目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-592在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理的相关性.方法:选取我院2018年1月到2019年12月收治的70例乳腺癌患者,分别采取患者的乳腺癌组织及癌旁组织进行免疫组化检测,检测miR-592表达水平.分析不同临床病理特征乳腺癌患者miR-592表达水平,采用Spearman相关性分析miR-592与乳腺癌临床病理的相关性.并对所有患者进行4年随访,记录乳腺癌患者的总生存时间,分析miR-592与乳腺癌生存期的关系.结果:乳腺癌组织miR-592相对表达量及阳性率明显低于癌旁组织(P＜0.05),免疫组化结果显示,乳腺癌组织显色比例明显低于癌旁正常组织;不同年龄、组织学类型、肿瘤大小、组织分化程度miR-592相对表达量对比无明显差异(P＞0.05),不同临床分期、淋巴结转移情况miR-592相对表达量对比差异显著(P＜0.05);Spearman相关分析结果表明,miR-592与乳腺癌临床分期、淋巴结转移呈负相关(P＜0.05);所有患者进行4年随访,miR-592高水平患者中位总生存时间为40.37(18.47～60.00)个月明显高于低水平患者中位总生存时间30.57(13.57～60.00)个月.结论:miR-592在乳腺癌组织中呈现低表达状态,与乳腺癌的临床分期、淋巴结转移情况相关,且miR-592低表达可能意味着乳腺癌患者预后不良.

目的 探究miR-592靶向调控PR结构域锌指蛋白5(PR domain zinc finger protein 5,PRDM5)影响肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)侵袭转移及自噬的机制.方法 RT-qPCR、蛋白质印迹检测RCC 组织和细胞中 miR-592、PRDM5 mRNA 和蛋白水平.A498、786-O 细胞分为 anti-miR-NC 组、anti-miR-592 组、anti-miR-592+si-NC 组、anti-miR-592+si-PRDM5 组.RNA 免疫共沉淀(RIP)检测 miR-592 和PRDM5的结合;CCK-8、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;透射电镜观察自噬小体形成;蛋白质印迹检测细胞PRDM5、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ水平.建立移植瘤裸鼠模型,分析敲低miR-592表达对移植瘤生长的影响.结果 RCC组织和细胞中PRDM5 mRNA和蛋白水平降低,miR-592水平增加(P＜0.05).敲低miR-592表达后,细胞A450 nm、迁移和侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9水平降低,自噬小体数量、Beclin1、LC3 Ⅱ/Ⅰ水平增加(P＜0.05).敲低PRDM5表达能部分逆转敲低miR-592对细胞增殖、侵袭及自噬的影响(P＜0.05).敲低miR-592表达能够抑制裸鼠移植瘤生长(P＜0.05).结论 miR-592通过靶向抑制PRDM5表达,促进RCC细胞增殖、侵袭转移能力,并抑制自噬能力.

目的:探讨靶向miR-592/PIK3CA的lncRNA-XIST对乳腺癌细胞裸鼠的作用机制.方法:选择2021年1月至2022年我院收集的20例乳腺癌组织及癌旁组织,对比lncRNA XIST、miR-592及PIK3CA的表达水平.培养MCF-10A、MCF-7、BT-549、MDA-MB468、HSS578T细胞,对比不同乳腺癌细胞中lncRNA XIST、miR-592及PIK3CA的表达.建立MCF-7裸鼠移植瘤模型建立,将其分为对照组、si-NC组、si-XIST组、pcDNA-NC组、pcDNA-XIST组,对比不同组荷瘤裸鼠生存情况及各组肿瘤体积、抑瘤率.使用Western blot法检测MMP-2、MMP-9、Bax蛋白表达,之后行双荧光素酶报告基因实验.结果:乳腺癌组织中的lncRNA XIST表达水平明显较癌旁组织低,miR-592、PIK3CA表达水平明显较癌旁组织高(P＜0.05).与MCF-10A正常乳腺癌细胞相比,MCF-7乳腺癌细胞中lncRNAXIST表达最低,miR-592、PIK3CA表达最高,选择MCF-7乳腺癌细胞作为研究对象行后续研究.对照组、si-NC组、pcDNA-NC组的肿瘤体积、肿瘤重量对比无统计学意义,si-NC组、pcDNA-NC组的抑瘤率对比无统计学意义(P＞0.05);si-XIST组的肿瘤体积、肿瘤重量明显增加(P＜0.05),抑瘤率为-40.04±5.24％,pcDNA-XIST组肿瘤体积、肿瘤重量明显降低(P＜0.05),抑瘤率为54.29±7.89％.对照组、si-NC组、pcDNA-NC组的MMP-2、MMP-9、Bax对比无统计学意义(P＞0.05);与对照组、si-NC 组、pcDNA-NC 组相比,si-XIST 组的 MMP-2、MMP-9 明显升高,Bax 明显降低,pcDNA-XIST 组的 MMP-2、MMP-9明显降低,Bax明显升高(P＜0.05).与mimic NC相比,miR-592 mimic组中XIST-WT、PIK3CA-WT细胞中荧光活性明显降低(P＜0.05),两组XIST-MUT、PIK3CA-MUT细胞中荧光活性对比无统计学意义(P＞0.05).结论:过表达XIST可能通过海绵化miR-592来调控PIK3CA表达水平,降低MMP-2、MMP-9水平,提高Bax水平,进而抑制MCF-7裸鼠皮下移植瘤的生长.

