目的 研究miR-148a-3p对软骨细胞炎症因子、细胞凋亡和软骨细胞表型的影响.方法 2周龄大耳兔处死后提取原代软骨细胞.为了探究炎症对软骨细胞相关标志物及其胞内miR-148a-3p表达水平的影响,建立IL-1β-诱导的OA细胞模型,软骨细胞分为control组和IL-1β组.为了探究miR-148a-3p对软骨细胞相关标志物及细胞凋亡相关因子表达水平的影响,软骨细胞分为 blank 组、IL-1 β 组、IL-1 β+NC 组、IL-1 β+mimics 组、IL-1 β+inhibitor 组.qRT-PCR 检测 IL-1 β、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN、MMP-13 mRNA水平;采用免疫蛋白印迹法检测软骨相关标志物MMP-13、COL-Ⅱ、ACAN、SOX9以及细胞凋亡相关因子Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平.采用ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10的含量.结果 ①与control组比较,IL-1 β组细胞MMP-13蛋白表达升高(P＜0.05),COL-Ⅱ和ACAN蛋白表达降低(P＜0.05);miR-148a-3p表达水平升高(P＜0.000 1);②与blank组比较,IL-1β组细胞上清液IL-6水平升高,IL-10水平降低(P＜0.05);MMP-13 mRNA和蛋白表达升高(P＜0.05),COL-Ⅱ和ACAN mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).与IL-1β组比较,IL-1 β+mimics组细胞上清液IL-6水平、MMP-13 mRNA 和蛋白、Bax、Caspase-3 蛋白表达升高(P＜0.05);上清液 IL-10 水平、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN mRNA 和蛋白,以及Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05).IL-1β+inhibitor组和IL-1β组间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-1β诱导体外软骨细胞中miR-148a-3p表达上调,可导致软骨细胞炎症性改变、细胞凋亡、软骨细胞表型改变和细胞外基质(ECM)降解.

目的 探讨微小RNA(miR)-19b对冠心病大鼠血管内皮细胞损伤的影响及磷酸酶及张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路的作用.方法 选取72只大鼠随机分为正常组、模型组、模拟对照物(NC)组、miR-19b组、miR-19b+质粒互补DNA(pcDNA)3.1组、miR-19b+PTEN组.采用高脂饲料+垂体后叶素建立冠心病模型,尾静脉注射miR-19b mimic、pcDNA3.1-PTEN慢病毒液构建miR-19b、PTEN过表达大鼠.采用荧光定量聚合酶链反应检测冠状动脉组织miR-19b和PTEN信使RNA(mRNA)水平,测定大鼠心功能,观察大鼠冠状动脉病理变化,检测心肌组织细胞凋亡情况、血管内皮功能、冠状动脉中PTEN/PI3K/AKT信号通路、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase)-3、cleaved Caspase-9水平.分离培养冠心病大鼠冠状动脉内皮细胞,根据转染方式分为野生型质粒(WT)+NC组、WT+miR-19b mimic组、突变型质粒(MUT)+NC组、MUT+miR-19b mimic组,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-19b与PTEN的靶向关系.将冠心病大鼠冠状动脉内皮细胞分为正常细胞组、NC细胞组和miR-19b细胞组,检测PTEN mRNA和PTEN蛋白水平.结果 miR-19b组左心室射血分数(LVEF)、miR-19b、血清血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)/PI3K蛋白、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT蛋白水平高于模型组,左心室收缩末期容积(LVESV)、舒张末期容积(LVEDV)、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3 和 cleaved Caspase-9、PTEN mRNA、内皮素-1(ET-1)、PTEN 蛋白水平低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-19b+PTEN 组 LVESV、LVEDV、细胞凋亡率、PTEN mRNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、ET-1、VEGF、PTEN 蛋白水平高于 miR-19b 组,LVEF、NO、p-PI3K/PI3K 蛋白和p-AKT/AKT蛋白水平低于miR-19b组,差异均 有统计 学意义(P＜0.05).模型组LVEF、miR-19b、VEGF、NO、p-PI3K/PI3K蛋白、p-AKT/AKT蛋白水平低于正常组,LVESV和LVEDV、细胞凋亡率、PTEN mRNA、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、ET-1、PTEN蛋白水平高于正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与正常组比较,模型组大鼠冠状动脉内皮细胞排列紊乱,并伴有明显的水肿.与模型组比较,miR-19b组冠状动脉组织病理损伤明显减轻.WT+miR-19b mimic组细胞中荧光素酶相对活性低于 WT+NC组、MUT+NC 组、MUT+miR-19b mimic 组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-19b mimic 细胞组 PTEN mRNA和PTEN蛋白水平低于正常细胞组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-19b靶向抑制PTEN,激活PI3K/AKT信号通路,保护冠心病大鼠心功能和血管内皮功能,减少心肌细胞凋亡.

