目的:探讨单采血小板体外储存过程中其微小RNA(miRNA)的表达水平。方法:选择2022年3月至2023年5月成都市血液中心采集的15份单采血小板为研究对象。15份单采血小板采集自15例健康状况良好，符合《血站技术操作规程》(2019版)采集要求的单采血小板献血者。血小板捐献者的中位年龄为30岁(22，40岁)；男性捐献者为8例，女性为7例。将单采血小板置于恒温震荡保存箱中，温度(22±2)℃，振荡频率60 Hz条件下储存，分别于储存第1天(采集当天)、第5天和第7天的上午10点留取血小板标本3～5 mL。应用血细胞分析仪检测血小板常规指标，实验室pH计测定血小板pH值，流式细胞术(FCM)测定血小板CD62P表达水平，实时荧光定量PCR法测定miRNA-126、-145、-150、-197、-223的相对表达水平。血小板标本存储1、5、7 d时各项指标比较采用重复测量方差分析；采用Spearman相关性分析血小板miRNA表达水平与储存时间的相关性。本研究遵循的程序符合成都市血液中心伦理委员会要求[批准文号：伦审(研)2020年第04号]，并且于血小板捐献前与所有捐献者签署《献血者知情同意书》。结果:①随着储存时间延长，本组15份单采血小板标本的血小板压积(PCT)增大[储存1、5、7 d时分别为(0.68±0.21)%、(0.89±0.13)%、(0.99±0.17)%]，大血小板比例(P-LCR)上升[储存1、5、7 d时分别为(20.5±6.0)%、(26.0±3.4)%、(30.4±2.8)%]；pH值下降[储存1、5、7 d时分别为(7.2±0.1)、(7.1±0.2)、(7.0±0.2)]，并且差异均有统计学意义( F＝5.60， P＝0.007； F＝9.12， P＝0.001； F＝5.44， P＝0.004)；其余指标分别比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。②单采血小板标本储存1、5、7 d时，其CD62P表达水平分别为(6.3±2.9)%、(22.0±7.3)%和(38.4±12.1)%。随着储存时间延长，血小板标本的CD62P表达水平升高，并且差异均有统计学意义( F＝36.16， P<0.001)。③本组血小板标本随着储存时间的延长，其miRNA-126、-150、-197相对表达水平增加，而miRNA-145和-223相对表达水平下降；并且差异均有统计学意义( F＝88.58、32.64、33.59、35.42、22.91，均 P<0.001)。④本组单采血小板标本的储存时间与其miRNA-126、-150和-197的表达水平呈正相关( r＝0.811、0.812、0.856，均 P<0.001)，而与miRNA-145和-223的表达水平呈负相关( r＝－0.720、－0.767，均 P<0.001)。 结论:单采血小板在体外储存过程中，其miRNA-126、-145、-150、-197和-223表达水平发生明显变化，尤其是miRNA197。

目的:探讨黄芪甲苷对人内皮祖细胞(EPC)分泌外泌体及外泌体中微小RNA-126(miRNA-126)表达的影响。方法:取湖南中医药大学第一附属医院妇产科2019年出生的1名足月健康新生儿脐带血，采用密度梯度离心法分离单个核细胞并培养7 d，其间行形态学观察；取第3代细胞，采用CD31免疫磁珠分选法和双荧光染色法鉴定。将鉴定成功的EPC按照随机数字表法分为黄芪甲苷组和磷酸盐缓冲液(PBS)组。黄芪甲苷组细胞加入终质量浓度100 mg/L的黄芪甲苷培养24 h，PBS组细胞加入等体积的PBS培养24 h。培养结束后收集2组细胞培养上清液中的外泌体，采用蛋白质印迹法检测外泌体特征性标志物CD9、CD63和CD81表达，于透射电子显微镜下观察EPC外泌体(EPC-Exo)形态，采用纳米颗粒跟踪分析技术检测EPC-Exo的粒径，采用二辛丁酸法测定EPC-Exo的浓度(样本数为3)，采用反转录PCR法测定EPC-Exo中与血管新生相关miRNA-126-3p和miRNA-126-5p的表达(样本数为3)。对数据行独立样本 t检验。 结果:(1)培养第4天，细胞开始贴壁生长，圆形、梭形、条形等多形态同时出现；继续培养至第7天时，细胞边缘清晰，呈铺路石样排列，中央细胞呈圆形，周边细胞呈梭形。(2)CD31免疫磁珠分选法显示细胞膜染绿色，细胞核染蓝色；双荧光染色法显示细胞呈橙黄色。经以上鉴定，细胞被证实为EPC。(3)培养24 h，2组EPC-Exo的CD9、CD63和CD81表达均呈阳性，证实本实验已成功提取EPC-Exo。(4)培养24 h，2组EPC-Exo均呈圆形膜囊泡，形态无明显差异。(5)培养24 h，黄芪甲苷组中98.7%的EPC-Exo粒径为84.7～143.1 nm，PBS组中98.0%的EPC-Exo粒径为88.7～123.5 nm。(6)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo的质量浓度为(310±5)μg/mL，明显高于PBS组的(257±5)μg/mL， t＝13.369， P<0.01。