目的 探讨川楝素(TSN)调控微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)通路的影响.方法 使用0、10、20、40、80和160 μmol/L的TSN处理PC3细胞,采用噻唑蓝法检测PC3细胞存活率,选择最佳药物浓度.将细胞分为对照组(Control组)、TSN低浓度组(TSN-L组)、TSN中浓度组(TSN-M组)、TSN高浓度组(TSN-H组)、TSN高浓度+miR-409-3p拮抗剂阴性对照组(TSN-H+antagomiR-NC组)、TSN高浓度+miR-409-3p拮抗剂组(TSN-H+antagomiR-409-3p组).采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PC3细胞中miR-409-3p表达;EdU法检测PC3细胞增殖水平;Transwell小室实验和划痕愈合实验检测PC3细胞的侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinDl)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、VEGF、VEGFR2 蛋白表达.结果 与 0 μmol/L 比较,10、20、40、80 和 160 μmol/L 的 TSN 细胞存活率显著降低(P＜0.05),选择20、40、80 μmol/L的TSN用于后续实验.与Control组比较,TSN-L组、TSN-M组和TSN-H组PC3细胞EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、CyclinDl、CDK4、VEGF、VEGFR2蛋白表达显著降低(P＜0.05),miR-409-3p表达显著增加(P＜0.05),且呈浓度依赖性.与TSN-H+antagomiR-NC组比较,TSN-H+antagomiR-409-3p组PC3细胞EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、CyclinDl、CDK4、VEGF、VEGFR2蛋白表达显著增加(P＜0.05),miR-409-3p表达显著降低(P＜0.05).结论 TSN通过上调miR-409-3p表达抑制VEGF/VEGFR2通路的激活,进而抑制PC3细胞增殖、迁移、侵袭.

目的:探讨连翘苷对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对环状RNA_0054537(circ_0054537)/微小RNA(miRNA，miR)-409-3p的调控作用。方法:体外培养肝癌细胞Hep3B，使用不同剂量(5、10、20 μmol/L)的连翘苷处理Hep3B细胞；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力；采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0054537、miR-409-3p的表达量；双荧光素酶报告实验检测circ_0054537、miR-409-3p的靶向关系；Hep3B细胞中分别转染si-circ_0054537、pcDNA-circ_0054537，采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:连翘苷可明显降低细胞活力[(1.276±0.110)个比(1.031±0.090)、(0.637±0.050)、(0.507±0.040)个， F＝244.841， P<0.05]，增高凋亡率[(7.34±0.62)%比(12.44±1.03)%、(22.86±2.12)%、(28.16±2.71)%， F＝244.841， P<0.05]，减少迁移细胞数[(154.15±12.76)个比(124.06±10.04)、(78.05±7.25)、(61.13±5.83)个]及侵袭细胞数[(112.04±10.08)个比(89.43±8.13)、(57.11±5.12)、(43.08±4.05)个， F＝186.018、166.514， P<0.05]，抑制circ_0054537的表达[(1.00±0.10)比(0.40±0.04)， t＝16.713， P<0.05]，促进miR-409-3p的表达[(1.02±0.11)比(3.42±0.31)， t＝21.889， P<0.05]；转染si-circ_0054537可明显抑制细胞活力[(1.264±0.10)比(0.686±0.06)]、迁移[(151.96±11.17)比(79.03±7.21)]及侵袭能力[(115.28±11.05)比(68.14±6.43)， t＝14.869、16.457、11.062， P<0.05]，增高凋亡率[(7.26±0.71)%比(23.79±2.06)%， t＝22.759， P<0.05]；双荧光素酶报告实验证实circ_0054537可靶向结合miR-409-3p；转染pcDNA-circ_0054537可明显逆转连翘苷对Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的调控作用。 结论:连翘苷可通过下调circ_0054537的表达而上调miR-409-3p的表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及促进细胞凋亡。

目的 用生物信息学方法预测脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的上游调控miRNA,体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa,了解微小核糖核酸-409-3p(miR-409-3p)是否通过抑制FABP4的表达水平,进而影响Ishikawa细胞的生物学行为.方法 实验分为control组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p inhibitor组、miR-409-3p NC组、FABP4-OE组及FABP4-shRNA组6组,采用实时定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测miR-409-3p及FABP4在Ishikawa中的表达情况;采用细胞增殖实验(CCK-8)、细胞侵袭及迁移实验(Transwell法)检测miR-409-3p与FABP4对Ishikawa细胞增殖、侵袭以及迁移能力的影响;用双荧光素酶报告基因实验在Ishikawa细胞中检测miR-409-3p对FABP4的调控作用.结果 1)在Ishikawa细胞中下调FABP4的表达后,Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.05);在Ishikawa细胞中上调FABP4的表达后,Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著升高(P<0.05).2)在Ishikawa细胞中转染miR-409-3p mimics后,FABP4的表达水平以及Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.05);而转染miR-409-3p inhibitor后,FABP4的表达水平以及Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著升高(P<0.05).3)双荧光素酶报告基因结果显示,在Ishikawa细胞中miR-409-3p可靶向调控FABP4.结论 高表达的FABP4促进Ishikawa细胞增殖、侵袭及迁移,miR-409-3p可通过下调FABP4的表达进而抑制Ishikawa细胞发生转移.

