目的:本研究旨在探讨WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3在多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）患者颗粒细胞（GCs）中的作用及其分子机制。方法:借助生物信息学工具预测PCOS中的分子机制。采用qRT-PCR检测PCOS患者及对照组的血清和GCs中WWC2-AS1、miR-382-5p和FZD3的表达。CCK-8和流式细胞术观察WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3对GCs增殖和凋亡的影响。双荧光素酶报告实验验证WWC2-AS1和miR-382-5p、miR-382-5p和FZD3的互作用关系。结果:与对照组相比，PCOS患者的血清和GCs中WWC2-AS1和FZD3表达显著上调，miR-382-5p表达下调（均 P<0.05）。沉默WWC2-AS1能显著促进PCOS中的GCs增殖，抑制GCs凋亡（均 P<0.05）。PCOS中存在WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3互作用网络，miR-382-5p抑制剂或过表达FZD3均可部分逆转沉默WWC2-AS1对PCOS中GCs的调控作用（均 P<0.05）。 结论:本研究表明WWC2-AS1调控miR-382-5p上调FZD3在PCOS进展中促进GCs增殖，抑制细胞凋亡。WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3可能是治疗PCOS的有效分子靶点。

目的:探讨微小RNA（miR）-21、miR-29a和D-二聚体对心肌缺血再灌注的诊断价值。方法:回顾性分析浙江省乐清市人民医院2017年5月至2018年10月80例心肌缺血再灌注患者（缺血再灌注组）和80例行冠状动脉造影检查未发现冠状动脉狭窄病变患者（对照组）。缺血再灌注组患者均采用经皮冠状动脉介入疗法（PCI）治疗。缺血再灌注组于术前、术后1 d、术后5 d，对照组于入院当天，检测miR-21，miR-29a、D-二聚体、心肌肌钙蛋白（cTn）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）和N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平。结果:对照组miR-21、miR-29a、D-二聚体、cTn、hs-CRP和NT-proBNP分别为0.14 ± 0.03、0.19 ± 0.07、（123.2 ± 23.1）μg/L、（0.02 ± 0.01）μg/L、（0.65 ± 0.23）mg/L和（160 ± 78）ng/L；缺血再灌注组术前分别为0.36 ± 0.08、0.30 ± 0.05、（812.2 ± 95.7）μg/L、（0.48 ± 0.07）μg/L、（5.36 ± 2.67）mg/L和（853 ± 462）ng/L，术后1 d分别为0.31 ± 0.07、0.26 ± 0.04、（685.0 ± 29.3）μg/L、（0.41 ± 0.09）μg/L、（4.28 ± 1.59）mg/L和（560 ± 256）ng/L，术后5 d分别为0.22 ± 0.03、0.20 ± 0.04、（216.0 ± 27.6）μg/L、（0.30 ± 0.06）μg/L、（2.36 ± 0.78）mg/L和（382 ± 136）ng/L。缺血再灌注组术前及术后1、5 d miR-21、miR-29a、D-二聚体、cTn、hs-CRP和NT-proBNP水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（ P<0.05）；在缺血再灌注组中，术后1和5 d各指标均明显低于术前，术后5 d明显低于术后1 d，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:miR-21、miR-29a、D-二聚体、cTn、hs-CRP和NT-proBNP与患者临床心肌缺血再灌注状态密切相关。