(7)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo中miRNA-126-3p( t＝16.062， P<0.01)和miRNA-126-5p( t＝3.252， P<0.05)均明显多于PBS组。 结论:黄芪甲苷可改善人EPC分泌外泌体的功能，且所分泌的外泌体负载miRNA-126。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法:选取南阳市中心医院2017年5月到2019年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常肝细胞LO2、肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721和Huh7中miR-597表达水平；采用慢病毒在肝癌细胞系HepG2构建对照miRNA和miR-597过表达细胞系，分别为对照组和观察组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和异体移植瘤实验分析肿瘤细胞的增殖能力；采用流式细胞术分析细胞周期和凋亡水平；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-597的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测靶蛋白表达水平。组间计量资料比较采用 t检验。 结果:肝细胞LO2中miR-597表达水平(1.09±0.15)明显高于肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和Huh7 (0.37±0.14、0.45±0.16、0.58±0.14)，差异有统计学意义( t＝4.011、3.714、3.281， P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.87±0.26)明显高于观察组(1.53±0.22)，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(71.23±8.29)%]明显高于观察组[(38.54±4.98)%]，差异有统计学意义( t＝5.220， P<0.05)。对照组小鼠体内肿瘤体积[(1 284.59±209.32) mm 3]明显高于观察组[(799.58±109.43) mm 3]，差异有统计学意义( t＝5.530， P<0.05)。对照组小鼠肿瘤重量[(3.98±0.29) g]明显高于观察组[(1.42±0.19) g]，差异有统计学意义( t＝3.218， P<0.05)。对照组细胞S期比例[(34.21±4.58)%]明显高于观察组[(44.58±5.87)%]，差异有统计学意义( t＝4.719， P<0.05)。对照组细胞G 2期比例[(32.14±4.28)%]低于观察组[(20.37±4.29)%]，差异有统计学意义( t＝3.612， P<0.05)。对照组细胞凋亡率[(3.76±1.09)%]明显低于观察组[(24.54±3.68)%]，差异有统计学意义( t＝4.006， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因结果显示，Rab23是miR-597的靶基因。对照组细胞Rab23蛋白表达水平(1.48±0.18)明显高于观察组(0.79±0.15)，差异有统计学意义( t＝2.976， P<0.05)。 结论:miR-597通过Rab23调控肝癌细胞的增殖、周期和凋亡。

目的:探讨玻璃体腔注射雷珠单抗治疗湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)的临床疗效，及其对患者血浆中微小RNA(miRNA)-126、血管内皮生长因子(VEGF)-A的表达水平的影响。方法:前瞻性研究。纳入2018年6月—2019年6月蚌埠医学院第一附属医院眼科收治40例(40只眼)wAMD患者为wAMD组，其中男17例、女23例，年龄50～86岁。纳入同期在蚌埠医学院第一附属医院体检中心进行健康体检的中老年人为对照组(40人)，其中男18人、女22人，年龄53～81岁。wAMD组患者均接受单次玻璃体腔注射雷珠单抗0.05 mL治疗。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测对照组和wAMD组治疗前及治疗后1个月血浆miRNA-126相对表达水平，酶联免疫吸附试验检测血浆中VEGF-A水平。(1)比较对照组、wAMD组治疗前miRNA-126及VEGF-A的表达水平。(2)比较wAMD组治疗前、治疗后1个月血浆miRNA-126、VEGF-A表达水平，以及最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中央区视网膜厚度(CMT)、脉络膜新生血管(CNV)面积的变化情况。