目的:研究长链非编码RNA GAS5(long non-coding RNA GAS5，GAS5)靶向调控miR-29、miR-96和miR-208促进胰岛β细胞分泌胰岛素的作用及其机制。方法:采用Q-PCR法检测122名健康人血清和88例2型糖尿病(T2DM)患者血清以及大鼠胰岛细胞瘤株INS-1832/13中，长链非编码RNA GAS5与miR-29、miR-96和miR-208的表达水平及其相关性。通过慢病毒载体构建，沉默和过表达GAS5观察对胰岛β细胞分泌胰岛素功能的影响。采用生物信息学预测GAS5与miR-29、miR-96和miR-208有互补结合位点，用荧光素酶报告系统验证其靶向关系。在胰岛β细胞中共转染GAS5 shRNA,用上述方法检测其对胰岛素受体(insulin receptor, INSR)、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate-1, IRS-1)和磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase, PI3K)水平的影响，从而揭示GAS5刺激胰岛β细胞分泌胰岛素的作用机制。结果:与健康人血清相比，2型糖尿病患者血清中GAS5的表达低于健康对照组( t＝4.632, P<0.01)，miR-29、miR-96和miR-208高于健康对照组( t分别为7.832、9.164、12.359，均 P<0.01)，而且GAS5水平与miR-29、miR-96和miR-208呈负相关( r分别为-0.50、-0.47、-0.70)。慢病毒过表达GAS5导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加，胰岛素含量增加。相反，GAS5的下调导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛素含量显著降低。利用生物信息学工具，筛选了miR-29、miR-96和miR-208作为GAS5的靶点，并通过双荧光素酶报告基因实验验证GAS5可以通过靶向抑制miR-96、miR-29和miR-208的表达发挥作用。shGAS5显著降低INSR、IRS-1和PI3K的表达( P分别为0.022、0.038、0.009)，而过表达GAS5在mRNA和蛋白水平上均显著上调INSR、IRS-1和PI3K的表达( P分别为0.024、0.045、0.016)。 结论:GAS5可能通过靶向调控miR-29、miR-96和miR-208的表达，进而对这些miRNA可能存在的负调控因子INSR、IRS-1和PI3K等的表达进行正向调控，刺激胰岛β细胞分泌胰岛素。

目的:探讨姜黄素对骨髓间充质干细胞(BMSCs)骨向分化的调控机制。方法:2018年2月至2019年10月，采用15 μmol/L浓度姜黄素处理BMSCs细胞(购自中国科学院上海细胞库)，细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡，蛋白印迹法(Western blot)检测聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(Col Ⅱ)、SRY-盒转录因子9(Sox9)和成纤维细胞生长因子18(FGF18)表达。将微小RNA(miRNA，miR)-NC组(转染miR-NC)、miR-122-5p组(转染miR-122-5p mimics)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-FGF18组(转染pcDNA-FGF18)、姜黄素＋miR-NC组(转染miR-NC)、姜黄素＋miR-122-5p组(转染miR-122-5p mimics)、姜黄素＋pcDNA组(转染pcDNA)、姜黄素＋pcDNA-FGF18组(转染pcDNA-FGF18)转染至BMSCs细胞，对照组仅加入培养基。检测并比较不同组增殖、凋亡和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测miR-122-5p与FGF18间的结合。两组间比较采用 t检验，多组间均值比较采用SNK- q法分别比较组间差异。 结果:姜黄素组BMSCs细胞增殖率、Aggrecan、Col Ⅱ和Sox9蛋白表达显著高于对照组( t＝18.275、12.001、8.598、10.124， P<0.05)，凋亡率显著低于对照组( t＝18.056， P<0.05)，差异均有统计学意义。