目的:探讨英夫利昔单抗联合miRNA-21抑制剂对肺癌A549细胞的影响。方法:体外培养A549细胞，随后将其分为4组（空白组、英夫利昔组、miRNA-21 inhibitor组和联合处理组）。CCK-8实验检测细胞增殖情况；流式细胞术实验检测细胞凋亡情况；Western blot检测蛋白表达。结果:miRNA-21 inhibitor组和联合处理组A549细胞存活率分别为（48.67%±2.83%），（25.69%±1.98%），差异有统计学意义（ P<0.001）；miRNA-21 inhibitor组和联合处理组中A549凋亡细胞比例分别为（46.73%±2.18%），（76.58%±3.67%），差异有统计学意义（ P<0.001）；凋亡相关蛋白检测中联合处理组的Caspase-3（1.21±0.26 vs 0.57±0.07）和Bad（1.08±0.11 vs 0.52±0.06）的表达量与miRNA-21 inhibitor组相比显著升高，Bcl-2（0.11±0.02 vs 0.32±0.06）的表达量显著降低，差异有统计学意义（ P<0.001）；联合处理组中，TNF-α（0.63±0.11、1.23±0. 22、1.18±0.17、1.14±0.17）和NF-κB p65（0.34±0.08、1.31±0.09、1.29±0.12、1.11±0.06）的表达量均降低，与其他3组相比差异具有统计学意义（ P<0.001）。 结论:英夫利昔单抗联合miRNA-21抑制剂在肺癌细胞中能发挥协同作用，抑制TNF-α/NF-κB信号通路，调节Bcl-2家族和Caspase-3的表达，促进细胞凋亡，从而抑制肺癌A549细胞增殖。

目的:观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与p21及视网膜新生血管（RNV）形成相关的miRNA。方法:实验研究。40只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常组和OIR组，每组20只。OIR组构建氧诱导RNV模型，正常组不做任何处理。小鼠17日龄时，处死小鼠，视网膜荧光铺片观察小鼠RNV发生情况；光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测正常组与OIR组之间差异表达的miRNA。所得差异miRNA靶基因分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析；通过Targetscan、MiRanda、MicroT-CDS数据库比对筛选可能与p21有关的miRNA及通路。组间两两比较采用独立样本 t检验。 结果:与正常组比较，OIR组小鼠视网膜无灌注区面积、RNV及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量增加，差异均有统计学意义（ t=18.800、9.025， P<0.05）。与正常组比较，OIR组有统计学差异表达的miRNA 54个，其中，上调、下调者分别为47、7个。从3个数据库与所得差异miRNA的比对结果中共筛选到与p21相关miRNA 13个，按差异倍数从高到低分别为miR-7218-5p、miR-322-5p、miR-224-5p、miR-335-5p、miR-329-3p、miR-362-3p、miR-532-5p、miR-20b-5p、miR-20a-5p、miR-195a-5p、miR-423-5p、miR-497a-5p、miR-129-5p。差异miRNA靶基因富集分析，得到1 112个GO条目及50条KEGG通路，其中50个GO条目和13条KEGG通路与p21相关。 结论:在OIR模型中共筛选出13个与P21相关的miRNA。

白癜风是一种皮肤黏膜色素脱失为特征的获得性自身免疫性皮肤病。炎症细胞因子，如干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-17、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、IL-21、IL-33、磷酸二酯酶(PDE)-4及转化生长因子(TGF)-β，在该病的进展中起着重要的作用，特别是IFN-γ/趋化因子配体(CXCL)10轴。近年来，靶向治疗通过调节与白癜风发病机制相关的细胞因子及其相应受体，对其治疗发挥了重要作用，JAK抑制剂及其与光疗联合治疗已被临床证实具有较好的治疗前景。本文全面评估各种生物制剂在白癜风治疗中的疗效和个体化用药选择，以期为临床药物治疗决策提供参考。

