目的:明确低温缺血再灌注心律失常大鼠心肌miRNA表达的变化及其靶基因。方法:清洁级健康雄性SD大鼠，2～3月龄，体重300～400 g，麻醉后开胸取心脏，建立离体心脏灌注模型。成功建立离体心脏灌注模型6个，采用随机数字表法分为2组( n＝3)：对照组(C组)和心脏缺血再灌注组(IR组)。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。记录再灌注期间心律失常评分。通过高通量测序筛选出2组心肌表达有显著性差异的miRNA(DEmiRNAs)。利用RNAhybrid和miRanda数据库对DEmiRNAs调节的mRNA行靶基因预测，通过Gene Ontology和KEGG数据库对靶基因进行富集分析，选取与心律失常密切相关且表达水平较高的miRNA进行RT-PCR检测。 结果:高通量测序结果：与C组比较，IR组有7个miRNA表达有显著性差异(novel-miR-17、novel-miR-19、novel-miR-30、novel-miR-43、rno-miR-122-5p、novel-miR-16和rno-miR-429)。与心律失常关系密切且表达水平较高的miRNA有4个：与C组比较，IR组心肌novel-miR-17、novel-miR-30和rno-miR-122-5p表达上调，rno-miR-429表达下调( P<0.05)。通过miRNA-mRNA相关性分析结果：GJA1基因是novel-miR-17的靶点。 结论:心肌novel-miR-17可能作用于GJA1基因参与大鼠低温缺血再灌注心律失常的发生。

目的:探讨微RNA(microRNA, miRNA)表达在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染中的可能机制。方法:采集2017年于福建医科大学孟超肝胆医院就诊的4例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者和4名健康对照者的外周血标本。通过Affymetrix GeneChip microRNA 4.0芯片检测CHB患者和健康对照者的miRNA表达谱，获得CHB相关差异表达miRNA，并结合生物信息学工具和公共数据库分析其功能。结果:共有7个miRNA在CHB患者外周血中差异表达，其中miRNA-122-5p[差异表达倍数(log 2 fold change, log 2 FC)＝7.78， P＝0.007 3]、let-7c-5p(log 2FC＝3.52， P＝0.019 6)、miRNA-6794-5p(log 2FC＝1.15， P＝0.033 2)和miRNA-1226-5p(log 2FC＝0.68， P＝0.034 3)为高表达，miRNA-619-5p(log 2FC＝-1.83， P＝0.002 6)、miRNA-1273g-3p(log 2FC＝-2.69， P＝0.025 1)和miRNA-4440(log 2FC＝-3.99， P＝0.047 8)为低表达。进一步的分析提示这些差异表达miRNA可能直接作用于HBV基因序列，影响病毒复制。其中miRNA-122-5p、miRNA-6794-5p和miRNA-1226-5p可能通过负向调控其靶基因表达，影响富含纤胶凝蛋白-1颗粒体、富含纤胶凝蛋白-1管腔、伪足体和细胞膜褶皱的构成，共同参与细胞膜的运动及细胞基质附着。 结论:miRNA可能通过影响细胞膜的分子运动使病毒得以侵入肝细胞内，在HBV感染肝细胞过程中起到重要辅助作用。