目的 明确甲基苯丙胺(METH)成瘾人群血浆中微RNA(miRNA)的表达水平和诊断效能,探讨其作为METH成瘾的生物学标志物的可能性,为METH成瘾的诊断和治疗发现潜在靶点.方法 建立METH成瘾小鼠条件位置偏爱模型,采用RNA-seq技术检测METH成瘾小鼠伏隔核(NAc)中miRNA的表达谱,筛选并验证差异miRNA.选取METH成瘾人群样本81例和健康对照样本78例,采用RT-qPCR技术,检测METH成瘾人群血浆中目标miRNA(miR-206-3p,miR-592,miR-9-3p,let-7b-3p和miR-155-3p)的表达水平,使用受试者工作特征(ROC)曲线检测miR-NA的诊断效能.结果 METH成瘾人群血浆中miR-206-3p,miR-592,miR-9-3p和let-7b-3p的表达水平明显高于健康对照(P＜0.05);目标miRNA的下游靶点主要富集在PI3K-Akt信号通路上,且该通路中的BDNF和IGF-1在METH成瘾人群血浆中含量显著降低,分别为8.225 μg·L-1,544.4 g·L-1(P＜0.01);miR-9-3p和miR-592联合诊断效能最高,曲线下面积(AUC)为 0.871(95%CI 为 0.806～0.935),最大截断点的特异性和灵敏度分别为78.5%和84.1%.结论 血浆中 miR-9-3p和 miR-592 联合判断METH成瘾的诊断效能较高,可望作为诊断METH成瘾的潜在生物学标志物.

目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37％:76.80％),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.

目的 探讨微小RNA-592(miR-592)对Janus激酶1( JAK1)表达的靶向调控作用及非小细胞肺癌( NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测NSCLC细胞系A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B的miR-592水平.经脂质体Lipofectamine 2000法向A549细胞转染miR-592模拟物(过表达组)和阴性对照(NC组)后采用QPCR检测miR-592水平,划痕实验和Transwell小室实验分别检测划痕愈合率和穿膜细胞数以评价迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-592对JAK1的靶向调控作用,Western blotting检测JAK1、磷酸化JAK1( p-JAK1)、磷酸化信号转导和转录激活因子3( p-STAT3)和基质金属蛋白酶-9( MMP-9)的蛋白水平.结果 QPCR 结果显示 A549 细胞的 miR-592 水平为0. 312±0. 097,低于BEAS-2B细胞的1. 062±0. 136(P＜0. 05);过表达组的miR-592相对表达量为6. 647±1. 847,高于NC组的1. 054±0. 168(P＜0. 05).过表达组的愈合率和穿膜细胞数分别为(27. 45±2. 51)%和(105. 2±15. 8)个,均低于NC组的(54. 45 ±3. 06)%和(312. 4±19. 2)个,差异有统计学意义(P＜0. 05). A549细胞中miR-592模拟物可抑制JAK1野生型3′非翻译区的相对荧光素酶活性,但对突变型JAK1的无影响.与NC组相比,过表达组的JAK1、p-JAK1、p-STAT3和MMP-9蛋白水平均下调(P＜0. 05).结论 miR-592负调控NSCLC细胞侵袭和迁移,可能与抑制JAK／STAT3信号通路活性有关,提示miR-592发挥抑癌作用且可能是NSCLC治疗的潜在靶标.