目的 探讨木香烃内酯对胃癌细胞恶性表型的影响及可能机制.方法 体外培养胃癌细胞HGC-27,采用不同剂量(2.5、10、40 μmo·l L-1)木香烃内酯干预HGC-27细胞 24 h,或转染circ_0000285小干扰RNA至HGC-27细胞后培养24 h.采用40 μmo·l L-1木香烃内酯干预转染circ_0000285过表达载体的HGC-27细胞24 h.CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,RT-qPCR检测circ_0000285和miR-409-3p表达,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000285和miR-409-3p的调控关系.结果 木香烃内酯可降低HGC-27细胞的OD值、集落形成数、迁移距离、侵袭数,以及Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平,提高细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平,并呈剂量依赖性.木香烃内酯可抑制HGC-27细胞中circ_0000285的表达,促进miR-409-3p表达.干扰circ_0000285表达可降低HGC-27细胞的增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡.circ_0000285可靶向结合并负调控miR-409-3p.过表达circ_0000285可逆转木香烃内酯对HGC-27细胞恶性表型的影响.结论 木香烃内酯可能通过调控circ_0000285/miR-409-3p轴抑制胃癌细胞的恶性生物学行为.

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达.体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系.转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞.细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析.蛋白质印迹法检测细胞中 E-cadherin和N-cadherin蛋白表达.结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P＜0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P＜0.05).circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p.敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P＜0.05),N-cadherin 水平降低(P＜0.05),而 E-cadherin 水平上升(P＜0.05).circFOXK2 敲低对 A549 和 H1299 细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用可以被miR-409-3p抑制剂逆转.结论 circFOXK2在肺癌中表达升高,其通过靶向miR-409-3p促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1 和miR-409-3p表达水平.双荧光素酶检测 LncRNA CBR3-AS1 和 miR-409-3p及 hnRNPA2B1 和miR-409-3p的靶向关系.将Hep G2 细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1 组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组.平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9 蛋白的表达变化.小鼠移植瘤实验检测LncRNA CBR3-AS1对肝癌肿瘤生长及miR-409-3p/hnRNPA2B1 的影响.结果 与癌旁组织比较,癌组织中LncRNA CBR3-AS1 表达显著升高,miR-409-3p表达显著降低(P<0.05).StarBase预测显示LncRNA CBR3-AS1 与miR-409-3p有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与LncRNA CBR3-AS1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组LncRNA CBR3-AS1 表达明显下降,miR-409-3p表达明显上升(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组miR-409-3p表达明显下降(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).生物信息学分析显示miR-409-3p与hnRNPA2B1 有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与hnRNPA2B1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组miR-409-3p表达明显上升,hnRNPA2B1 表达明显下降(P<0.05);与 miR-409-3p mimics+pcDNA 组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组 hnRNPA2B1 表达明显上升(P<0.05),与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,小鼠注射转染si-CBR3-AS1 的细胞后,移植瘤体积生长缓慢.与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组移植瘤中LncRNA CBR3-AS1 表达水平下降,miR-409-3p表达水平升高(P<0.005).免疫组化检测结果显示,si-CBR3-AS1 组移植瘤中,hnRNPA2B1 蛋白表达水平显著降低(P<0.005).结论 LncRNA CBR3-AS1 在肝癌中表达升高,下调LncRNA CBR3-AS1 的表达,可上调miR-409-3p表达,从而下调hnRNPA2B1 表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡.

