每组各20例行qRT-PCR验证，并进行靶基因预测，对靶基因进行GO和KEGG富集分析。正态分布的计量资料使用 t检验或方差分析，等级资料和非正态分布资料使用秩和检验，计数资料使用Pearson χ2检验或Fisher精确检验。 结果:初步鉴定出差异有统计学意义（ P < 0.05）且差异表达在2倍以上的血清外泌体miRNAs共19条，hsa-miR-122-5p、hsa-miR-146b-5p、hsa-miR-197-3P的相对表达关系为：S2~3组>S1组>Control组，hsa-miR-483-3p的相对表达关系为：NAFLD组（S1或S2~3）>Control组。GO分析显示靶基因在分子功能、细胞组分、生物过程均有广泛的注释，靶基因显著富集的通路共84条，从20条与NAFLD最密切的通路中筛选出与至少10条通路都相关的靶基因共5个，即PIK3R2、AKT2、AKT3、MAPK1、NFKB1。 结论:初步分析了NAFLD患者和健康对照组血清外泌体miRNAs差异表达谱，研究了4条miRNAs对于判断肝脂肪变性程度的价值，预测了数以千计的靶基因及其参与的复杂信号通路，为寻找无创诊断NAFLD的生物标志物和特异性治疗的新靶点提供了新的参考。

目的:研究微小RNA-146a(miR-146a)对高糖诱导的人视网膜内皮细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法:收集2013年10—12月在南京医科大学附属无锡人民医院就诊的单纯糖尿病患者57例和糖尿病视网膜病变(DR)患者40例。另选取41名健康者作为正常对照。收集受检者的一般检查结果，并采集受检者静脉抗凝血各5 ml。体外培养人视网膜内皮细胞(HREC)系，分为高糖组和正常对照组，分别采用含30 mmol/L葡萄糖的DMEM培养液和正常DMEM培养液培养。采用荧光定量PCR法分别检测各组受检者外周血和体外培养HREC中miR-146a的表达水平。分别用lipofectamine2000装载50 nmol/L miR-146a模拟物、模拟物对照剂和miR-146a抑制物、抑制物对照剂转染HREC。采用荧光定量PCR法检测各转染组细胞中miR-146a和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达水平。采用Western blot法检测核因子кB(NF-кB)p65和NF-кB p65 Ser536蛋白相对表达量。 结果:糖尿病组和DR组miR-146a相对表达量分别为0.36±0.08和0.27±0.08，明显低于正常对照组的1.00±0.16，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。在高糖组HREC细胞中miR-146a相对表达量为0.37±0.11，明显低于正常对照组的1.00±0.18，差异有统计学意义( t＝5.57， P<0.01)。miR-146a模拟物组miR-146a mRNA的相对表达量为2 540.00±105.00，明显高于模拟物对照组的61.00±17.90；miR-146a抑制物组miR-146a mRNA的相对表达量为0.04±0.01，明显低于抑制物对照组的0.88±0.04，差异均有统计学意义( t＝23.23、17.12，均 P<0.01)。miR-146a模拟物组ICAM-1 mRNA的相对表达量为0.35±0.12，明显低于模拟物对照组的1.00±0.13；miR-146a抑制物组ICAM-1 mRNA的相对表达量为2.74±0.48，明显高于抑制物对照组的1.00±0.16，差异均有统计学意义( t＝3.58、3.37，均 P<0.05)。miR-146a模拟物组NF-кB p65 Ser536蛋白相对表达量为0.43±0.03，明显低于模拟物对照组的1.07±0.09，差异有统计学意义( t＝6.74， P<0.01)。miR-146a抑制物组NF-кB p65 Ser536蛋白相对表达量为2.08±0.12，明显高于抑制物对照组的1.00±0.01，差异有统计学意义( t＝8.76， P<0.01)。 结论:miR-146a能够通过抑制NF-кB磷酸化水平和ICAM-1的表达，减轻DR的炎症反应。