目的 探讨miR-592在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)自我更新及分化过程中的作用.方法 通过转染试剂将miR-592表达质粒转入mESCs,以过表达miR-592.利用qRT-PCR及Western印迹法分析miR-592对mESCs分化的影响.利用TargetScan数据库预测miR-592作用的靶基因,并通过双荧光素酶报告实验验证靶基因.利用Western印迹法探究miR-592及其靶基因对mESCs自我更新的影响.结果 qRT-PCR及Western印迹法实验结果表明miR-592促进mESCs向外胚层方向分化.生物信息学分析及双荧光素酶报告实验的结果表明Cep135是miR-592作用的靶基因,而Western印迹法实验发现Cep135能够促进mESCs的自我更新.结论 miR-592通过靶向下调Cep135的表达,以抑制mESCs的自我更新,进而促使mESCs向外胚层方向分化.

目的 探究微小RNA-592(miR-592)和Sry相关组蛋白9(SOX9)表达水平与结肠癌患者临床病理特征及预后的关系.方法 选取2010年2月至2016年2月在长武县人民医院治疗的结肠癌患者106例,术中收集患者结肠癌组织及相应癌旁组织(距肿瘤组织>5 cm).采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测其miR-592和SOX9 mRNA表达水平,并采用免疫组织化学染色法检测SOX9蛋白表达水平.采用Pearson法进行相关性分析,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox比例风险回归模型分析结肠癌患者不良预后发生的危险因素.结果 miR-592在结肠癌组织中表达水平为0.56±0.16,明显低于癌旁组织的0.99±0.30,差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中SOX9 mRNA表达水平及SOX9蛋白阳性表达率分别为2.38±0.74、64.15%,明显高于癌旁组织的1.01±0.32、16.03%,差异均有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中miR-592、SOX9表达水平与分化程度、浸润程度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05);miR-592低表达组患者3年总生存率为22.03%,明显低于高表达组的68.08%,差异有统计学意义(P<0.05);SOX9高表达组患者3年总生存率为42.11%,明显低于低表达组的76.32%,差异具有统计学意义(P<0.05);TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、miR-592低表达、SOX9高表达是影响结肠癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05);结肠癌组织中miR-592与SOX9 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.562,P<0.05).结论 结肠癌组织中miR-592低表达、SOX9高表达,与TNM分期、淋巴结转移等临床病理特征及3年生存率有关,两者可能共同参与结肠癌发生发展,影响患者预后.

目的 筛选并确定调控miR-592作用的关键lncRNA,探讨其对miR-592沉默靶基因cep135的调控作用.方法 利用lncRNA基因芯片筛选小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)及KO miR-592 mESCs中差异的lncRNA从而找出关键调控分子1ncRNA-135.利用转染试剂干扰lncRNA-135的表达,使用Western印迹法、双荧光素酶报告系统及免疫细胞化学染色等技术检测lncRNA-135对miR-592及其靶基因cep135的表达影响,进而阐明lncRNA-135对mESCs多能性的调控作用.结果 lncRNA基因芯片分离确定了527条差异表达的lncRNA,经过生物信息学分析及qRT-PCR验证,确定了评分最高的lncRNA-135为关键作用分子.双荧光素酶报告系统证实了1ncRNA-135能够结合miR-592以干扰其沉默靶基因cep135.而Western印迹法和免疫细胞化学染色结果则证实lncRNA-135通过作用于miR-592,阻止其对cep135的抑制作用,进而促进mESCs的多能性.结论 lncRNA-135可以通过充当miR-592的“分子海绵”从而调节与mESCs多能性维持有关的多个基因的表达,这将可能帮助建立调控性miRNA网络与mESCs多能性之间的联系.

本研究采用Illumina HiSeq 2500高通量测序技术对马尾松大径材和小径材进行小RNA分子测序,构建了6个小RNA文库,共检测到1.42×l07～1.59xl07条序列.鉴定得到1 567个miRNA,其中已知保守miRNA 783个,新miRNA 784个;差异表达miRNA 67个,其中31个在大径材马尾松中显著上调,36个显著下调.最终预测得到28 044个靶基因,67个差异表达miRNA对应592个靶基因,GO分析表明这些差异表达的miRNA主要参与了细胞组分、分子功能和生物过程中共计27个类别,KEGG分析表明它们参与了44种不同的途径.利用实时荧光定量PCR验证了4个差异表达miRNA的表达趋势与小RNA测序结果相似,且对其靶基因可能起负调控作用.结果表明某些miRNA (如miR171、miR397、novel-m0462-5p、novel-m0101-3p、novel-m0504-3p、novel-m0279-3p等)可能参与马尾松生长发育过程,对马尾松的次生生长、维管形成层发育过程、木质素生物合成和植物激素信号转导过程等多方面产生作用,从而造成马尾松大径材和小径材的差异.本研究为今后马尾松大径材的培育工作提供参考.