目的:探讨miRNA-372-3p（miR-372-3p）在胃癌组织及细胞中的表达及其对RAB22A表达的调控，并探讨其对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:使用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测山西省肿瘤医院2018年12月至2019年12月70例胃癌确诊患者癌组织和癌旁组织中miR-372-3p的表达水平。在胃癌MGC-803和SGC-7901细胞中转染miR-372-3p抑制剂，并以miR-372-3p NC（空载体）作为对照；分别使用克隆形成实验、CCK-8法和流式细胞术检测细胞克隆形成能力、细胞增殖能力和凋亡水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测MGC-803细胞miR-372-3p和RAB22A表达的相关性。以miRNA-21（miR-21）作为阴性对照，采用蛋白质印迹法检测MGC-803、SGC-7901细胞RAB22A蛋白的表达。结果:RT-PCR结果显示，与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-372-3p相对表达量上调，差异具有统计学意义（0.51±0.37比0.77±0.48， t=1.98， P=0.005）。不同肿瘤长径和病理分级的胃癌组织中miR-372-3p表达水平差异均有统计学意义（均 P<0.05）。体外实验表明，低表达miR-372-3p能抑制MGC-803细胞和SGC-7901细胞克隆的形成[（211±4）个比（410±5）个， t=2.78， P=0.001；（244±8）个比（423±7）个， t=2.76， P=0.001]，降低MGC-803和SGC-7901细胞增殖活性（MGC-803细胞48 h吸光度值0.39±0.06比0.57±0.03， t=3.18， P=0.01；MGC-803细胞72 h吸光度值0.50±0.05比0.81±0.06， t=2.78， P<0.01；SGC-7901细胞72 h吸光度值：0.50±0.09比0.79±0.09， t=2.77， P=0.01），提高MGC-803细胞早期凋亡率[（25.19±0.26）%比（20.02±0.04）%， t=4.30， P<0.05]。双荧光素酶报告基因实验发现，同miR-372-3p NC与RAB22A野生型基因共转染相比，miR-372-3p抑制剂与RAB22A野生型基因共转染后，MGC-803细胞荧光素酶活性下降，差异有统计学意义（1.00±0.04比0.53±0.06， t=3.18， P=0.01）；蛋白质印迹法结果显示，敲低miR-372-3p能抑制MGC-803、SGC-7901细胞RAB22A蛋白表达。 结论:胃癌组织miR-372-3p表达上调，miR-372-3p可能促进RAB22A的表达并调控胃癌的发生发展，可作为潜在的治疗靶标。

目的:探讨抑制长链非编码RNA生长停滞敏感基因5(GAS5)对结肠癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法:取结肠癌HCT116细胞，分为空白对照组(加入磷酸盐缓冲液)、阴性对照组(转染si-GAS5NC)、si-GAS5组(转染si-GAS5)和si-GAS5+miR-21抑制剂组(转染si-GAS5联合miR-21抑制剂反义寡核苷酸has-miR-21-5p)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染48 h后各组细胞中GAS5和miR-21的表达水平，荧光素酶基因报告实验验证GAS5与miRNA-21的结合位点，细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的增殖情况，克隆形成实验观察细胞的克隆形成能力，Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡，Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白(Snail、N-cadherin、vimentin、E-cadherin)、干细胞相关因子(Sox2、CD44、Oct2)和磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/Akt信号通路相关蛋白的表达情况。结果:转染后48 h，空白对照组、阴性对照组和si-GAS5组HCT-116细胞miR-21表达水平分别为1.00±0.10、1.00±0.10和1.80±0.20，吸光度分别为0.51±0.02、0.50±0.01和0.65±0.01，细胞克隆形成数分别为(90±4)个、(91±5)个和(200±8)个，侵袭细胞数分别为(118±3)个、(119±3)个和(150±4)个，迁移细胞数分别为(110±2)个、(108±2)个和(127±2)个，G 1期细胞比例分别为(49.3±2.1)%、(50.1±2.0)%和(42.2±1.1)%，S期细胞比例分别为(19.2±1.2)%、(20.2±1.1)%和(28.3±2.2)%，细胞凋亡率分别为(14.4±2.2)%、(14.5±2.1)%和(7.2±1.3)%，表明GAS5下调后HCT-116细胞miR-21表达水平升高，增殖、侵袭和迁移能力增强，G 1期细胞减少，S期细胞增加，细胞凋亡率降低(均 P<0.05)。GAS5下调后，HCT-116细胞中Snail、N-cadherin、vimentin、Sox2、CD44、Oct2和p-Akt的表达水平升高(均 P<0.05)，E-cadherin和PTEN的表达水平降低(均 P<0.05)。抑制miR-21后，可以逆转GAS5下调引起的PTEN/Akt信号通路相关蛋白表达水平的变化(均 P<0.05)。 结论:GAS5可作为miR-21的竞争内源性RNA，下调GAS5可通过激活miR-21/PTEN/Akt信号通路，促进EMT和肿瘤细胞干性的获得，从而促进结肠癌的发生发展。