目的:探讨消化性溃疡合并幽门螺杆菌（ Hp）感染患者血清微小RNA（miR）-155和miR-135b-5p表达水平及其临床意义。 方法:采用前瞻性研究的方法，连续选取济宁医学院附属医院2021年7月至2023年2月消化性溃疡患者263例。其中，经 14C呼气试验确定为 Hp感染146例（ Hp感染组），未合并 Hp感染117例（非 Hp感染组）；免疫印迹法确定Ⅰ型 Hp感染110例，Ⅱ型 Hp感染36例。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-155和miR-135b-5p表达水平，放射免疫法检测血清胃泌素水平，酶联免疫吸附法检测血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ和PG Ⅱ水平；记录患者基本临床资料。采用多因素Logistic回归分析影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-155和miR-135b-5p对消化性溃疡患者发生 Hp感染的诊断价值。 结果:Hp感染组胃泌素、PG Ⅰ、PG Ⅱ、溃疡出血率和复发比例明显高于非 Hp感染组[（108.47 ± 15.35）ng/L比（79.63 ± 10.58）ng/L、（295.41 ± 37.26）pg/L比（236.75 ± 29.17）pg/L、（44.08 ± 8.52）pg/L比（39.29 ± 6.74）pg/L、25.34%（37/146）比15.38%（18/117）和21.92%（32/146）比11.97%（14/117）]，差异有统计学意义（ P<0.01或<0.05）。 Hp感染组血清miR-155和miR-135b-5p明显高于非 Hp感染组（1.94 ± 0.63比0.95 ± 0.29和1.86 ± 0.57比1.03 ± 0.31），差异有统计学意义（ P<0.01）。Ⅰ型 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p明显高于Ⅱ型 Hp感染患者（2.05 ± 0.66比1.60 ± 0.54和1.97 ± 0.61比1.52 ± 0.45），差异有统计学意义（ P<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，血清miR-155、miR-135b-5p、胃泌素、PG Ⅰ是影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素（ OR = 1.443、1.436、1.452和1.438，95% CI 1.165～1.787、1.146～1.799、1.187～1.777和1.150～1.798， P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-155和miR-135b-5p联合诊断消化性溃疡患者发生 Hp感染的曲线下面积明显大于血清miR-155和miR-135b-5p单独诊断（0.907比0.839和0.836， Z = 2.57和2.81， P = 0.010和0.005）。 结论:消化性溃疡合并 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p水平较高，两者联合检测对消化性溃疡患者发生 Hp感染具有较高的诊断价值。

目的:构建竞争性内源核糖核酸(ceRNA)以揭示尿酸盐肾沉积分子调控机制.方法:复制尿酸盐肾沉积大鼠模型,采用高通量核糖核酸(RNA)测序技术分析尿酸盐肾沉积大鼠肾组织中微小核糖核酸(miRNA)的表达,并筛选出差异表达的 miRNA.利用 TargetScan、StarBase、miRDB、miRWalk 4 个数据库预测 miRNA 的靶基因,通过 DAVID 和 Metascape 数据库对靶基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.运用Cytoscape构建主要信号通路的ceRNA调控网络.结果:测序共检测到14个差异miRNA(均为上调),该差异miRNA的靶基因主要富集在细胞衰老和癌症相关信号通路;构建获得的ceRNA调控网络含47个长链非编码RNA(lncRNA)节点、10个miRNA节点、27个信使RNA(mRNA)节点,该调控网络中 miR-155-5p、miR-132-3p、miR-503-5p、miR-146b-5p 和 miR-212-5p 为排名前 5 的 HUB 基因.结论:本研究通过筛选尿酸盐肾沉积差异miRNA,构建了尿酸盐肾沉积ceRNA网络,为尿酸盐肾沉积机制探讨提供了新思路.

目的 基于生物信息学分析探索影响扩张型心肌病(DCM)干细胞移植疗效的差异表达微小RNA(miRNAs)及其靶基因.方法 本研究筛选术前基线特征相似的DCM患者,以干细胞移植术后左心室射血分数改善＞5％为标准,分为治疗良好组和无效组.通过对两组患者的骨髓间充质干细胞样本进行miRNAs高通量测序,运用edgeR筛选出两组间的差异表达miRNAs,并使用MiRanda、TargetScan和RNAhybrid数据库进行靶基因预测,对预测得到的靶基因进行GO、KEGG及Reactome富集分析.使用STRING数据库和Cytoscape软件,并参考紧密度、介数中心性、度三种拓扑分析方法和韦恩图筛选关键基因.两组间比较采用t检验.结果 本研究共筛选出44个差异表达miRNAs,其中23个上调,21个下调.上调的差异表达miRNAs靶基因有908个,下调的差异表达miRNAs靶基因835个.GO分析结果显示靶基因在生物过程中主要富集在细胞代谢过程的调节,分子功能主要富集在离子结合,细胞组分则主要与细胞膜相关.KEGG通路和Reactome分析发现靶基因主要与调节干细胞多能性的信号通路、RIG-I样受体信号通路和RNA聚合酶Ⅱ转录等相关.此外,韦恩图共筛选出4个关键基因,分别为 MED1、SMAD2、TRAF6、GSK3B,其中 GSK3B 和TRAF6分别为上调的 hsa-miR-1304-3p和下调的hsa-miR-146a-3p靶基因,MED1和SMAD2为下调的hsa-miR-1299靶基因.结论 本研究提供了hsa-miR-1304-3p、hsa-miR-1299、hsa-miR-146a-3p 3 个可能用于提示 DCM 患者干细胞移植预后的差异表达miRNAs,其调控的关键基因MED1、SMAD2、TRAF6、GSK3B及所在通路可能是提高干细胞移植治疗DCM的潜在作用靶点.