姜黄素组BMSCs中miR-122-5p表达显著低于对照组(0.47±0.03比1.01±0.07， t＝21.272， P<0.05)，FGF18的mRNA和蛋白表达显著高于对照组(mRNA为2.78±0.17比0.99±0.05，蛋白为1.56±0.13比1.01±0.09， t＝30.305、10.436， P<0.05)，差异均有统计学意义。过表达miR-122-5p可抑制BMSCs细胞增殖和Aggrecan、Col Ⅱ、Sox9蛋白表达并促进凋亡，过表达FGF18则有相反的作用。过表达miR-122-5p可显著减弱姜黄素对BMSCs细胞增殖、凋亡和成骨分化的调控作用，而过表达FGF18则可明显增强姜黄素对BMSCs细胞增殖、凋亡和成骨分化的作用。 结论:姜黄素可促进BMSCs细胞增殖和成骨分化并抑制凋亡，其机制可能与调控miR-122-5p/FGF18信号通路有关。

目的:探讨微RNA(microRNA, miRNA)表达在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染中的可能机制。方法:采集2017年于福建医科大学孟超肝胆医院就诊的4例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者和4名健康对照者的外周血标本。通过Affymetrix GeneChip microRNA 4.0芯片检测CHB患者和健康对照者的miRNA表达谱，获得CHB相关差异表达miRNA，并结合生物信息学工具和公共数据库分析其功能。结果:共有7个miRNA在CHB患者外周血中差异表达，其中miRNA-122-5p[差异表达倍数(log 2 fold change, log 2 FC)＝7.78， P＝0.007 3]、let-7c-5p(log 2FC＝3.52， P＝0.019 6)、miRNA-6794-5p(log 2FC＝1.15， P＝0.033 2)和miRNA-1226-5p(log 2FC＝0.68， P＝0.034 3)为高表达，miRNA-619-5p(log 2FC＝-1.83， P＝0.002 6)、miRNA-1273g-3p(log 2FC＝-2.69， P＝0.025 1)和miRNA-4440(log 2FC＝-3.99， P＝0.047 8)为低表达。进一步的分析提示这些差异表达miRNA可能直接作用于HBV基因序列，影响病毒复制。其中miRNA-122-5p、miRNA-6794-5p和miRNA-1226-5p可能通过负向调控其靶基因表达，影响富含纤胶凝蛋白-1颗粒体、富含纤胶凝蛋白-1管腔、伪足体和细胞膜褶皱的构成，共同参与细胞膜的运动及细胞基质附着。 结论:miRNA可能通过影响细胞膜的分子运动使病毒得以侵入肝细胞内，在HBV感染肝细胞过程中起到重要辅助作用。

目的:研究miRNA-29c在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus, T1DM）早期肾病患者中的表达情况，及对早期肾病的诊断价值。方法:回顾性选取2019年1月至2022年3月期间于杭州市临安区第一人民医院接受治疗的168例T1DM患者作为研究对象，根据肾病发生情况分为单纯性糖尿病组（122例）及糖尿病肾病组（46例）。采用RT-PCR法检测血清miRNA-29c水平，比较两组的性别、年龄、病程、血清miRNA-29c水平等一般资料，采用Logistic回归分析T1DM患者发生早期肾病的影响因素。采用 ROC曲线分析miRNA-29c对于T1DM发生早期肾病的诊断价值。 结果:早期肾病组的病程、血压（收缩压、舒张压）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、血尿酸高于单纯性糖尿病组，而白蛋白、总胆红素、miRNA-29c（0.82±0.22 vs 1.24±0.33）低于单纯性糖尿病组，差异有统计学意义（ P<0.05）。多因素 Logistic分析显示：长病程（ OR=2.061，95% CI=1.090~3.896）、收缩压（ OR=1.143，95% CI=1.023~1.279）、舒张压（ OR=1.151，95% CI=1.022~1.298）、高HbA1c（ OR=1.317，95% CI=1.049~1.653）、高血尿酸（ OR=1.306，95% CI=1.028~1.659）、低miRNA-29c（ OR=0.845，95% CI=0.730~0.979）是影响T1DM患者发生早期肾病的危险因素（ P<0.05）。ROC曲线分析显示miRNA-29c诊断早期肾病的截断值为0.952，曲线下面积（AUC）为0.863（95% CI: 0.801~0.925），敏感度、特异度分别为84.78%、80.33%。 结论:T1DM早期肾病患者血清miRNA-29c处于低表达状态，是T1DM患者发生早期肾病的影响因素，对于早期肾病具有良好的诊断价值。

