目的 探讨慢性心功能不全患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)微小RNA(microRNAs,miRNAs)差异表达与患者脑血管疾病的关系.方法 这是一项对2019年1月至2022年4月期间从西安交通大学第一附属医院出院的274例失代偿性心力衰竭患者的观察性研究.对患者进行随访,直到2023年1月,观察患者缺血性脑血管事件情况.miRNA微阵列用于分析基线循环miRNAs水平.通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证差异表达的miRNAs.采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析候选miRNAs对缺血性脑血管事件的预测价值.结果 在随访期间[422(184～939)d],有24例患者发生缺血性脑血管事件.与未发生缺血性脑血管事件的患者相比,发生缺血性脑血管事件的患者服用抗凝剂、维生素K拮抗剂的患者比例显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).在两组基线PBMCs样本中分析了2 549个miRNA的表达,并鉴定了20个差异表达的miRNAs(定义为FC>1.3和P<0.05).qRT-PCR验证结果显示,与非缺血性脑血管事件患者相比,发生缺血性脑血管事件患者的PBMCs样本中hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-2861表达水平显著上调,hsa-miR-483-5p表达水平显著下调,差异有统计学意义(P<0.05).ROC分析表明,hsa-miR-1273g-3p[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.745]预测心力衰竭患者缺血性脑血管事件的灵敏度和特异度分别为81%、56%,hsa-miR-2861(AUC=0.614)的灵敏度和特异度分别为76%、62%,hsa-miR-483-5p(AUC=0.821)的灵敏度和特异度分别为76%、80%.3种候选miR-NAs联合的预测价值优于单独一种miRNA,其AUC、灵敏度和特异度分别为0.941、90%、98%.结论 PBMCs中hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-2861表达水平上调和hsa-miR-483-5p表达水平下调可能与心力衰竭患者缺血性脑卒中风险增加有关.

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法:检测lncRNA SNHG6、miR-485-3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR-485-3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR-485-3p后，MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR-485-3p对Wnt/β-catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果:lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达，在X线照射的SiHa细胞中低表达，miR-485-3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达，在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR-485-3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭，增强了其对X线的放疗敏感性，而miR-485-3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR-485-3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭，降低了放疗敏感性。下调miR-485-3p激活了Wnt/β-catenin通路，促进了SiHa的细胞增殖和侵袭，降低了其对X线的放疗敏感性。结论:过表达lncRNA SNHG6靶向miR-485-3p激活Wnt/β-catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。

目的:探讨miR-28-5p表达与胆管细胞癌患者预后的关系及其对肿瘤增殖和侵袭的作用.方法:纳入2017年10月—2020年12月在我院接受根治性切除的胆管细胞癌患者112例.选取其胆管细胞癌组织和相邻癌旁组织,在胆管癌细胞系TFK-1、RBE、HuH28、HuCCT-1、QBC939及正常胆管上皮细胞HIBEpic中检测miR-28-5p的表达水平.采用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析miR-28-5p与患者预后的关系.采用CCK-8和Transwell实验分析miR-28-5p对细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果:胆管细胞癌组织和细胞系中miR-28-5p表达水平均显著高于癌旁组织和正常上皮细胞.miR-28-5p低表达与患者的不良预后显著相关.下调miR-28-5p可促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达miR-28-5p则可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭.结论:miR-28-5p有作为胆管细胞癌患者的预后标志物和潜在治疗靶点的前景.

目的 分析血清miR-939和miR-15b表达与糖尿病视网膜病变(DR)患者微血管损伤的相关性.方法 选取2021年1月至2022年10月在保定市第二医院进行诊治的2型糖尿病患者176例作为研究对象.根据研究对象根据是否发生DR及病变程度分为无DR患者74例(NDR组)、非增殖型DR患者62例(NPDR组)、增殖型DR(PDR)患者40例(PDR组).采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-939、miR-15b相对表达水平,酶联免疫吸附试验法检测各组血管内皮生长因子(VEGF)水平,流式细胞术检测内皮细胞(ECs)、内皮祖细胞(EPCs)和循环祖细胞(CPCs)计数百分比.比较3组患者血清miR-939、miR-15b、VEGF水平和ECs、EPCs、CPCs.采用 Pearson 相关性分析血清 miR-939、miR-15b 与 VEGF、ECs、EPCs、CPCs 的相关性.采用多因素Logistic回归分析2型糖尿病患者发生DR的影响因素.结果 PDR组、NPDR组血清miR-939、miR-15b相对表达水平低于NDR组,而血清VEGF水平高于NDR组,差异有统计学意义(P＜0.05).PDR组、NPDR组ECs高于NDR组,而EPCs和CPCs低于NDR组,差异有统计学意义(P＜0.05).血清miR-939与VEGF、ECs 呈负相关(r=-0.407、-0.613,P＜0.05),与 EPCs、CPCs 呈正相关(r=0.481、0.486,P＜0.05),血清 miR-15b 与 VEGF、ECs 呈负相关(r=-0.539、-0.625,P＜0.05),与 EPCs、CPCs 呈正相关(r=0.451、0.483,P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,2型糖尿病病程、糖化血红蛋白、餐后2 h血糖、VEGF、miR-939和miR-15b为2型糖尿病患者发生DR的影响因素(P＜0.05).结论 DR患者血清miR-939、miR-15b表达与VEGF、ECs、EPCs和CPCs密切相关,DR患者血清miR-939、miR-15b表达能够为其微血管损伤程度的早期判断与评估提供一定参考.