目的:探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA，miR)-612的调控作用。方法:2017年1月至2020年3月，采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量；体外培养肾癌细胞ACHN，分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞；采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量；采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力；双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织( t＝52.113， P<0.05)，miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织( t＝47.062， P<0.05)；si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组( t＝18.007、21.169、18.514、21.466， P<0.05)，si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组( t＝16.188、18.984， P<0.05)，si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组( t＝23.398， P<0.05)；miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组( t＝14.920、19.551、17.441、24.512， P<0.05)，miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组( t＝14.950、14.062， P<0.05)，miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组( t＝24.820， P<0.05)；双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612；抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。 结论:干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。

目的 探讨蓝盆花醇提物抗肝纤维化(HF)的作用及机制.方法 采用四氯化碳灌胃法建立HF模型.通过观察肝组织病理学变化,检测HF指标[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)]及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平,考察低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)蓝盆花醇提物对HF模型大鼠的改善作用及可能机制.按1 800 mg/(kg·d)(以生药量计)灌胃大鼠蓝盆花醇提物制备含药血清,以低、中、高浓度(将含药血清稀释至10%、15%、20%)蓝盆花醇提物含药血清干预HSC-T6细胞,观察其对微小RNA-21(miRNA-21)表达的影响;将miRNA-21模拟物/抑制剂转染至HSC-T6细胞,并检测PI3K/Akt信号通路相关因子的mRNA和蛋白表达水平.结果 体内实验结果表明,低、中、高剂量蓝盆花醇提物均可显著改善HF模型大鼠肝组织病理学变化,降低其胶原百分比(P＜0.01),下调其HF指标及PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达(P＜0.01),上调其磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的mRNA及其蛋白表达(P＜0.01).体外实验结果表明,低、中、高浓度蓝盆花醇提物含药血清均可显著抑制miRNA-21的表达(P＜0.01);转染miRNA-21模拟物后,细胞中PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.01),PTEN的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.01);而转染miRNA-21抑制剂后,细胞中上述指标的变化与转染miRNA-21模拟物相反(P＜0.01).结论 蓝盆花醇提物可通过抑制miRNA-21表达、上调PTEN表达,进而抑制PI3K/Akt信号通路活性,最终发挥抗HF的作用.