(3)分析wAMD组患者治疗前、治疗后1个月血浆miRNA-126的相对表达量与VEGF-A水平、CMT、CNV面积的相关性。结果:(1)wAMD组患者的miRNA-126相对表达量(0.86±0.11)低于对照组(1.04±0.10)，VEGF-A水平(329.09±17.58)pg/mL高于对照组(295.74±14.80)pg/mL，差异均有统计学意义( t＝8.010、9.179， P值均<0.01)。(2)wAMD组治疗后1个月miRNA-126相对表达量(1.47±0.27)较治疗前(0.86±0.11)增加，VEGF-A水平(315.36±15.44)pg/mL较治疗前(329.09±17.58)pg/mL降低，差异均有统计学意义( t＝19.410、8.048， P值均<0.01)；BCVA(0.45±0.11)较治疗前(0.83±0.16)增加，CMT与CNV面积分别为(296.53±21.52)μm，(0.58±0.18)mm 2，较治疗前的(311.88±37.25)μm、(0.70±0.17)mm 2均降低，差异均有统计学意义( t＝12.667、3.602、4.906， P值均<0.01)。(3)wAMD组患者治疗前及治疗后1个月血浆miRNA-126相对表达水平与VEGF-A、CMT、CNV面积均呈显著负相关( r治疗前＝－0.706、－0.723、－0.552， r治疗后1个月＝－0.783、－0.709、－0.620, P值均<0.01)。治疗前拟合VEGF-A、CMT、CNV面积与miRNA-126相对表达量之间的线性回归方程分别为： ?VEGF-A＝－112 XmiRNA－126＋426, ?CMT＝－243 XmiRNA-126＋522, ?CNV＝－0.84 XmiRNA-126＋1.42；治疗后线性回归方程分别为： ?VEGF-A＝－45.64 XmiRNA-126＋382， ?CMT＝－57.53 XmiRNA-126＋381， ?CNV＝－0.41 XmiRNA-126＋1.18。 结论:雷珠单抗可通过降低VEGF-A的表达，减少CMT及CNV面积，有效改善BCVA。雷珠单抗在取得临床疗效的同时，可能通过增强miRNA-126基因表达活性而延缓wAMD的进展。

目的:研究血清中微小核糖核酸(miRNA)的特异性表达与儿童扩张型心肌病(DCM)发生的相关性。方法:收集2013年11月至2016年3月就诊于北京安贞医院小儿心脏中心且被确诊为DCM的儿童血清(DCM组，16例)及同期于北京安贞医院体检的年龄性别匹配的健康儿童血清(健康对照组，12例)，并进行miRNA测序。后期扩大样本量(DCM组扩大为30例，对照组扩大为16例)，对测序结果中有统计学意义的11种miRNAs行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证。结果:血清miRNA测序结果，DCM组患儿较健康对照组儿童有172个miRNAs上调(fold change>2， P<0.001)，未发现下调的miRNAs。选择显著上调的top11miRNAs进行qRT-PCR试验验证，发现DCM组患儿血清中8个miRNAs(let-7f、let-7g、miR142-5p、miR143-3p、miR26a、miR27a-3p、miR27b-3p、miR126-3p)显著上调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在诊断DCM的受试者工作特征(ROC)曲线中，血清miR142-5p、miR143-3p、miR27b-3p、miR126-3p的曲线下面积分别为0.983、0.992、0.915、0.950，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:本研究发现4个血清miRNAs(miR-142-5p、miR-126-3p、miR-143-3p和miR-27b-3p)可用来区分DCM患儿和健康儿童。循环miRNAs可作为有效的儿童DCM筛查工具。

目的:探究糖尿病肾病(DN)疾病发展过程中的miRNA差异表达谱，并且进一步探讨miR-126-5p参与肾小管上皮细胞高糖诱导损伤的作用机制。方法:首先，从基因表达综合数据库(GEO)中下载已有的芯片数据，依次使用GEO2R、miRanda、基因本体论(GO)分析以及京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析对差异miRNA进行数据挖掘。随后，采用高糖诱导HK-2细胞损伤模型，再分为3组：高糖模型组、si-HOTAIR组、si-HOTAIR＋miR-126-5p inhibitor组，对3组细胞依次转染siRNA-NC、siRNA-HOTAIR以及siRNA-HOTAIR＋miR-126-5p mimic，并培养于含60 mmol/L葡萄糖的培养基中。流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平变化，CCK-8检测细胞增殖变化。