目的:明确低温缺血再灌注心律失常大鼠心肌miRNA表达的变化及其靶基因。方法:清洁级健康雄性SD大鼠，2～3月龄，体重300～400 g，麻醉后开胸取心脏，建立离体心脏灌注模型。成功建立离体心脏灌注模型6个，采用随机数字表法分为2组( n＝3)：对照组(C组)和心脏缺血再灌注组(IR组)。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。记录再灌注期间心律失常评分。通过高通量测序筛选出2组心肌表达有显著性差异的miRNA(DEmiRNAs)。利用RNAhybrid和miRanda数据库对DEmiRNAs调节的mRNA行靶基因预测，通过Gene Ontology和KEGG数据库对靶基因进行富集分析，选取与心律失常密切相关且表达水平较高的miRNA进行RT-PCR检测。 结果:高通量测序结果：与C组比较，IR组有7个miRNA表达有显著性差异(novel-miR-17、novel-miR-19、novel-miR-30、novel-miR-43、rno-miR-122-5p、novel-miR-16和rno-miR-429)。与心律失常关系密切且表达水平较高的miRNA有4个：与C组比较，IR组心肌novel-miR-17、novel-miR-30和rno-miR-122-5p表达上调，rno-miR-429表达下调( P<0.05)。通过miRNA-mRNA相关性分析结果：GJA1基因是novel-miR-17的靶点。 结论:心肌novel-miR-17可能作用于GJA1基因参与大鼠低温缺血再灌注心律失常的发生。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1(OTUD6B-AS1)通过微小RNA(microRNA，miR)-122-5p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2010年1月至2013年1月河南科技大学第一附属医院手术切除的98例肝癌组织标本及其配对的癌旁组织、肝癌细胞系(Hhu7、Hep3B、HCCLM3、MHCC97H)和人正常肝细胞(LO2)中OTUD6B-AS1的相对表达量。用脂质体2000(Lipofectamine? 2000)分别将sh-NC(sh-NC组)和sh-OTUD6B-AS1(sh-OTUD6B-AS1组)转染入Hep3B细胞。克隆形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；Transwell检测细胞侵袭；细胞划痕实验检测细胞迁移。用TargetScan预测OTUD6B-AS1与miR-122-5p的互补结合位点，随后用双荧光素酶报告基因实验确定两者的靶向关系。为了进一步验证两者调控关系，将Hep3B细胞分别分为sh-NC＋miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1＋miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1＋anti-miR-122-5p组，比较3组细胞增殖、侵袭和迁移。两两比较采用 t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验；生存分析采用Log-rank检验。 结果:肝癌组织中OTUD6B-AS1相对表达量为2.42±0.96，明显高于癌旁组织(0.92±0.39， t＝14.331， P<0.05)，差异有统计学意义。肝癌细胞系Hhu7(2.84±0.23)、Hep3B(3.80±0.68)、HCCLM3(1.89±0.25)和MHCC97H(2.01±0.71)的OTUD6B-AS1相对表达量明显高于正常肝细胞LO2(1.04±0.23， F＝51.827， P<0.05)，差异有统计学意义。sh-OTUD6B-AS1组细胞增殖、侵袭和迁移能力均低于sh-NC组( t＝5.556、2.454， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验结果证实OTUD6B-AS1可以靶向调控miR-122-5p。sh-NC＋miR-NC组和sh-OTUD6B-AS1＋anti-miR-122-5p组增殖、侵袭和迁移能力明显高于sh-OTUD6B-AS1＋miR-NC组( F＝111.908、0.301， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:OTUD6B-AS1可能通过负调控miR-122-5p促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