目的 探讨土木香内酯调控微小RNA(miR)-3178 对胆管癌QBC939 细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 不同浓度的土木香内酯作用于QBC939 细胞 48 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖,划痕愈合实验、Tr-answell实验检测细胞迁移和侵袭.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测QBC939 细胞、胆管癌组织中miR-3178 的相对水平.转染miR-3178 模拟物至 QBC939 细胞,检测过表达对 QBC939 细胞增殖、迁移和侵袭的影响.转染 miR-3178 抑制物至QBC939 细胞,检测抑制miR-3178 表达联合土木香内酯对QBC939 细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果 土木香内酯显著增加QBC939 细胞抑制率、凋亡率、miR-3178 的相对水平(P<0.05),降低克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数(P<0.05),呈剂量依赖性.与癌旁组织比较,胆管癌组织中miR-3178 表达水平显著降低(P<0.05).过表达miR-3178 显著增加QBC939 细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),降低克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数(P<0.05).抑制 miR-3178 表达部分逆转了土木香内酯对QBC939 细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05).结论 土木香内酯通过上调miR-3178 表达抑制胆管癌QBC939 细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:观察微小RNA(miRNA)-148a-3p对人牙髓干细胞(DPSCs)增殖活力及成骨分化的影响,并探讨可能机制.方法:取对数期DPSCs,分为空白组、NC组、inhibitor组、inhibitor+XAV939[无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂]组.空白组不处理,NC组转染阴性对照质粒miR-148a-3p NC,inhibitor组转染miR-148a-3p inhibitor,inhibitor+XAV939组转染miR-148a-3p inhibitor并加入XAV939(40 μmol/L).转染48 h后qRT-PCR法检测miR-148a-3p表达量;MTT法检测增殖活力;ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色法检测矿化能力;双荧光素酶实验验证miR-148a-3p靶向基因;Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)以及Wnt1蛋白相对表达量.结果:与空白组、NC组比较,inhibitor组24 h、48 h、72 h吸光度值,GSK-3β蛋白表达量降低,ALP活性值,矿化结节面积占比,β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1 以及 Wnt1 蛋白表达量升高(P＜0.05);与 inhibitor组比较,inhibitor+XAV939组24 h、48 h、72 h吸光度值,GSK-3β蛋白表达量升高,ALP活性值,矿化结节面积占比,β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量降低(P＜0.05).结论:抑制miR-148a-3p表达可提升DPSCs增殖活力并促进其成骨分化,推测其作用机制与负向调控下游的靶基因Wnt1有关.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-148b和miR-152在胆管癌中的表达及其生物学功能.方法 用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-148b和miR-152在胆管癌与正常胆管组织、胆管癌细胞株QBC939和良性胆管细胞株H-69中的表达;分别用Real-time PCR、噻唑蓝(MTT)检测法、克隆形成实验和流式细胞术检测miR-148b和miR-152的表达及其对细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.结果 与正常胆管组织比较,miR-148b和miR-152在胆管癌组织中分别下调(2.75±0.16)倍和(3.05 ±0.18)倍,差异均有统计学意义(P=0.013、0.019);与良性胆管细胞比较,miR-148b和miR-152在胆管癌细胞中分别下调(2.52±0.03)倍和(3.96±0.02)倍,差异均有统计学意义(P=0.018、0.012);miR-148b和miR-152过表达显著抑制胆管癌细胞的增殖速率,分别为(38.49±0.31)％和(52.69±1.01)％,同时也能显著抑制克隆形成率(P=0.031、0.023),miR-148b和miR-152均可使细胞周期阻滞于S期(P=0.027、0.017),并且miR-148b和miR-152过表达均可诱导细胞凋亡.结论 胆管癌组织中miR-148b和miR-152表达均下调,过表达miR-148b和miR-152后可抑制胆管癌细胞增殖及诱导胆管癌细胞凋亡.