目的:研究miRNA-29c在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus, T1DM）早期肾病患者中的表达情况，及对早期肾病的诊断价值。方法:回顾性选取2019年1月至2022年3月期间于杭州市临安区第一人民医院接受治疗的168例T1DM患者作为研究对象，根据肾病发生情况分为单纯性糖尿病组（122例）及糖尿病肾病组（46例）。采用RT-PCR法检测血清miRNA-29c水平，比较两组的性别、年龄、病程、血清miRNA-29c水平等一般资料，采用Logistic回归分析T1DM患者发生早期肾病的影响因素。采用 ROC曲线分析miRNA-29c对于T1DM发生早期肾病的诊断价值。 结果:早期肾病组的病程、血压（收缩压、舒张压）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、血尿酸高于单纯性糖尿病组，而白蛋白、总胆红素、miRNA-29c（0.82±0.22 vs 1.24±0.33）低于单纯性糖尿病组，差异有统计学意义（ P<0.05）。多因素 Logistic分析显示：长病程（ OR=2.061，95% CI=1.090~3.896）、收缩压（ OR=1.143，95% CI=1.023~1.279）、舒张压（ OR=1.151，95% CI=1.022~1.298）、高HbA1c（ OR=1.317，95% CI=1.049~1.653）、高血尿酸（ OR=1.306，95% CI=1.028~1.659）、低miRNA-29c（ OR=0.845，95% CI=0.730~0.979）是影响T1DM患者发生早期肾病的危险因素（ P<0.05）。ROC曲线分析显示miRNA-29c诊断早期肾病的截断值为0.952，曲线下面积（AUC）为0.863（95% CI: 0.801~0.925），敏感度、特异度分别为84.78%、80.33%。 结论:T1DM早期肾病患者血清miRNA-29c处于低表达状态，是T1DM患者发生早期肾病的影响因素，对于早期肾病具有良好的诊断价值。

目的:探讨全反式维甲酸（ATRA）对骨肉瘤143B细胞增殖和侵袭的影响及其可能的调控机制。方法:采用不同浓度ATRA处理人骨肉瘤143B细胞，选取影响细胞增殖的最佳浓度和处理时间。分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测ATRA处理后143B细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法检测ATRA处理后骨肉瘤143B细胞中miRNA-34a（miR-34a）、E2F1和Eag1的表达变化。干扰miR-34a和过表达E2F1，检测143B细胞增殖、侵袭和迁移能力以及miR-34a、E2F1和Eag1表达的变化。结果:ATRA浓度为10 μmol/L、处理72 h对143B细胞增殖的抑制作用最明显。10 μmol/L ATRA作用72 h的迁移细胞数、侵袭细胞数均低于阴性对照组[（73±3）个比（182±5）个， t=21.46， P<0.01；（94±3）个比（203±7）个， t=13.70， P<0.01]。10 μmol/L ATRA可促进143B细胞中miR-34a的表达，抑制Eag1和E2F1的表达（均 P<0.01）。与ATRA组比较，处理72 h后ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（41.0±2.2）%比（25.0±3.6）%， t=108.68， P<0.01]。与ATRA组比较，ATRA+miR-34a干扰组可恢复细胞的迁移和侵袭能力[（122±14）个比（64±10）个， t=21.06， P<0.01；（103±10）个比（59±8）个， t=24.27， P<0.01]，并可促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均 P<0.01）。与ATRA组相比，ATRA+E2F1过表达组可恢复细胞的增殖能力[细胞存活率（40.0±3.4）%比（24.0±3.1）%， t=108.74， P<0.01]，可恢复细胞迁移和侵袭能力[（78±12）个比（29±8）个， t=13.52， P<0.01；（75±12）个比（49±10）个， t=6.28， P<0.01）]，并促进细胞中Eag1和E2F1的mRNA和蛋白表达（均 P<0.01）。 结论:ATRA通过调控miRNA-34a-E2F1-Eag1信号通路抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭，其可能成为骨肉瘤有效的治疗药物之一。