目的:探讨lncRNA HCP5 靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5 和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞.将抑制 HCP5 表达的质粒si-HCP5 及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5 和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13 细胞.采用CCK-8 法和Transwell 实验检测SCC13 细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 蛋白表达水平.通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5 和miR-409-3p的靶向关系.结果:SCC13 细胞中HCP5 表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05).抑制HCP5 表达后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).过表达miR-409-3p后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示 lncRNA HCP5 和miR-409-3p存在靶向关系.抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5 低表达对SCC13 细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05).结论:抑制HCP5 可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨hsa_circ_0001776与miR-1265在肺鳞状细胞癌（鳞癌）中的作用及机制。方法:收集2020—2022年于唐山市人民医院治疗的肺鳞癌患者血浆和健康人血浆。肺鳞癌组织芯片和癌旁正常组织芯片于2022年购自上海芯超生物科技有限公司。采用实时定量聚合酶链式反应检测hsa_circ_0001776在肺鳞癌血浆、组织及细胞中的表达情况，荧光原位杂交验证hsa_circ_0001776在肺鳞癌细胞NCI-H1703中的定位。体外培养肺鳞癌细胞NCI-H1703、NCI-H226，分为circ-NC组、过表达hsa_circ_0001776组、miR-NC组、miR-1265 mimic组、过表达hsa_circ_0001776+miR-NC组和过表达hsa_circ_0001776+miR-1265 mimic组，采用细胞计数试剂盒8法、细胞克隆形成实验、Transwell实验和划痕实验以及流式细胞术分别检测过表达hsa_circ_0001776、过表达miR-1265以及过表达hsa_circ_0001776和miR-1265 mimic的挽救实验对肺鳞癌细胞NCI-H1703和NCI-H226的增殖、克隆、侵袭、迁移和凋亡的影响。通过circular RNA Interactome网站预测hsa_circ_0001776下游的miR-1265，双荧光素酶报告基因实验确定hsa_circ_0001776、miR-1265之间的相互作用，裸鼠皮下成瘤实验检测稳定过表达hsa_circ_0001776的NCI-H1703细胞对移植瘤生长的影响。结果:荧光原位杂交结果显示，肺鳞癌组织中hsa_circ_0001776的荧光强度低于癌旁组织，肺鳞癌组织中miR-1265荧光强度高于癌旁组织（均 P＜0.05）。肺鳞癌患者血浆中hsa_circ_0001776的表达水平低于健康人血浆，miR-1265表达水平高于健康人血浆（均 P＜0.05）。肺鳞癌细胞NCI-H1703、NCI-H226和SK-MES-1中hsa_circ_0001776的表达水平均低于支气管上皮细胞BEAS-2B（均 P＜0.05），miR-1265在NCI-H1703、NCI-H226中的相对表达水平高于人支气管上皮细胞BEAS-2B（均 P＜0.05）。hsa_circ_0001776低表达与肺鳞癌患者的年龄、淋巴结转移、临床分期以及肿瘤分期有关（均 P＜0.05）。荧光原位杂交结果显示，hsa_circ_0001776主要在细胞质中表达。双荧光素酶报告实验结果表明，miR-1265与hsa_circ_0001776存在互补结合位点。过表达hsa_circ_0001776组NCI-H1703、NCI-H226细胞吸光度值均低于circ-NC组（均 P＜0.05）。过表达hsa_circ_0001776组细胞克隆数为（52±3）个、（53±4）个，迁移细胞数为（476±17）个、（113±7）个，侵袭细胞数为（100±2）个、（184±2）个，细胞迁移率为（25.00±4.36）%、（36.02±5.55）%，均低于circ-NC组［分别为（104±4）个和（106±2）个，（783±29）个和（517±16）个，（657±45）个和（473±9）个，（48.95±8.69）%和（48.70±1.57）%，均 P＜0.05］。过表达hsa_circ_0001776组细胞凋亡率分别为（24.77±2.30）%和（19.67±1.16）%，均高于circ-NC组［分别为（11.83±1.15）%和（9.50±0.66）%，均 P＜0.05］。