目的:研究环状Wolf-Hirschhorn综合征候选基因1(circ-WHSC1)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响及分子机制。方法:收集2017年1月至2020年6月于郑州大学附属郑州中心医院手术治疗的23例鼻咽癌患者的癌组织和癌旁组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-WHSC1、miR-338-3p、果蝇胚胎致死视力异常样蛋白1(ELAVL1)mRNA的表达水平，Western blot检测ELAVL1蛋白的表达水平。将鼻咽癌细胞5-8F、SUNE1分为si-NC组、si-circ-WHSC1组、pCD5-ciR组、circ-WHSC1组、anti-miR-NC组、anti-miR-338-3p组、miR-NC组、miR-338-3p组、si-circ-WHSC1+anti-miR-NC组、si-circ-WHSC1+anti-miR-338-3p组、miR-338-3p+pcDNA组、miR-338-3p+ELAVL1组，采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性，克隆形成实验检测细胞克隆形成数及细胞放射敏感性，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测蛋白表达。采用双荧光素酶实验检测circ-WHSC1与miR-338-3p、miR-338-3p与ELAVL1的靶向关系。将稳定转染sh-circ-WHSC1的SUNE1细胞接种于裸鼠皮下，每隔3 d给予5 Gy红外线照射，23 d后测定移植瘤的体积和重量。结果:鼻咽癌组织中circ-WHSC1和ELAVL1 mRNA的表达水平分别为3.78±1.18和3.36±0.77，高于癌旁组织(1.57±0.94和1.28±0.74，均 P<0.001)；miR-338-3p mRNA的表达水平为1.37±0.98，低于癌旁组织(3.13±0.96， P<0.001)。鼻咽癌细胞C666-1、6-10B、5-8F和SUNE1中circ-WHSC1 mRNA的表达水平分别为1.64±0.14、2.00±0.21、2.81±0.26和3.36±0.34，均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.10，均 P<0.05)。鼻咽癌细胞5-8F和SUNE1中miR-338-3p mRNA的表达水平分别为0.48±0.08和0.38±0.07，均低于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08，均 P<0.001)；ELAVL1蛋白的表达水平分别为2.51±0.19和3.27±0.27，均高于鼻咽上皮细胞NP69(1.00±0.08，均 P<0.001)。与si-NC组比较，敲除circ-WHSC1后，鼻咽癌细胞的相对细胞活性降低[5-8F细胞：(51.33±8.62)%比(100.00±8.00)%；SUNE1细胞：(41.02±7.31)%比(100.00±10.10)%；均 P<0.01]，克隆形成数减少[5-8F细胞：(50.33±8.02)个比(101.00±8.54)个；SUNE1细胞：(42.33±10.01)个比(114.00±14.10)个；均 P<0.01]，细胞凋亡率升高[5-8F细胞：(18.3±1.01)%比(5.37±1.20)%；SUNE1细胞：(22.43±1.40)%比(6.50±1.18)%；均 P<0.01]，迁移数减少[5-8F细胞：(72.33±9.50)个比(136.00±13.00)个；SUNE1细胞：(62.67±11.50)个比(154.00±14.10)个；均 P<0.01]、侵袭数减少[5-8F细胞：(60.67±9.07)个比(113.67±11.59)个；SUNE1细胞：(50.33±9.01)个比(124.33±15.57)个；均 P<0.01]；8 Gy射线照射后，细胞存活分数降低[5-8F细胞：0.06±0.01比0.23±0.04；SUNE1细胞：0.05±0.02比0.32±0.07；均 P<0.05]。circ-WHSC1靶向负调控miR-338-3p的表达，抑制miR-338-3p可逆转敲除circ-WHSC1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。miR-338-3p靶向负调控ELAVL1的表达，ELAVL1过表达可逆转上调miR-338-3p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和放射敏感性的影响。裸鼠成瘤实验显示，与sh-NC组相比，细胞接种后23 d，sh-circ-WHSC1组小鼠肿瘤体积缩小[(487.33±76.51)mm 3比(884.67±95.63)mm 3， P<0.001]，肿瘤重量降低[(558.67±75.04)mg比(899.01±88.54)mg， P＝0.002)]；5 Gy红外线照射后，裸鼠肿瘤体积减小[(243.13±42.51)mm 3比(395.00±73.50)mm 3， P<0.001]，肿瘤重量降低[(211.09±57.51)mg比(452.33±67.30)mg， P＝0.015]。 结论:鼻咽癌组织和细胞中circ-WHSC1高表达。circ-WHSC1通过靶向作用于miR-338-3p/ELAVL1轴影响鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性。

目的:探讨幽门螺杆菌( H. pylori)诱导的人胃癌SGC-7901细胞源性外泌体中微小RNA(miRNA)的差异表达，为进一步阐明 H． pylori的致癌机制提供新线索。 方法:超高速离心法和试剂盒提取 H. pylori刺激组和对照组细胞释放的外泌体，采用透射电镜、纳米粒子跟踪分析和Western blot对外泌体进行鉴定；荧光染料PKH67标记的外泌体与THP-1源性巨噬细胞共孵育，共聚焦显微镜观察巨噬细胞内吞外泌体的情况；miRNA基因芯片分析两组细胞外泌体miRNA差异表达谱，采用qRT-PCR对其中4个差异表达miRNA进行验证；生物信息学软件预测、分析部分差异表达miRNA结合的靶基因及其功能和可能参与的信号通路。Cy3标记差异表达miR-382-5p，观察其能否通过外泌体传递给巨噬细胞；qRT-PCR和ELISA检测miR-382-5p mimic转染巨噬细胞表型分子CD206和细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达，流式细胞术分析表达CD206和HLA-DR的细胞比例。 结果:提取的外泌体符合外泌体形态，且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101；外泌体与THP-1巨噬细胞共孵育12 h后被细胞内吞；与对照组相比， H. pylori刺激组有上调miRNA 130个、下调miRNA 111个；部分差异表达miRNA预测的靶基因主要参与调节PI3K-AKT、NF-κB、JAK-STAT、干细胞多能性等炎症和肿瘤相关通路。miR-382-5p可通过外泌体传递给巨噬细胞，诱导巨噬细胞M2型表型分子CD206和细胞因子IL-10表达，并抑制TNF-α、IL-6表达，CD206 highHLA-DR low细胞比例升高。 结论:H． pylori处理SGC-7901细胞导致其外泌体miRNA表达水平发生显著改变。生物信息学预测结果显示，部分差异表达miRNA的靶基因产物在炎症和肿瘤相关信号通路调节中发挥重要作用。miR-382-5p具有诱导巨噬细胞向M2极化的潜能。