目的:探讨肝动脉阻力指数（Hepatic artery resistance index，HARI)、miRNA-122a对脓毒症休克合并肝损伤的早期诊断及预后评估的临床价值。方法:选择2016年12月至2019年02月沧州市中心医院EICU收治的176例脓毒症休克患者作为研究对象，根据有无肝损伤分为无肝损伤组（90例）、肝损伤组（86例）。肝损伤组患者再按肝损伤程度分为轻度肝损伤组（20例）、中度肝损伤组（25例）、重度肝损伤组（41例）。脓毒症休克合并肝损伤患者根据28 d转归分为存活组（26例）和死亡组（60例）。选择健康体检者40例作为对照组。分析两组患者的临床资料，采用彩色多普勒超声测定肝动脉阻力指数（HARI)，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR)测定血清miRNA- 122a表达量。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析HARI、血清miRNA-122a对脓毒症休克合并肝损伤的早期诊断价值。采用二元Logistic回归分析影响脓毒症休克合并肝损伤患者预后的危险因素。结果:①与对照组比较，脓毒症休克无肝损伤组、脓毒症休克合并肝损伤组患者的HARI、血清miRNA-122a呈递增趋势，差异有显著统计学意义( P <0.01)。ROC曲线分析显示，HARI、血清miRNA-122a诊断脓毒症休克合并肝损伤的AUC分别为：0.872[95% CI=(0.813, 0.919)]、0.796 [95% CI=(0.728, 0.854)]。当HARI最佳临界值为0.738时，其诊断脓毒症休克合并肝损伤的敏感度为77.65%，特异度为83.53%。当miRNA-122a表达量最佳临界值为2.80时，其诊断脓毒症相关肝损伤的敏感度为71.76%，特异度为75.29%。当HARI联合miRNA-122a诊断脓毒症休克合并肝损伤的AUC为0.927[95% CI=(0.876, 0.961)]，最佳临界值为0.276时，其诊断脓毒症休克合并肝损伤的敏感度为91.76%，特异度为85.29%。②脓毒症休克无肝损伤组与轻度肝损伤组比较，HARI差异无统计学意义( P>0.05)，而血清miRNA-122a差异有统计学意义( P <0.01)。随肝损伤严重程度加重，HARI、血清miRNA-122a呈递增趋势，重度肝损伤组显著高于轻度和中度肝损伤组，差异有显著统计学意义( P <0.01)。③与存活组比较，单因素分析显示，脓毒症休克合并肝损伤28 d死亡组患者的肝损伤严重程度、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、PCT、Lac、miRNA-122a、HARI显著升高，差异有统计学意义( P<0.01)。④二元Logistic回归分析发现，肝损伤严重程度、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、HARI、miRNA-122a是影响脓毒症休克合并肝损伤患者预后的独立危险因素。 结论:HARI联合血清miRNA-122a检测对评估脓毒症休克合并肝损伤具有较高的敏感度和特异度，且对预后评估有一定的临床价值。

目的:探讨miR-122-5p对创伤性脑外伤后小胶质细胞凋亡、极化和炎症反应的影响。方法:建立创伤性脑外伤（traumatic brain injury，TBI）小鼠模型和细胞模型。使用TBI小鼠脑匀浆刺激星型胶质细胞产生外泌体，microRNA微阵列分析外泌体中显著改变的microRNA。实时荧光定量PCR检测TBI小鼠模型和TBI细胞模型中miR-122-5p表达。使用TUNEL凋亡染色、免疫荧光共聚焦、蛋白质印迹研究miR-122-5p抑制剂在TBI神经炎症中对小胶质细胞凋亡、小胶质细胞M1/M2表型转化、NLRP3通路及NFκB磷酸化的作用。结果:通过microRNA微阵列分析发现有83个下调miRNA（改变2倍以上， P <0.05）,其中miR-122-5p显著下调（ P<0.01），miR-122-5p在TBI小鼠及细胞模型中表达显著下降[(1.0±0.00） vs.(0.41±0.15)， P <0.001；[(1.0±0.00） vs.(0.34±0.07)， P<0.001]。TUNEL凋亡检测、免疫荧光染色结果表明抑制miR-122-5p表达，可以显著减轻LPS诱导的小胶质细胞凋亡[(8.03±1.30） vs. (3.17±0.34)， P<0.001]，促进小胶质细胞M1向M2表型转化，即M1表型极化减少[(56.96±13.70） vs. (34.70±3.47)， P =0.002]，M2表型极化增加[(30.46±3.67） vs. (40.74±2.49)， P =0.005]。蛋白质印迹结果表明miR-122-5p抑制剂降低NLRP3炎症小体活化[(0.77±0.10） vs. (0.51±0.11)， P =0.02]，降低NFκB的磷酸化[(0.73±0.08） vs. (0.50±0.07)， P =0.003]。 结论:miR-122-5p在TBI星形胶质细胞分泌的外泌体及小胶质细胞中表达下调,miR-122-5p抑制剂可以通过抑制TBI后NLRP3炎症小体通路的活化及NFκB的磷酸化，促进小胶质细胞M1向M2表型转化，减少小胶质细胞凋亡，从而减轻TBI后小胶质细胞炎症损伤。