miR-1265 mimic组NCI-H1703、NCI-H226细胞吸光度值均高于miR-NC组（均 P＜0.05）。miR-1265 mimic组细胞克隆数为（56±13）个和（51±8）个，迁移细胞数为（556±13）个、（405±6）个，侵袭细胞数为（486±6）个、（359±7）个，细胞迁移率为（68.56±5.51）%、（81.74±8.04）%，均高于miR-NC组［分别为（31±4）个和（21±8）个，（154±19）个和（186±5）个，（227±6）个和（176±7）个，（25.83±4.26）%和（53.12±4.14）%，均 P＜0.05］。miR-1265 mimic组细胞凋亡率分别为（11.83±2.55）%、（17.50±1.05）%，均低于miR-NC组［分别为（32.67±4.44）%、（39.90±2.88）%，均 P＜0.05］。过表达hsa_circ_0001776+miR-1265 mimic组中NCI-H1703、NCI-H226吸光度值均高于过表达hsa_circ_0001776+miR-NC组（均 P＜0.05）。过表达hsa_circ_0001776+miR-1265 mimic组细胞克隆数为（128±15）个和（133±8）个，迁移细胞数为（623±10）个和（310±7）个，侵袭细胞数为（643±16）个和（420±7）个，细胞迁移率为（66.39±4.46）%和（68.60±3.53）%，均高于过表达hsa_circ_0001776+miR-NC组［分别为（86±7）个和（80±16）个，（380±11）个和（115±5）个，（152±7）个和（94±4）个，（31.41±5.91）%和（30.94±0.67）%，均 P＜0.05］。过表达hsa_circ_0001776+miR-1265 mimic组细胞凋亡率分别为（19.27±0.15）%和（11.53±0.75）%，均低于过表达hsa_circ_0001776+miR-NC组［分别为（27.77±1.29）%和（18.43±0.71）%，均 P＜0.05］。裸鼠皮下成瘤实验结果显示，过表达hsa_circ_0001776组肿瘤的体积低于circ-NC组（ P＜0.05）。 结论:肺鳞癌中hsa_circ_0001776呈低表达，hsa_circ_0001776通过靶向miR-1265可抑制肺鳞癌的发展。

目的:探讨外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）源性外泌体经miR-1306改善子宫内膜容受性的机制。方法:运用皮下注射米非司酮制备着床障碍小鼠模型并分为着床障碍组、PBMCs干预组，同时设置正常组，每组12只。PBMCs干预组给予宫腔注射PBMCs源性外泌体干预，正常组和着床障碍组宫腔注射等体积缓冲液，比较各组小鼠的妊娠率和着床点数，RT-PCR法检测子宫内膜组织miR-1306表达，酶联免疫吸附试验检测子宫内膜组织活性氧（reactive oxygen species，ROS）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、单核细胞趋化因子-1（monocyte chemcattractant protein-1，MCP-1）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平，Western blotting法检测小鼠子宫内膜组织中妊娠相关蛋白表达。将子宫内膜上皮细胞分为对照组、实验组、阴性对照组、miR-1306 inhibitor组，除对照组外余下各组细胞均采取Transwell共培养PBMCs源性外泌体，使用MTT法、Edu法、Annexin-V/PI流式法分别检测细胞活性、增殖和凋亡情况，试剂盒检测细胞ROS水平，Western blotting检测相关蛋白表达。结果:着床障碍组小鼠妊娠率［8.33%（1/12）］、着床点数［0（0，0）个］和子宫内膜组织miR-1306表达（0.24±0.05）、SOD水平［（5.66±0.72）U/mL］均显著低于正常组［100%（12/12）、16.50（14.00，19.00）个、1.03±0.05、（8.69±1.21）U/mL，均 P<0.05］；子宫内膜组织ROS水平［（4.87±0.39）U/mL］、IL-6水平［（116.51±5.78）ng/L］、MCP-1水平［（36.84±3.56）μg/L］和KIR2DL4（0.87±0.06）、核因子红细胞2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2，0.76±0.06）、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1，0.79±0.05）、受体相互作用蛋白酶1（receptor interacting protein 1，RIP1，0.94±0.04）和RIP3蛋白（0.86±0.05）表达水平均显著高于正常组［（2.41±0.19）U/mL、（83.79±6.68）ng/L、（12.32±2.09）μg/L、0.27±0.03、0.31±0.05、0.23±0.04、0.34±0.03、0.31±0.05，均 P<0.05］。