目的 探讨微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)氧化应激、凋亡、炎症的影响及作用机制.方法 将对数期的HRCEC细胞分为对照组、高渗葡萄糖(HG)组、HG+miR-con组、HG+miR-409-3p 组、HG+si-con 组、HG+si-CACNB2 组、HG+miR-409-3p+pcDNA 和 HG+miR-409-3p+pcDNA-CACNB2 组.采用荧光定量 PCR(qPCR)法检测 miR-409-3p 的相对表达量,Western blotting(WB)法检测L-型电压依赖型钙通道β(CACNB2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量,流式细胞术(F C M)检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(E LIS A)检测炎症因子水平,酶标仪及试剂盒检测氧化应激相关指标,双荧光素酶检测(LRA)验证miR-409-3p与CACNB2调控关系.结果 HG组miR-409-3p相对表达量低于对照组,CACNB2 mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-409-3p可靶向结合CACNB2,在HRCEC细胞中负向调控CACNB2的表达.与HG+miR-con组相比,HG+miR-409-3p组的乳酸脱氢酶(LDH)及谷胱甘肽(GSH)水平升高(P＜0.01),CACNB2蛋白表达量、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平降低(P＜0.01);与 HG+miR-con 组相比,HG+miR-409-3p 组 Cleaved caspase-3、Bax 蛋白表达量,细胞凋亡率,白细胞介素(IL)-6、IL-18及IL-1β水平均降低,同时,细胞间黏附分子(ICAM)蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.01).敲减CACNB2具有相似的作用,过表达CACNB2可逆转miR-409-3p过表达对HRCEC细胞氧化应激、细胞凋亡、炎症反应的影响.结论 miR-409-3p抑制HRCEC细胞的氧化应激、凋亡、炎症与下调CACNB2表达有关.

Objective:Gastrointestinal stromal tumors(GISTs)can rapidly proliferate through angiogenesis.Previous studies indicated the potential influence of microRNA on the progression of tumor immature angiogenesis.This study aimed to explore the specific mechanism by which microRNA-409-5p(miR-409-5p)contributes to GIST.Methods:To identify genes potentially involved in the development and progression of GIST,the differences of miR-409-5p between tumors and adjacent tissues were first analyzed.Following this analysis,target genes were predicted.To further investigate the function of miRNA in GIST cells,two GIST cell lines(GIST-T1 and GIST882)were transfected with lentiviruses that stably expressed miR-409-5p and scrambled miRNA(negative control).Later,the cells were subjected to Western blotting and ELSA to determine any differences in angiogenesis-related genes.Results:In GISTs,there was a decrease in the expression levels of miR-409-5p compared to the adjacent tissues.It was observed that the upregulation of miR-409-5p in GIST cell lines effectively inhibited the proteins hypoxia-inducible transcription factor 1β(HIF1β)and vascular endothelial growth factor A(VEGF-A).Further investigations revealed that miR-409-5p acted as an inhibitor of angiogenesis by binding to the 3'-UTR of Lysine-specific demethylase 4D(KDM4D)mRNA.Moreover,the combination of miR-409-5p with imatinib enhanced its inhibitory effect on angiogenesis.Conclusion:This study demonstrated that the miRNA-409-5p/KDM4D/HIF1β/VEGF-A signaling pathway could serve as a novel target for the development of therapeutic strategies for the treatment of imatinib-resistance in GIST patients.

目的 探索长链非编码RNA(lncRNA)SNHG12通过微小RNA(miR)-409-3p/锌指E盒结合的同源盒蛋白1(ZEB1)轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响.方法 选取2021年2月至2022年2月于河南省南阳市中心医院诊治的50例宫颈癌患者组织及癌旁组织标本、正常宫颈上皮细胞以及宫颈癌细胞系 HeLa、SiHa、CaSki,检测组织及细胞中lncRNA SNHG12与miR-409-3p的表达水平.取宫颈癌细胞系 HeLa分为sh-NC组(转染阴性对照载体)、sh-SNHG12组(转染SNHG12敲低载体)、mimics NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-409-3p mimics组(转染miR-409-3p模拟物)、sh-NC+inhibitor NC组(共转染sh-NC与抑制物阴性对照)、sh-NC+miR-409-3p inhibitor组(共转染sh-NC与miR-409-3p抑制物)、sh-SNHG12+inhibitor NC组(共转染sh-SNHG12与inhibitor NC)、sh-SNHG12+miR-409-3p inhibitor组(共转染sh-SNHG12与miR-409-3p inhibitor);未转染细胞为对照组.依次采用qRT-PCR、双荧光素酶实验检测SNHG12与miR-409-3p表达水平及两者的靶向关系;MTT法、流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡率;Western blot检测神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、ZEB1、Snail和波形蛋白(vimen-tin)的表达水平.结果 SNHG12与 miR-409-3p存在靶向关系,与sh-NC组、对照组相比,sh-SNHG12组细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达显著增加,细胞增殖率、SNHG12、ZEB1、N-cadherin、Snail、vimentin表达显著降低(P<0.05);与mimics NC组、对照组相比,miR-409-3p mimics组细胞凋亡率、miR-409-3p、E-cadherin蛋白表达显著增加,细胞增殖率、ZEB1、N-cadherin、Snail、vimentin表达显著降低(P<0.05);miR-409-3p inhibitor可逆转敲低SNHG12对HeLa细胞发挥的上述作用(P<0.05).结论 敲低SNHG12表达可通过靶向负调控 miR-409-3p/ZEB1轴,减少 HeLa细胞增殖以及上皮间质转化,促进细胞凋亡.