目的 了解广州管圆线虫感染后大鼠脑组织转录组的表达水平.方法 将32只SD大鼠随机分为对照组(12只)和感染组(20只),感染组每只大鼠经灌胃感染40条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫,对照组灌胃等体积生理盐水.感染后1、7、14、21 d,对照组、感染组分别随机解剖3、5只,取脑组织制备石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色后观察脑组织病理变化.TRIzol法提取感染后14d大鼠脑组织RNA,逆转录为cDNA后测序.选取差异表达mRNA进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路分析,采用STRING数据库预测差异表达mRNA靶蛋白之间的蛋白质互作(PPI)关系.利用生物信息学方法构建差异表达基因的竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络.采用qPCR验证表达差异的lncRNA.结果 HE染色结果显示,感染广州管圆线虫后14d,感染组大鼠脑组织出现病理变化,脑海马区神经元胞浆固缩;感染后21 d,脑膜处可见寄生虫样组织.RNA测序结果显示,感染广州管圆线虫后14d,大鼠脑组织中差异表达mRNA的数量为955个(890个上调、65个下调);差异表达lncRNA的数量为193个(122个上调、71个下调).GO富集分析结果显示,差异表达mRNA主要富集在炎症反应、免疫应答等生物过程,细胞成分主要为质膜外侧的胞外空间、细胞表面等,分子功能主要为趋化因子活性、趋化因子受体结合等;KEGG代谢通路分析结果显示,差异表达mRNA主要参与细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子等信号通路.PPI分析结果显示,差异表达基因主要的靶点为趋化因子配体11、RT1-Da、丝氨酸家族E成员1等,均与免疫应答相关.ceRNA结果显示,显著富集的miRNA如mir-466b-3p、mir-1956、mir-207和mir-328a-5p等与免疫应答、细胞凋亡、血管生成等过程有关.qPCR结果显示,感染广州管圆线虫后,感染组大鼠H19的相对转录水平逐渐升高,在感染后21 d达到峰值,为15.074±3.366,高于对照组的 1.000±0.113(t=13.190,P＜0.05);RT1-CE6、LOC100910973 和 lncR-ncf1 的相对转录水平在感染后 14 d 达到峰值,分别为9.702±1.408、6.683±1.299和7.733±0.717,均高于对照组的 1.003±0.039、1.001±0.156和0.999±0.076(t=20.760、13.830、28.810,均 P＜0.01);AABR07030796.1 的相对转录水平在感染后 14 d 开始上升,至感染后21 d达到峰值,分别为4.485±0.236和5.068±1.608,均高于对照组的1.000±0.159和1.001±0.256(t=7.049、8.229,均 P＜0.01).感染广州管圆线虫后 14 d,大鼠脑组织中 H19、RT1-CE6、LOC100910973、lncR-ncf1和AABR07030796.1的qPCR结果和RNA测序结果均显示上调,表达趋势一致.结论 广州管圆线虫感染后大鼠脑组织转录组中获得955个差异表达mRNA和193个差异表达lncRNA,主要富集在炎症反应、免疫应答等生物过程.