目的 基于生物信息学分析溃疡性结肠炎(UC)中具有诊断和治疗潜力的差异表达基因以及潜在的微小RNA(miRNA).方法 采用加权基因共表达网络分析法对GEO数据库中的芯片原始数据进行筛选.获取UC相关差异表达基因进行富集分析.根据关键基因,预测与差异表达基因相关的潜在miRNA,并构建基因-miRNA调控网络.结果 共筛选出277个差异表达基因,其中有200个基因上调,77个基因下调.基因集富集分析(GSEA)显示,主要富集通路是神经活性配体受体相互作用、利什曼原虫感染、朊病毒病害以及心电图受体相互作用等通路.基因本体论(GO)分析结果显示,主要参与趋化因子活性、肝素结合、趋化因子受体结合等条目.京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析结果显示,主要富集通路为细胞因子受体相互作用通路、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、趋化因子信号通路、核转录因子kappa B(NF-κB)信号通路富集通路等.筛选出10个枢纽基因,分别是C-X-C趋化因子配体8(CXCL8)、Toll样受体2(TLR2)、细胞间黏附分子1(ICAM1)、选择素L(SELL)、趋化因子受体4(CXCR4)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA4)、细胞分化抗原69(CD69)、双糖链蛋白多糖(BGN)、C-X-C趋化因子配体13(CXCL13)、金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1).鉴定出12个潜在的关键miRNAs,分别为 hsa-mir-335-5p、hsa-mir-146a-5p、hsa-mir-92a-3p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-4426、hsa-mir-4462b、hsa-mir-4647、hsa-mir-32-5p、hsa-mir-92b-3p、hsa-mir-98-5p和hsa-mir-93-5p.结论 本研究共筛选出277个差异表达基因可能参与UC的发生发展,鉴定出10个枢纽基因和12个miRNAs或可作为UC的生物标志物.

目的 探究血清微小RNA(miR)-155-5p和miR-146b-5p与继发性急性髓系白血病(sAML)染色体畸变及预后的关系.方法 选择 2017-05 至 2020-04 空军军医大学第二附属医院血液内科收治的sAML患者 26 例,另外纳入同期在医院进行体检的健康人 25 名作为健康对照组.根据国际人类细胞遗传命名系统,将sAML患者分为染色体畸变组和染色体正常组.采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-155-5p和miR-146b-5p水平,并记录患者随访期间的总生存期.结果 与健康对照组相比,sAML组患者血清miR-155-5p显著升高[4.69(1.87,30.83)vs.1.13(0.79,1.78),Z=-4.070,P<0.001],而miR-146b-5p显著降低[1.79(1.55,2.44)vs.3.02(2.58,3.43),Z=-4.561,P<0.001].二者联合诊断sAML的曲线下面积为0.922(95%CI:0.846～0.997).与染色体正常组相比,染色体畸变组 sAML患者血清 miR-155-5p明显升高[19.26(4.45,46.65)vs.1.51(0.79,3.27),Z=-3.585,P<0.001],miR-146b-5p明显降低[1.55(1.50,1.97)vs.2.16(1.79,3.00),Z=-2.954,P=0.003].血清miR-155-5p和miR-146b-5p水平识别染色体畸变的 AUC分别为 0.925(95%CI:0.826～1.000)、0.850(95%CI:0.703～0.997),联合AUC可提高至 0.919(95%CI:0.812～1.000).血清miR-155-5p和miR-146b-5p是染色体畸变的独立影响因素(P<0.05).血清miR-155-5p高表达(≥4.27)和miR-146b-5p低表达(<1.62)患者的总生存率更低,中位生存时间更短(P<0.05).Cox回归分析结果表明,血清miR-155-5p高表达和miR-146b-5p低表达是sAML患者死亡的独立危险因素(P<0.05).结论 血清miR-155-5p高表达和miR-146b-5p低表达与sAML患者染色体畸变和预后不良密切相关,二者有希望成为sAML染色体畸变和预后不良的风险预测指标.

目的 探讨微小RNA(miR)-152和miR-146b-5p在子宫内膜息肉中的表达,及其对术后复发的预测价值.方法 收集2021年1月至2022年10月在石家庄市第六医院接受宫腔镜息肉切除术的196例子宫内膜息肉患者作为子宫内膜息肉组,根据患者术后6个月的复发情况分为复发组(53例)和未复发组(143例),另选取同期因不孕症进行宫腔镜检查的196例患者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测子宫内膜息肉组织和正常子宫内膜组织中miR-152、miR-146b-5p相对表达水平,并进行组间比较;采用多因素Logistic回归分析子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析子宫内膜息肉中miR-152、miR-146b-5p相对表达水平对子宫内膜息肉患者术后复发的预测价值.结果 复发组miR-152、miR-146b-5p相对表达水平、孕激素受体(PR)水平明显低于未复发组和对照组(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)、雌激素受体(ER)水平明显高于未复发组和对照组(P<0.05);未复发组 miR-152、miR-146b-5p相对表达水平、PR水平明显低于对照组(P<0.05),VEGF、ER水平明显高于对照组(P<0.05).进一步研究显示,miR-152、miR-146b-5p、VEGF、ER、PR是子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素(P<0.05).miR-152、miR-146b-5p二者联合预测子宫内膜息肉患者术后复发的曲线下面积(AUC)为0.949,灵敏度为96.23%,特异度为74.02%,优于二者各自单独预测(Z联合检测-miR-152=4.854、Z联合检测-miR-146b-5p=3.431,P<0.001).结论 子宫内膜息肉组织中miR-152、miR-146b-5p表达明显下调,二者联合对预测子宫内膜息肉患者术后复发有较好的参考价值.