目的:探讨全反式维甲酸（ATRA）对骨肉瘤143B细胞增殖和侵袭的影响及其可能的调控机制。方法:采用不同浓度ATRA处理人骨肉瘤143B细胞，选取影响细胞增殖的最佳浓度和处理时间。分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测ATRA处理后143B细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法检测ATRA处理后骨肉瘤143B细胞中miRNA-34a（miR-34a）、E2F1和Eag1的表达变化。干扰miR-34a和过表达E2F1，检测143B细胞增殖、侵袭和迁移能力以及miR-34a、E2F1和Eag1表达的变化。结果:ATRA浓度为10 μmol/L、处理72 h对143B细胞增殖的抑制作用最明显。10 μmol/L ATRA作用72 h的迁移细胞数、侵袭细胞数均低于阴性对照组[（73±3）个比（182±5）个， t=21.46， P<0.01；（94±3）个比（203±7）个， t=13.70， P<0.01]。10 μmol/L ATRA可促进143B细胞中miR-34a的表达，抑制Eag1和E2F1的表达（均 P<0.01）。与ATRA组比较，处理72 h后ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（41.0±2.2）%比（25.0±3.6）%， t=108.68， P<0.01]。与ATRA组比较，ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的迁移和侵袭能力[（122±14）个比（64±10）个， t=21.06， P<0.01；（103±10）个比（59±8）个， t=24.27， P<0.01]，并可促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均 P<0.01）。与ATRA组相比，ATRA+E2F1过表达组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（40.0±3.4）%比（24.0±3.1）%， t=108.74， P<0.01]，可恢复细胞迁移和侵袭能力[（78±12）个比（29±8）个， t=13.52， P<0.01；（75±12）个比（49±10）个， t=6.28， P<0.01）]，并促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均 P<0.01）。 结论:ATRA通过调控miRNA-34a-E2F1-Eag1信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭，其可能成为骨肉瘤有效的治疗药物之一。

目的:探讨肝动脉阻力指数（Hepatic artery resistance index，HARI)、miRNA-122a对脓毒症休克合并肝损伤的早期诊断及预后评估的临床价值。方法:选择2016年12月至2019年02月沧州市中心医院EICU收治的176例脓毒症休克患者作为研究对象，根据有无肝损伤分为无肝损伤组（90例）、肝损伤组（86例）。肝损伤组患者再按肝损伤程度分为轻度肝损伤组（20例）、中度肝损伤组（25例）、重度肝损伤组（41例）。脓毒症休克合并肝损伤患者根据28 d转归分为存活组（26例）和死亡组（60例）。选择健康体检者40例作为对照组。分析两组患者的临床资料，采用彩色多普勒超声测定肝动脉阻力指数（HARI)，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR)测定血清miRNA- 122a表达量。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析HARI、血清miRNA-122a对脓毒症休克合并肝损伤的早期诊断价值。采用二元Logistic回归分析影响脓毒症休克合并肝损伤患者预后的危险因素。结果:①与对照组比较，脓毒症休克无肝损伤组、脓毒症休克合并肝损伤组患者的HARI、血清miRNA-122a呈递增趋势，差异有显著统计学意义( P <0.01)。ROC曲线分析显示，HARI、血清miRNA-122a诊断脓毒症休克合并肝损伤的AUC分别为：0.872[95% CI=(0.813, 0.919)]、0.796 [95% CI=(0.728, 0.854)]。当HARI最佳临界值为0.738时，其诊断脓毒症休克合并肝损伤的敏感度为77.65%，特异度为83.53%。