PBMCs干预组小鼠妊娠率［75.00%（9/12）］、着床点数［13.00（13.00，14.75）个］和子宫内膜组织miR-1306表达（0.82±0.05）、SOD水平［（7.24±0.84）U/mL］均显著高于着床障碍组（均 P<0.05）；子宫内膜组织ROS［（3.43±0.30）U/mL］、IL-6［（94.69±3.99）ng/L］、MCP-1水平［（27.03±3.48）μg/L］和KIR2DL4（0.54±0.08）、Nrf2（0.48±0.05）、Keap1（0.43±0.05）、RIP1（0.56±0.05）、RIP3蛋白表达（0.49±0.03）均显著低于着床障碍组（均 P<0.05）。实验组细胞活性［（126.63±1.25）%］、增殖率［（53.54±2.82）%］和ROS水平［（3.12±0.31）U/mL］均显著高于对照组［100%、（23.18±3.07）%、（2.51±0.28）U/mL，均 P<0.05］，凋亡率［（5.69±0.47）%］、KIR2DL4（0.36±0.06）、Nrf2（0.30±0.06）、Keap1（0.26±0.04）、RIP1（0.27±0.05）和RIP3蛋白表达（0.26±0.06）均低于对照组［（27.13±2.97）%、0.84±0.06、0.75±0.05、0.68±0.05、0.80±0.06、0.80±0.07，均 P<0.05］。miR-1306 inhibitor组细胞活性［（83.48±5.34）%］、增殖率［（38.42±4.28）%］均显著低于阴性对照组［（127.12±4.08）%、（53.57±2.09）%，均 P<0.05］，细胞凋亡率［（13.63±1.77）%］、ROS水平［（6.49±0.62）U/mL］、KIR2DL4（0.67±0.07）、Nrf2（0.57±0.05）、Keap1（0.50±0.05）、RIP1（0.64±0.06）和RIP3蛋白表达（0.61±0.08）均显著高于阴性对照组［（5.71±0.78）%、（3.23±0.31）U/mL、0.36±0.07、0.30±0.07、0.27±0.06、0.28±0.07、0.28±0.06，均 P<0.05］。 结论:PBMCs源性外泌体可以提高着床障碍小鼠妊娠率，可能是通过促进miR-1306表达、抑制KIR2DL4表达以改善炎症反应，还与缓解子宫内膜过度氧化应激和细胞凋亡有关。

目的:探讨布比卡因对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:分别使用浓度为100（BUP组）、300、600、1 000 μmol/L的布比卡因处理H1299细胞，未使用布比卡因处理的设为对照组。分别将miR-NC、miR-381-3p、si-NC、si-HERC4、anti-miR-NC、anti-miR-381-3p转染至H1299细胞中，其中转染anti-miR-NC和anti-miR-381-3p的细胞再使用100 μmol/L布比卡因进行处理，分别记为miR-NC组、miR-381-3p组、si-NC组、si-HERC4组、BUP+anti-miR-NC组、BUP+anti-miR-381-3p组。qRT-PCR检测miR-381-3p和HERC4 mRNA的表达水平，免疫印迹法检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、p21等蛋白表达，MTT法检测细胞增殖抑制率，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-381-3p对HERC4的靶向调控作用。结果:与对照组比较，随着布比卡因浓度增加，细胞增殖抑制率显著升高，细胞迁移和侵袭数量显著降低；且miR-381-3p表达水平显著升高，HERC4 mRNA和蛋白表达水平显著降低（均 P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测实验和免疫印迹显示，miR-381-3p靶向负调控HERC4的表达。过表达miR-381-3p或抑制HERC4表达均可抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而下调miR-381-3p表达可逆转布比卡因对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。 结论:布比卡因可抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，其机制可能与调控miR-381-3p/HERC4的表达有关。

目的:建立人真皮成纤维细胞（HDF）高糖老化模型，探讨人蜕膜间充质干细胞（dMSC）来源外泌体对高糖老化HDF增殖、迁移、凋亡的影响及其可能机制。方法:采用实验研究方法。收集2021年1—3月解放军总医院第四医学中心收治的4例男性包茎患者（18~22岁）环切术后废弃包皮组织，分离培养获取原代HDF。取第6代HDF，按照随机数字表法分为低糖组和高糖组，分别采用低糖完全培养基和高糖完全培养基进行每72小时换液、不传代培养，10 d后取细胞，于接种后24 h，采用β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老情况；于接种后48 h，采用蛋白质印迹法检测细胞衰老相关蛋白p16、p53表达情况；于接种后24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞增殖情况；于接种后48 h，采用脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测细胞增殖情况，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况；于接种后24 h，采用Transwell实验测定细胞迁移能力。