目的 探讨血清miR-382-5p在丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者中的表达及其联合甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、异常凝血酶原-Ⅱ(protein induced by vitamin K antagonist-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ)对HCC诊断的价值.方法 选取2019年1月至2022年3月保定市人民医院收治的102例HCV相关HCC患者(HCC组)、55例肝硬化患者(肝硬化组)和45例体检正常者(对照组)为研究对象,比较各组血清miR-382-5p、AFP及PIVKA-Ⅱ水平,比较不同临床特征HCC患者血清miR-382-5p的表达水平.应用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析血清miR-382-5p、AFP及PIVKA-Ⅱ水平对HCC的诊断价值.采用Pearson相关分析HCC患者血清miR-382-5p表达水平与AFP及PIVKA-Ⅱ的相关性.结果 HCC组血清miR-382-5p(6.83±2.51比3.15±1.08比1.82±0.76)、AFP[(527.10±73.26)μg/L比(22.84±9.25)μg/L比(3.17±0.36)μg/L]及PIVKA-Ⅱ[(352.64±69.12)mAU/ml比(21.73±6.90)mAU/ml比(18.30±4.27)mAU/ml]水平均显著高于肝硬化组和对照组(P均＜0.05).TNM分期Ⅲ～Ⅳ期(8.70±3.51比5.06±1.80)、Child-Pugh分级C级(8.14±2.90比5.62±1.91)、低分化(7.68±2.70比6.11±2.08)、门静脉癌栓(7.74±2.73比6.04±2.01)及远处转移(8.06±2.84比5.71±1.95)的HCC患者血清miR-382-5p表达水平显著升高(P均＜0.05).miR-382-5p、AFP及PIVKA-Ⅱ三项联合诊断HCC的ROC曲线下面积最大(0.980,95%CI:0.918～0.997),其敏感度最高(98.5%).相关分析显示,HCC患者血清miR-382-5p水平与AFP(r=0.795,P＜0.001)和PIVKA-Ⅱ(r=0.866,P＜0.001)均呈正相关.结论 血清miR-382-5p水平在HCV相关HCC患者中显著升高,联合AFP及PIVKA-Ⅱ检测可提高HCC的诊断价值.

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)诱导的人胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响及机制,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索.方法:超高速离心法和试剂盒提取H.pylori刺激组和对照组AGS细胞释放的外泌体,采用透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)和Western blot对外泌体进行鉴定;qRT-PCR检测H.pylori诱导的胃癌细胞AGS源性外泌体中miR-382-5p表达;将miR-382-5p mimic转染至THP-1巨噬细胞,Western blot检测巨噬细胞自噬标志物LC3Ⅱ、P62、Beclin-1的表达,免疫荧光检测自噬小体数量;Western blot检测PTEN蛋白、其下游蛋白PI3K、AKT、mTOR及其磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平;流式细胞术检测巨噬细胞表型分子CD206和HLA-DR表达水平;ELISA检测巨噬细胞上清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10和精氨酸酶1表达水平.结果:提取的外泌体符合外泌体形态,且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101;与空白对照组相比,H.pylori感染组AGS源性外泌体中miR-382-5p表达显著升高;miR-382-5p mimic转染导致巨噬细胞LC3、Beclin-1表达降低,P62表达升高,自噬小体数量降低;PTEN蛋白表达降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达明显增加.转染同时导致巨噬细胞M2型标志蛋白CD206表达增加,M1型标志蛋白HLA-DR表达降低;IL-10和精氨酸酶1表达增加,IL-6和TNF-α表达降低.抑制剂BEZ235预处理可部分逆转miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响.结论:H.pylori诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN基因,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化.