当miRNA-122a表达量最佳临界值为2.80时，其诊断脓毒症相关肝损伤的敏感度为71.76%，特异度为75.29%。当HARI联合miRNA-122a诊断脓毒症休克合并肝损伤的AUC为0.927[95% CI=(0.876, 0.961)]，最佳临界值为0.276时，其诊断脓毒症休克合并肝损伤的敏感度为91.76%，特异度为85.29%。②脓毒症休克无肝损伤组与轻度肝损伤组比较，HARI差异无统计学意义( P>0.05)，而血清miRNA-122a差异有统计学意义( P <0.01)。随肝损伤严重程度加重，HARI、血清miRNA-122a呈递增趋势，重度肝损伤组显著高于轻度和中度肝损伤组，差异有显著统计学意义( P <0.01)。③与存活组比较，单因素分析显示，脓毒症休克合并肝损伤28 d死亡组患者的肝损伤严重程度、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、PCT、Lac、miRNA-122a、HARI显著升高，差异有统计学意义( P<0.01)。④二元Logistic回归分析发现，肝损伤严重程度、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、HARI、miRNA-122a是影响脓毒症休克合并肝损伤患者预后的独立危险因素。 结论:HARI联合血清miRNA-122a检测对评估脓毒症休克合并肝损伤具有较高的敏感度和特异度，且对预后评估有一定的临床价值。

目的:构建2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)患者血浆microRNA(miRNA)差异表达谱，探讨miRNA作为T2DM诊疗靶标的可能性。方法:采用miRNA芯片技术检测T2DM患者血浆中miRNA差异表达情况，用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)进行验证，对目标miRNA进行生物信息学分析。结果:T2DM患者血浆中122个miRNAs呈差异表达( FC>2， P<0.05)，经多源交集筛选得到差异表达miRNAs 14个，其中上调5个，下调9个。RT-qPCR结果显示，血浆中hsa-miR-185-5p及hsa-miR-328-5p在病例组高表达，差异有统计学意义( P<0.05)。生物信息学分析结果提示，这些miRNAs可能通过胰岛素分泌及PI3K-AKT信号通路途径参与T2DM发生发展过程。 结论:T2DM患者血浆中hsa-miR-185-5p及hsa-miR-328-5p呈差异表达，可能与T2DM发病密切相关。

目的:探讨miR-122-5p对创伤性脑外伤后小胶质细胞凋亡、极化和炎症反应的影响。方法:建立创伤性脑外伤（traumatic brain injury，TBI）小鼠模型和细胞模型。使用TBI小鼠脑匀浆刺激星型胶质细胞产生外泌体，microRNA微阵列分析外泌体中显著改变的microRNA。实时荧光定量PCR检测TBI小鼠模型和TBI细胞模型中miR-122-5p表达。使用TUNEL凋亡染色、免疫荧光共聚焦、蛋白质印迹研究miR-122-5p抑制剂在TBI神经炎症中对小胶质细胞凋亡、小胶质细胞M1/M2表型转化、NLRP3通路及NFκB磷酸化的作用。结果:通过microRNA微阵列分析发现有83个下调miRNA（改变2倍以上， P <0.05）,其中miR-122-5p显著下调（ P<0.01），miR-122-5p在TBI小鼠及细胞模型中表达显著下降[(1.0±0.00） vs.(0.41±0.15)， P <0.001；[(1.0±0.00） vs.(0.34±0.07)， P<0.001]。TUNEL凋亡检测、免疫荧光染色结果表明抑制miR-122-5p表达，可以显著减轻LPS诱导的小胶质细胞凋亡[(8.03±1.30） vs. (3.17±0.34)， P<0.001]，促进小胶质细胞M1向M2表型转化，即M1表型极化减少[(56.96±13.70） vs. (34.70±3.47)， P =0.002]，M2表型极化增加[(30.46±3.67） vs. (40.74±2.49)， P =0.005]。蛋白质印迹结果表明miR-122-5p抑制剂降低NLRP3炎症小体活化[(0.77±0.10） vs. (0.51±0.11)， P =0.02]，降低NFκB的磷酸化[(0.73±0.08） vs. (0.50±0.07)， P =0.003]。 结论:miR-122-5p在TBI星形胶质细胞分泌的外泌体及小胶质细胞中表达下调,miR-122-5p抑制剂可以通过抑制TBI后NLRP3炎症小体通路的活化及NFκB的磷酸化，促进小胶质细胞M1向M2表型转化，减少小胶质细胞凋亡，从而减轻TBI后小胶质细胞炎症损伤。