结果:通过GEO进行数据挖掘分析发现，相较于普通小鼠，DN小鼠的肾脏组织中存在74个miRNA表达上调，80个miRNA表达下调，富集分析结果表明miRNA可以靶向Wnt、PKG、MAPK以及Rap1等信号通路，且miR-126-5p显著下调。高糖诱导HK-2细胞损伤模型中，实验结果表明，60 mmol/L高糖浓度下细胞增殖活性抑制效果较为显著( P<0.05)；高糖刺激会显著降低miR-126-5p的表达( P<0.05)。流式细胞仪结果表明，与高糖模型组相比，si-HOTAIR组细胞凋亡率显著下降( P<0.05)，而si-HOTAIR＋miR-126-5p inhibitor组细胞凋亡率显著上升( P<0.05)。CCK-8实验表明，与高糖模型组相比，si-HOTAIR组的细胞活力显著上升( P<0.05)；而si-HOTAIR＋miR-126-5p inhibitor组细胞活力则被抑制( P<0.05)。 结论:miR-126-5p可以抑制高糖诱导HK-2细胞凋亡，保护HK-2细胞。

目的:探讨miRNA-126-3p（miR-126-3p）对人单核细胞白血病THP-1细胞增殖和周期的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测miR-126-3p在THP-1细胞和从2022年5月至2023年1月山西省肿瘤医院收集的4名健康体检者外周血分离的单核细胞中的表达情况。构建过表达miR-126-3p载体，转染THP-1细胞（过表达miR-126-3p组），以转染空载体的THP-1细胞为对照。采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力，采用流式细胞术检测细胞周期。应用TargetScan软件预测miR-126-3p靶基因为RGS3，通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用蛋白质印迹法检测过表达miR-126-3p组THP-1细胞RGS3蛋白表达水平。结果:PCR检测结果显示，与健康人外周血分离的单核细胞相比，THP-1细胞miR-126-3p表达水平低（ P<0.05）。与对照组比较，过表达miR-126-3p组THP-1细胞在培养48 h和72 h后增殖能力均低（均 P<0.05），且细胞G 1期阻滞[G 1期细胞比例：（58.2±2.8）%比（44.1±2.4）%， P<0.05]。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-126-3p与RGS3的3'UTR结合。蛋白质印迹法检测显示，过表达miR-126-3p组THP-1细胞RGS3蛋白表达水平低于对照组。 结论:miR-126-3p可能通过抑制RGS3表达而抑制人单核细胞白血病THP-1细胞增殖和促进细胞G 1期阻滞。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) GSTM3TV2对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响，并探讨其与微小RNA(miR)-597的相互作用。方法:选取郑州大学附属南阳市中心医院、南阳市宛城区第一人民医院和郑州大学第一附属医院2016年5月到2018年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁和肝癌组织中GSTM3TV2和miR-597表达水平；在肝癌细胞系HepG2建立lncRNA对照组和GSTM3TV2 KD组细胞系，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell和体内异体移植瘤实验检测GSTM3TV2的体内外功能；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析GSTM3TV2与miR-597的关系；将miRNA抑制剂转染HepG2细胞，分析其作用机制。计量数据比较采用 t检验。 结果:肝癌组织中GSTM3TV2表达水平(2.96±0.34)明显高于癌旁组织(2.96±0.34)，差异有统计学意义( t＝4.819， P<0.05)。lncRNA对照组细胞48 h吸光度( A)值(2.17±0.22)明显高于GSTM3TV2 KD组(1.09±0.20)，差异有统计学意义( t＝3.429， P<0.05)。lncRNA对照组细胞侵袭数量[(154.82±13.83)个]明显高于GSTM3TV2 KD组[(87.29±10.43)个]，差异有统计学意义( t＝5.018， P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内成瘤体积[(1 048.45±251.30) mm 3]明显大于GSTM3TV2 KD组[(759.49±142.09) mm 3]，差异有统计学意义( t＝4.719， P<0.05)。lncRNA对照组细胞体内肿瘤重量[(1.09±0.21) g]明显高于GSTM3TV2 KD组[(0.61±0.15) g]，差异有统计学意义( t＝3.185， P<0.05)。