取人dMSC培养48~72 h，采用差速高速离心法获取其外泌体，采用透射电子显微镜观察dMSC外泌体形态，采用纳米颗粒追踪分析法检测dMSC外泌体的粒径分布，采用蛋白质印迹法检测dMSC外泌体标志蛋白CD9、肿瘤易感基因101（TSG101）的表达。取dMSC外泌体及前述高糖完全培养基诱导老化的HDF共孵育24 h，采用PKH67试剂盒检测细胞摄取外泌体的情况。取前述高糖完全培养基诱导老化的HDF，同前分为单纯高糖组、高糖+低浓度外泌体组、高糖+高浓度外泌体组，分别于高糖完全培养基中加入等体积的磷酸盐缓冲液、终质量浓度为50 μg/mL dMSC外泌体、终质量浓度为100 μg/mL dMSC外泌体进行常规细胞培养。分组后同前于对应时间点采用CCK-8法和EdU染色法、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期和凋亡及细胞迁移情况。根据前述结果，另取经高糖完全培养基诱导老化的HDF，分为单纯高糖组、高糖+高浓度外泌体组并同前处理。分组培养48 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测单纯高糖组和高糖+高浓度外泌体组细胞衰老相关的微小RNA-145-5p（miR-145-5p）、miR-498、miR-503-5p及其靶基因钙/钙调素依赖性蛋白激酶1D（CAMK1D）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（ PTEN基因）和细胞周期蛋白D1的mRNA表达情况。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验和独立样本 t检验。 结果:接种后24 h，高糖组HDF β-半乳糖苷酶阳性染色率为（38.4±4.2）%，明显高于低糖组的（16.5±2.2）%（ t=4.65， P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF的衰老相关蛋白p16和p53的表达量均明显高于低糖组（ t值分别为11.85、3.02， P<0.05或 P<0.01）。接种后24、48、72 h，高糖组HDF的增殖活性均明显低于低糖组（ t值分别为4.13、9.90、15.12， P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF的EdU阳性染色率明显低于低糖组（ t=3.83， P<0.05）。接种后48 h，高糖组HDF周期的G2/M+S亚群在3个亚群（G0/G1、S和G2/M）的占比明显低于低糖组（ t=8.74， P<0.01）。接种后24 h，高糖组HDF穿过Transwell滤膜到达下室的细胞数量为（37±6）个，明显少于低糖组的（74±7）个（ t=8.42， P<0.01）。接种后48 h，高糖组HDF凋亡率明显高于低糖组（ t=8.48， P<0.01）。dMSC外泌体为边缘清晰、大小分布均匀的杯状或者圆形囊泡，粒径基本处于80~200 nm。dMSC外泌体标志性蛋白CD9、TSG101表达均呈阳性。共孵育24 h，外泌体被HDF摄入胞内，主要分布于细胞核周围。分组培养24、48、72 h，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF增殖活性均明显高于单纯高糖组（ t值分别为6.36、6.10、7.76，8.92、12.17、10.74， P<0.01），高糖+高浓度外泌体组HDF增殖活性均明显高于高糖+低浓度外泌体组（ t值分别为7.92、4.82、4.72， P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF EdU阳性染色率均明显升高（ t值分别为5.32、9.88， P<0.01）；与高糖+低浓度外泌体组比较，高糖+高浓度外泌体组HDF EdU阳性染色率显著升高（ t=5.27， P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF中的G0/G1期亚群占比均显著降低（ t值分别为3.81、4.31， P<0.05），G2/M+S亚群占比均明显升高（ t值分别为3.81、4.31， P<0.05）。分组培养24 h，与单纯高糖组相比，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF穿过滤膜的数量均明显增多（ t值分别为10.14、13.39 ，P<0.01）；与高糖+低浓度外泌体组相比，高糖+高浓度外泌体组HDF穿过滤膜的数量明显增多（ t=6.27 ，P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组比较，高糖+低浓度外泌体组和高糖+高浓度外泌体组HDF凋亡率均明显降低（ t值分别为3.72、5.53， P<0.05或 P<0.01）。分组培养48 h，与单纯高糖组相比，高糖+高浓度外泌体组HDF的miR-145-5p、miR-498 mRNA表达量均明显上升（ t值分别为13.03、8.90， P<0.01），miR-503-5p mRNA表达量明显下降（ t=3.85， P<0.05）；高糖+高浓度外泌体组中HDF的CAMK1D、 PTEN基因mRNA表达量均明显低于单纯高糖组（ t值分别为8.83、5.97， P<0.01），细胞周期蛋白D1 mRNA表达量明显高于单纯高糖组（ t=4.03， P<0.05）。 结论:人dMSC来源外泌体可显著提高高糖老化HDF的增殖和迁移能力，抑制其凋亡。这可能与HDF内miR-145-5p和miR-498表达增高抑制了CAMK1D和 PTEN基因的表达及miR-503-5p表达下降促进了细胞周期蛋白D1的表达有关。