目的 探讨miRNA基因多态性与钠钾饮食干预后血压反应性之间的关系.方法 本课题组2004年从中国陕西宝鸡7个村庄的124个家庭中招募514名参与者进行慢性盐负荷试验干预,包括3 d基线期、7 d低盐饮食、7 d高盐饮食和7 d高盐补钾饮食干预.纳入19个miRNA-SNP位点进行分析研究.结果 在钠钾饮食干预过程中,受试者的血压在低盐期呈下降趋势,高盐期呈现上升趋势,而在高盐补钾后,血压则再次下降.在低盐期,miR-210-3p SNP rs12364149与收缩压反应性、舒张压反应性及平均动脉压反应性显著相关,miR-4638-3p SNP rs6601178与收缩压反应性显著相关,而miR-26b-3p SNPrs115254818与平均动脉压反应性显著相关.在高盐干预后,miR-26b-3p SNP rs115254818与收缩压反应性、舒张压反应性及平均动脉压反应性显著相关;miR-1307-5p SNP rs 11191676、rs2292807与收缩压反应性及平均动脉压反应性密切相关;miR-4638-3p SNP rs6601178、miR-210-3p SNP rs12364149以及miR-382-5p SNP rs4906032、rs4143957与收缩压反应性存在显著关联性.此外,在给予补钾干预后miR-26b-3p SNP rs115254818与收缩压反应性、舒张压反应性及平均动脉压反应性关联显著;miR-1307-5p SNP rs11191676、rs2292807以及miR-19a-3p SNP rss4284505与收缩压反应性显著相关.结论 miRNA基因多态性与血压钠钾反应性密切相关,提示miRNA基因可能参与血压盐敏感性及钾敏感性的形成.

本研究利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合数据库(GEO)下载获取甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC) mRNA表达谱芯片(7例PTC样本VS 7例正常组样本,登录号为GSM85-215～GSM85228)及miroRNA高通量测序数据(3例PTC样本VS 3例正常组样本,GSM 1388420～GSM 138-8425).通过Qlucore Omics Explorer (QOE) 3.2、DAVID 6.7、STING 9.1、miRecords等分析软件对PTC差异基因及microRNA进行综合生物信息学分析.筛选出来497个甲状腺乳头状癌相关致病基因及86个相关microRNAs;其中,致病基因中上调表达的有257个,下调表达的有240个;microRNAs中上调表达的有47个,下调表达的有39个.对其进行生物信息学分析发现,ERBB3、TNNT1、MYL1、POSTN基因及hsa-miR-183-5p (ERBB4)、hsa-miR-139-5p (SUV39H1)、hsa-miR-152 (MAML 1)、hsa-miR-1 (FOXD3)、hsa-miR-146b-5p(MEF2C)、hsa-miR-152 (DOT1L)、hsa-miR-493-5p (FBXW7)、hsa-miR-876-5p (PIK3R1)、hsa-miR-183-3p(MDM2)、hsa-miR-382-3p (CD80)、hsa-miR-18 lb-5p (SIRTl)、hsa-miR-874-5p (MTOR)、hsa-miR-876-5p(GPRC6A)等microRNAs-靶基因参与涉及ErbB信号通路、细胞凋亡信号通路、B细胞受体信号通路、磷脂酰肌醇代谢信号通路等,在PTC疾病发生发展中可能起着重要作用.从分子水平上分析甲状腺乳头状癌相关致病基因及microRNAs,为揭示PTC发病机制、药物研发及临床诊断治疗提供新的思路和依据.

目的 观察微小RNA-382-5p(miR-382-5p)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90(NF90)的表达.采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用.结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达(P＜0.05),过表达miR-382-@@5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡(P＜0.01).转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低(P＜0.01).荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3'非翻译区存在靶向关系(P＜0.01).结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关.

目的 研究miR-194-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的影响.方法 通过基因芯片方法,筛查出8份人瘢痕疙瘩与正常组织中差异性表达的miRNA.选取下调表达明显的miR-194-3p进行研究,通过miRDB预测其与RUNX2结合作用,并在人瘢痕疙瘩成纤维细胞(human keloid fibroblasts,HKFs)及第3代瘢痕疙瘩细胞中,分别通过荧光报告基因验证miR-194-3p与RUNX2间的作用.在2种细胞中分别通过Transwell实验检测miR-194-3p对成纤维细胞迁移的作用.Western blot及real-time PCR分析HKFs细胞中miR-194-3p对RUNX2及迁移相关蛋白金属基质蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)的作用.采用SPSS 19.0软件对结果 进行统计学分析,使用非配对t检验对各组进行比较,P<0.05为差异具有统计学意义.结果miR-721、miR-21-3p、miR-382-3p、miR-194-3p、miR-3107-5p和miR-144-5p在瘢痕疙瘩中存在异常表达的现象;miRDB软件分析显示,miR-194-3p与RUNX2存在靶向结合位点;报告基因实验证明,与对照组相比miR-194-3p能够抑制约50％的RUNX2活性(t=2.7764,P=0.0005).基因和蛋白水平实验发现,miR-194-3p能够显著抑制RUNX2及MMP2的表达,进而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移(t=2.7764,P<0.05).结论 瘢痕疙瘩中miR-194-3p可能通过抑制RUNX2的活性来抑制成纤维细胞的迁移.