[目的]探讨微小RNA-21(miR-21)、肺表面活性物质蛋白A(SP-A)、肺表面活性物质蛋白D(SP-D)在肺纤维化患者血清及MRC-5细胞中的表达及其意义.[方法]收集2020年10月至2021年6月本院收治的肺纤维化患者30例(肺纤维化组),另收集在本院体检的30例健康志愿者(健康组),检测两组血清中miR-21、SP-A、SP-D表达水平并比较.将MRC-5细胞分为空载病毒对照组(转染无意义miRNA慢病毒载体)、miR-21过表达组(转染miR-21模拟物载体)和miR-21沉默组(转染抑制剂慢病毒载体),检测各组MRC-5细胞中miR-21、SP-A、SP-D mRNA的表达水平并比较.[结果]肺纤维化组血清中miR-21及SP-A、SP-D水平显著高于健康组(P＜0.05);miR-21过表达组SP-A和SP-D水平显著高于空载病毒对照组(P＜0.05);miR-21沉默组SP-A和SP-D水平显著低于空载病毒对照组(P＜0.05).[结论]miR-21、SP-A和SP-D可作为肺纤维化的生物标志物,且可通过沉默miR-21来抑制SP-A和SP-D的表达,从而抑制肺纤维化的发生和发展.

目的 利用左炔诺孕酮(LNG)和miRNA-21-5p抑制剂(inhibitor)联合靶向多发性肿瘤抑制基因磷酸酶基因(PTEN)评估对子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用.方法 将实验用人子宫内膜癌细胞分为 Control组、LNG处理组、LNG处理+miR-21 NC 组和LNG处理+miR-21 inhibitor组;免疫组化检测LNG治疗前后子宫内膜癌患者内膜组织中PTEN表达;CCK8 和流式细胞仪筛选LNG最佳作用浓度和时间;实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-21-5p inhibitor处理后miR-21-5p mRNA表达水平;LNG联合miR-21-5p inhibitor处理后CCK8 检测增殖,流式检测凋亡,Transwell 检测侵袭,划线检测迁移,Western印迹检测细胞中PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和p-AKT蛋白表达水平.结果 与治疗前比,LNG治疗后子宫内膜组织中PTEN表达水平显著升高(P=0.000).筛选出LNG最佳浓度为100 μmol/L,时间为24 h.miR-21-5p inhibitor处理后miR-21-5p表达显著降低(P<0.05).与Control组相比,LNG组处理后细胞凋亡及PTEN表达显著升高,细胞迁移、侵袭能力及细胞活力显著下降(P<0.05),miR-21-5p、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达也明显下降(P<0.05);与LNG组相比,LNG+miR-21-5p inhibitor组细胞活力、细胞凋亡、迁移、侵袭能力、miR-21-5p表达、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K明显下降,PTEN表达则明显升高(P<0.05).结论 LNG联合miR-21-5p inhibitor具有协同抑制子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用,此过程与靶向上调PTEN并抑制PI3K/AKT通路活化相关.

背景:脊髓损伤后病理生理改变复杂,尚无有效的治疗手段.miRNAs作为可以精细调控多种基因表达的内源性非编码RNA,可为脊髓损伤的治疗提供新思路.目的:探究抑制miR-21a-5p对小鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响及可能的机制.方法:第1步:Alen's打击法构建小鼠脊髓损伤模型,提取术后3 d损伤处脊髓组织(n=24)对比假手术组(n=24)筛选出差异表达miRNA;第2步:脊髓损伤后鞘内注射miRNA抑制剂(antagomir-21a)构建观察组(n=24),对照组造模成功后鞘内注射等量的antagomir做对照(n=24)、假手术组(n=24)术后不做特殊处理;对比各组行为学评分(BMS评分),检测脊髓损伤相关标志物的表达.结果与结论:①小鼠脊髓损伤后miR-21a-5p的表达较假手术组显著升高(P<0.05);②观察组小鼠脊髓损伤后抑制miR-21a-5p,假手术组与脊髓损伤组小鼠运动功能评分差异明显(P<0.05),术后7 d观察组小鼠运动功能评分逐渐超过对照组,术后14 d显著高于对照组(P<0.05);③观察组小鼠脊髓组织中纤维连接蛋白与CSPGs的表达量低于对照组,且神经营养因子的表达高于对照组(P<0.05);④结果说明:小鼠脊髓损伤后miR-21a-5p的表达上调,抑制miR-21a-5p的表达可以抑制瘢痕形成并增加神经营养因子的分泌,从而促进运动功能的恢复.