lncRNA对照组细胞淋巴结转移数量[(15.29±3.39)个]明显多于GSTM3TV2 KD组[(8.22±2.09)个]，差异有统计学意义( t＝3.103， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶活性结果显示miR-597是GSTM3TV2的靶基因。lncRNA对照组细胞miR-597表达水平(1.09±0.21)明显低于GSTM3TV2 KD组(2.80±0.26)，差异有统计学意义( t＝3.529， P<0.05)。 结论:lncRNA GSTM3TV2通过调节miR-597促进肝癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性细胞生物学行为。

目的:探讨长链非编码RNA LINC00665在肝癌中的表达和对肝癌血管生成的调控作用及潜在分子机制。方法:收集2016年5月至2017年4月南京医科大学第一附属医院100例肝细胞癌患者的癌组织和相应的癌旁组织，并比较生存预后。实时定量聚合酶链反应检测LINC00665在肝癌组织和细胞中的表达。通过小管形成实验和鸡胚尿囊膜实验检测过表达LINC00665的Hep-3B肝癌细胞血管生成情况。生物信息学数据库预测LINC00665下游微RNA(miRNA)及靶基因，聚合酶链反应、Western印迹、双荧光素酶报告基因进一步检测LINC00665、miR-126-5p和血管内皮生长因子A(VEGFA)的关系。结果:LINC00665在肝癌组织中的表达(6.5±2.8)明显高于癌旁组织(4.8±3.1)，差异有统计学意义( t＝4.12， P<0.001)。100例肝癌患者根据LINC00665表达的中位数分组，LINC00665高表达组( n＝50)的累积生存率低于LINC00665低表达组( n＝50)，差异有统计学意义(χ 2＝3.79， P＝0.008)。与LINC00665组(过表达LINC00665的Hep-3B肝癌细胞)共培养后，人脐静脉内皮细胞小管形成的长度(596.0±22.3)μm、数量(36.3±4.5)个，均高于与NC组(仅感染空载体的Hep-3B肝癌细胞)共培养的人脐静脉内皮细胞小管形成长度(127.0±13.5)μm和数量(9.3±1.5)个，差异均有统计学意义( t＝31.15、9.82， P<0.001、 P＝0.001)。鸡胚尿囊膜实验与小管形成实验结果一致。Western印迹检测LINC00665组VEGFA蛋白的相对表达高于NC组，差异有统计学意义( t＝7.15， P<0.001)。使用StarBase和DIANA数据库预测和筛选LINC00665下游miR-126-5p。使用StarBase数据库对LINC00665/miR-126-5p/VEGFA轴的结合位点进行预测。双荧光素酶报告基因实验结果中，与miR-126-5p模拟物共转染的LINC00665、VEGFA载体荧光强度均下降。 结论:LINC00665在肝癌中高表达，并且与肝癌患者的不良预后相关。LINC00665通过调控miR-126-5p/VEGFA轴促进肝癌的血管生成。

目的:探讨血清中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板反应蛋白1(TSP-1)、miR-210与系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)的相关性及联合预测预后的价值。方法:回顾性分析2018年2月至2020年2月海口市人民医院(中南大学湘雅医学院附属海口医院)126例系统性红斑狼疮(SLE)患者的病历资料，依据治疗后6个月预后复发情况分为复发组( n＝23)、未复发组( n＝103)。比较两组一般资料、治疗前后血清NLR、TSP-1、miR-210水平、SLEDAI评分，分析治疗前后血清各指标水平与SLE患者SLEDAI评分、预后复发的关系，探讨血清各指标单一、联合预测预后的效能。 结果:复发组治疗前后血清NLR、TSP-1、miR-210水平、SLEDAI评分均高于未复发组(均 P<0.05)；两组治疗后血清NLR、TSP-1、miR-210水平和SLEDAI评分均较本组治疗前降低(均 P<0.05)。Pearson相关性分析可知，SLE患者血清NLR、TSP-1、miR-210水平与SLEDAI评分均呈正相关(均 P<0.05)；COX回归分析显示，将补体C3、补体C4水平、治疗前后SLEDAI评分等其他因素调整后，治疗前后血清NLR、TSP-1、miR-210仍与患者预后复发风险相关(均 P<0.05)；受试者工作特征(ROC)曲线显示，血清NLR、TSP-1、miR-210联合预测预后复发的AUC为0.907(95% CI：0.842~0.951)，灵敏度为86.96%，特异度为83.50%，较各指标单独预测价值明显提高。 结论:SLE患者血清NLR、TSP-1、miR-210水平与SLEDAI评分呈正相关，且各指标联合检测对患者预后具有较高预测价值，可为SLE诊治提供参考。