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)源性外泌体中微小RNA(miR)-25参与促进食管癌细胞转移的作用及机制。方法:获取新鲜食管癌及癌旁组织，通过贴壁法分别获得CAFs和成纤维细胞(NFs)，蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达进行鉴定。用超速离心法提取CAFs和NFs的外泌体，用Western blot和透射电镜对外泌体进行鉴定，采用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管癌组织和癌旁组织中miR-25的表达，结果用配对样本 t检验进行统计学分析。同时用RT-qPCR检测CAFs、NFs和相应外泌体，以及外泌体共培养的食管癌TE-1中miR-25的表达，并将外泌体与TE-1共培养后检测TE-1迁移侵袭能力。Western blot及荧光素酶实验明确miR-25的靶基因，结果用非配对样本 t检验进行统计学分析。 结果:RT-qPCR结果提示，与癌旁组织比较，食管癌组织中高表达miR-25( n＝30， t＝ 3.46， P<0.05)；miR-25在CAFs中的表达高于NFs( t＝5.37， P<0.05)；免疫荧光结果提示，相较于NFs，CAFs中α-SMA、Vimentin荧光信号增强；Western blot结果提示外泌体中表达CD9和TSG101蛋白，且透射电镜鉴定符合外泌体特征；RT-qPCR结果提示，CAFs源性外泌体中miR-25的表达高于NFs外泌体( t＝5.45， P<0.05)。Transwell实验表明，NFs外泌体与TE-1共培养组，每视野TE-1迁移细胞数为(202.700±17.840)个，CAFs外泌体与TE-1共培养组为(558.000±19.430)个( t＝13.47， P<0.01， n＝3)；NFs外泌体与TE-1共培养组，每视野TE-1侵袭细胞数为(174.000±10.070)个，CAFs外泌体与TE-1共培养组为(428.000±8.888)个( t＝18.91， P<0.01， n＝3)；miR-NC转染TE-1组，每视野TE-1迁移细胞数为(68.000±2.082)个，miR-25 mimics转染TE-1组为(379.000±6.083)个( t＝48.37， P<0.01， n＝3)；miR-NC转染TE-1组，每视野TE-1侵袭细胞数为(40.000±2.082)个，miR-25 mimics转染TE-1组为(254.000±2.000)个( t＝74.13， P<0.01， n＝3)，进一步荧光素酶报告基因结果显示，过表达miR-25可降低58%的PTEN 3’UTR野生型的荧光素酶活性(野生型： t＝7.19， P<0.05)，证实miR-25可靶向促进PTEN的表达。 结论:CAFs外泌体miR-25能够通过激活PTEN信号通路，而促进食管癌细胞的远处转移。

目的:探讨AR如何通过调控微小RNA(miRNA，miR)-9-5p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)通路，从而影响胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的侵袭。方法:对PDAC组织和相应非肿瘤组织样本的分析。我们通过在PDAC细胞系PANC-1、BxPC-3细胞中过表达或敲低AR，用Transwell方法观察AR对PANC-1、BxPC-3及侵袭的影响。通过生信分析寻找能够调控靶基因NDRG1表达的miRNA，并用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证该miRNA与NDRG1的调控关系，观察其对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭的影响。通过转染miR-9-5p和NDRG1等基因来评估对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭能力的影响，采用 t检验比较各组间差异。 结果:相对于载体对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Ctrl)，过表达AR促进了PDAC细胞(PANC-1、BxPC-3-oeAR)的PDAC细胞侵袭(0.65±0.07比2.11±0.52、0.74±0.05比2.28±0.65)，差异有统计学意义( t＝21.160、10.120， P<0.05)。