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿外周血微小核糖核酸(miRNA)-122a和miR-146a水平与辅助性T细胞(Th)1/Th2/Th17免疫平衡的相关性.方法:选取2020年5月～2023年5月石家庄市妇幼保健院皮肤科收治的AD患儿100例为AD组,根据特应性皮炎评分(SCORAD)分为轻度组31例、中度组41例、重度组28例,另选取同期100名体检健康儿童为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测外周血miR-122a、miR-146a水平,流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Th17细胞比例,酶联免疫吸附法检测外周血Th1、Th2、Th17相关细胞因子[白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22]水平,并计算Th1/Th2/Th17比值.采用Pearson/Spearman相关性分析AD患儿外周血miR-122a、miR-146a与Th1、Th2、Th17和相关细胞因子及 Th1/Th2/Th17 的相关性.结果:AD 组外周血 miR-122a、miR-146a、Th1、Th1/Th2/Th17、IL-2、IFN-γ 水平低于对照组,Th2、Th17、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22 水平高于对照组(P均＜0.05).轻度组、中度组、重度组外周血 miR-122a、miR-146a、Th1、Th1/Th2/Th17、IL-2、IFN-γ 水平依次降低,Th2、Th17、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22 水平依次升高(P均＜0.05).Pearson/Spearman 相关性分析显示,AD患儿外周血 miR-122a、miR-146a 与 Th1、Th1/Th2/Th17、IL-2、IFN-γ 水平呈正相关(r/rs 分别为 0.679、0.677、0.684、0.706、0.693、0.689、0.671、0.694,P均＜0.001),与 Th2、Th17、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22 呈负相关(r/rs 分别为-0.690、-0.680、-0.681、-0.669、-0.675、-0.676、-0.676、-0.686、-0.682、-0.674、-0.680、-0.689,P 均＜0.001).结论:AD 患儿外周血 miR-122a、miR-146a 水平降低,与病情严重程度密切相关,可能通过调节Th1/Th2/Th17免疫平衡参与AD发生发展.

目的 探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究.方法 通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株.通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合.药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系.结果 miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高.CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联.结论 UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性.UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点.

目的 分析新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)中血清微小RNA(miRNAs)的表达变化,评估其对NRDS的诊断价值.方法 选取福建医科大学附属第二医院新生儿重症监护室(NICU)住院80例NRDS新生儿(NRDS组)为对象,采用随机数字表法选取同期住院104例普通早产儿为对照组.2组选取质检合格总样本各12例,采用illuminaHiseq测序平台完成高通量测序,检测出NRDS组相对于正常组的表达差异miRNAs,筛选出组间差异表达超过9倍的miRNAs为候选miRNAs.选取NRDS组68例,对照组92例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测2组样本中候选miRNAs表达水平差异与芯片结果是否一致.绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其诊断效能.使用线性相关分析评估表达差异miRNAs与NRDS患儿呼吸机使用天数及住院天数相关关系.结果 illuminaHiseq测序平台结果显示总计有119种差异表达的miRNA,共筛选出 6 种 miRNAs 作为候选标志物,分别是 miR-30a-5p、miR-206、miR-370-3p、miR-122-5p、miR-483-5p 和 miR-193a-5p,miR-30a-5p、miR-206、miR-122-5p 和 miR-483-5p 相对于对照组表达下降(P＜0.01).ROC曲线结果表明,血清miR-122-5p对诊断NRDS患儿的曲线下面积(AUC)为0.853,敏感度为88.2％,特异度为91.3％;血清miR-206对诊断NRDS患儿的AUC为0.798,敏感度为70.6％,特异度为89.6％;血清miR-30a-5p对诊断NRDS患儿的AUC为0.922,敏感度为87.6％,特异度为85.2％;血清miR-483-5p对诊断NRDS患儿的AUC为0.885,敏感度为76.5％,特异度为82.6％.相关关系结果表明,发现上述表达差异miRNAs对患儿呼吸机使用时间以及住院天数无相关.结论 NRDS患儿血清中miR-30a-5p、miR-206、miR-122-5p和miR-483-5p表达相对普通早产儿具有差异性,可能是NRDS的潜在诊断标志物.