目的 探讨微RNA-224(miR-224)在人胆管癌(CC)细胞凋亡与增殖中的调控机制以及在胆管癌细胞中是否存在miR-224-HOXD 10-PAK4传导通路.方法 利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定CC和癌旁正常组织中miR-224的表达量.胆管癌QBC939细胞株病毒转染分为两组:细胞转染阴性对照组(NC组),细胞转染目的基因miR-224-down组(DOWN组).记录NC组和DOWN组中QBC939细胞凋亡率及细胞克隆形成数.利用RT-PCR和蛋白印迹(Western blotting)检测NC组和DOWN组QBC939细胞中miR-224、AP15、PAK4、HOXD10的表达.结果 (1) CC组织中miR-224的表达显著高于癌旁正常组织(P＜0.05).(2)DOWN组QBC939细胞的miR-224表达显著低于NC组.DOWN组QBC939细胞凋亡率显著高于NC组.DOWN组QBC939细胞的克隆形成率显著低于NC组.(3)RT-PCR和Western blotting实验证实DOWN组QBC939细胞中API5、HOXD10的表达明显高于NC组.(4)DOWN组QBC939细胞中PAK4的表达显著低于NC组.结论 miR-224有体外抗QBC939细胞凋亡及促进QBC939细胞增殖的作用,是细胞增殖的重要调节因子.QBC939细胞中存在miR-224-HOXD10-PAK4信号传导通路.

目的 检测微小RNA(miR)-218对胆管癌细胞的侵袭的影响及miR-218通过凋亡抑制基因生存素(Survivin)对胆管癌细胞的作用.方法 培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939),将miR-218mimics(miR-218激动剂)及阴性对照转染CCLP1和QBC939细胞,设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,采用BD Martigel基底膜基质胶侵袭室测定其侵袭性,每组随机抽取3个结果.将CCLP1和QBC939细胞分别共转染miR-218 mimics和pMIR-Survivin、miR-218mimics和pMIR-Survivin-mut.分别设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,每组随机抽取3个结果,酶标仪检测荧光素酶活性,探讨miR-218与Survivin的相关性.结果 CCLP1细胞株中miR-218组细胞数为(28.33 ±4.16)个,阴性对照组细胞数为(72.00 ±8.72)个,NC组细胞数为(74.33±4.04)个;QBC939细胞株中miR-218组细胞数为(7.33±2.08)个,阴性对照组细胞数为(22.00±4.36)个,NC组细胞数为(22.00±4.00)个;与阴性对照组和NC组比较,转染miR-218mimics处理能显著抑制胆管癌细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(CCLP1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.004).荧光素酶活性检测结果显示,QBC939野生型miR-218组荧光素酶活性为1.489±0.079,阴性对照组为2.825±0.068,NC组为2.747±0.081;QBC939突变型miR-218组荧光素酶活性为3.078±0.138,阴性对照组为2.944±0.144,NC组为2.807±0.090;CCLP1野生型miR-218组荧光素酶活性为1.322±0.039,阴性对照组为2.362±0.129,NC组为2.368±0.154;CCLP1突变型miR-218组荧光素酶活性为2.202±0.073,阴性对照组为2.274±0.250,NC组为2.202±0.073;野生型的3'端非编码区(3'UTR)的报告基因载体的荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组比较显著下降,差异有统计学意义(CCLP1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.000),突变型无显著变化.结论 miR-218抑制胆管癌细胞的侵袭,在胆管癌的发生发展中起负性调节作用.miR-218可直接与Survivin 3'UTR相互作用,miR-218对于胆管癌的负性调节作用可能是直接通过Survivin发挥作用.

目的 检测胆管癌中微小RNA(miRNA,miR)-218的表达水平及观察其对胆管癌细胞凋亡的影响.方法 培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939)和非肿瘤胆管细胞株(H69),采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-218,分为CCLP1、QBC939、H69组,每组随机取3个结果,比较其在胆管癌细胞株与非肿瘤胆管细胞株中的差异.合成miR-218 mimics(miR-218激动剂),将miR-218minics及阴性对照转染CCLP1和QBC939细胞.设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,分别利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,每组随机取3个结果.结果 miR-218在胆管癌细胞株CCLP1、QBC939及非肿瘤胆管细胞株中的相对定量分别为:1.000(以CCLP-1为对照)、0.602 ±0.108、25.199±5.128,miR-218在胆管癌细胞株CCLP1、QBC939中的表达显著低于非肿瘤胆管细胞株(H69) (P =0.000).CCLP1细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0.121±0.010,阴性对照组细胞凋亡率为0.048±0.021,空白对照组细胞凋亡率为0.076±0.017;QBC939细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0.118±0.039,阴性对照组细胞凋亡率为0.017±0.036,空白对照组细胞凋亡率为0.048±0.161.miR-218组较阴性对照组及空白对照组细胞凋亡率显著增加,miR-218组与空白对照组及阴性对照组之间的差异有统计学意义(CCLP-1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.005、0.006).结论 miR-218在胆管癌的发生发展发挥了抑癌因子的作用,并且增加了胆管癌细胞的凋亡.