相对对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Scr)，敲除AR抑制了PDAC细胞的侵袭(PANC-1-shAR、BxPC-3-shAR)(0.75±0.12比0.34±0.02、0.84±0.13比0.44±0.03)差异有统计学意义( t＝45.117、13.155， P<0.01)。miR-9-5p模拟物能显著抑制AR过表达PDAC细胞PANC-1、BxPC-3的侵袭能力(0.67±0.06比2.25±0.22、0.88±0.07比2.07±0.32， t＝15.124、8.156， P<0.05)，而miR-9-5p抑制剂则能增强对照组细胞的侵袭能力(1.64±0.23比0.75±0.09、1.48±0.26比0.84±0.15， t＝11.143、9.175， P<0.05)。PDAC组织里，miR-9-5p的产量明显低于正常胰腺组织(0.23±0.02比1.58±0.57， t＝8.122， P<0.05)。利用双荧光素酶基因报告实验，我们更深入地肯定了miR-9-5p直接影响NDRG1的3’非翻译区(3’UTR)，以此压低其表达。miR-9-5p的过表达显著降低了NDRG1蛋白水平(0.76±0.04比0.42±0.22， t＝7.143、11.106， P<0.05)，而miR-9-5p的抑制剂则提高了NDRG1蛋白表达(0.46±0.02比1.22±0.26， t＝6.121、15.106， P<0.05)。oeAR显著增加了NDRG1的表达(0.37±0.02比1.56±0.45， t＝8.197、8.996， P<0.05)，而AR的抑制则减少了NDRG1的表达(0.66±0.05比0.22±0.04， t＝11.751、6.196， P<0.05)。过表达NDRG1显著抑制PDAC细胞的侵袭能力(1.13±0.12比0.42±0.06， t＝5.175、7.776， P<0.05)。NDRG1敲除PDAC细胞侵袭能力显著升高(0.56±0.06比1.36±0.27， t＝16.151、17.135， P<0.01)。 结论:雄激素受体通过miR-9-5p/NDRG1通路抑制PDAC细胞侵袭的机制，为PDAC的治疗提供治疗策略。

目的:研究微小RNA-16-5p（miR-16-5p）对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质印迹法（Western blotting法）检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞MG63、Saos2、HOS内miR-16-5p、四分子交联体15（TSPAN15）mRNA和蛋白表达。在MG63细胞中转染miR-16-5p或si-TSPAN15，观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖，Transwell法检测细胞迁移和侵袭，Western blotting法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、TSPAN15、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达。Starbase网站预测结合双荧光素酶基因报告实验分析miR-16-5p与TSPAN15的靶向关系。将miR-16-5p和pcDNA-TSPAN1共转染，评估高表达TSPAN15对过表达miR-16-5p诱导的MG63细胞增殖、迁移和侵袭的影响。两组间数据的比较采用 t检验。 结果:与hFOB 1.19细胞（1.00±0.12）相比，MG63、Saos2、HOS细胞中miR-16-5p表达量（分别为0.32±0.05、0.40±0.04、0.45±0.06）明显降低（ F=156.204， P<0.05），TSPAN15 mRNA和蛋白水平显著提高（ F=71.718、110.350，均 P<0.05）。过表达miR-16-5p明显减少MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量及细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量（ F=150.136、117.228、154.971、89.479、98.373、130.880，均 P<0.05）。敲减TSPAN15明显降低MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量（ F=93.206、107.030、109.326、115.625、146.113、139.300，均 P<0.05）。过表达miR-16-5p显著降低MG63细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白表达量（ F=156.755、181.419，均 P<0.05）。miR-16-5p靶向调控TSPAN15的表达。高表达TSPAN15可部分逆转miR-16-5p对MG63细胞内TSPAN15、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-AKT蛋白表达、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量的抑制作用。 结论:miR-16-5p通过靶向TSPAN15基因并调控PI3K/AKT信号通路，从而抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。