目的:探讨瓣状核酸内切酶1(FEN1)、微小RNA-215-5p(miR-215-5p)在宫颈脱落细胞中的表达水平，并对其临床诊断进行分析。方法:前瞻性选取2017年5月至2019年5月在辽宁电力中心医院进行液基薄层细胞学检查(TCT)的236例患者作为研究对象，并根据TCT结果进行分组：正常宫颈或慢性宫颈炎56例(对照组)，宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ级组73例，CIN Ⅱ级组57例，CIN Ⅲ级组28例，宫颈癌组22例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p表达水平；免疫印迹(WB)法检测宫颈脱落细胞中FEN1蛋白水平；Pearson法分析宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p表达的相关性；ROC曲线分析宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p表达水平对宫颈癌的诊断价值。结果:对照组、CIN Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级组宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA和FEN1蛋白表达水平依次升高，miR-215-5p表达水平依次降低(均 P<0.05)；CIN Ⅲ级组与宫颈癌组宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、FEN1蛋白和miR-215-5p表达水平比较，差异无统计学意义(均 P>0.05)。miR-215-5p与FEN1 mRNA水平呈负相关( r＝-0.696， P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，以宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p水平诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)分别为0.850(95% CI：0.785~0.914)、0.845(95% CI：0.778~0.912)；二者联合检测诊断宫颈癌的AUC为0.861(95% CI：0.798~0.923)。 结论:CIN及宫颈癌患者宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA和FEN1蛋白表达水平升高，miR-215-5p表达水平降低，与CIN及宫颈癌的发生密切相关，可能作为潜在的诊断标志物。

目的:探讨微小RNA(miR)-215-5p对白细胞介素(IL)-1β诱导的骨关节软骨细胞凋亡的影响及其机制。方法:将骨关节炎软骨细胞ATDC5随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)处理对照组和IL-1β处理模型组。为了分析miR-215-5p对IL-1β诱导细胞凋亡的影响，进一步的将IL-1β组分为：模型组+miR对照组，模型组+miR-215-5p抑制剂组。细胞转染后采用10 ng/ml IL-1β处理软骨细胞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-215-5p和锌指结构E-box同源结合框2(ZEB2)的表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB2、p65、磷酸化p65、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白水平。将野生型ZEB2的3’-非编码区(pmiR-ZEB2-WT)或者突变型ZEB2的3’-非编码区(pmiR-ZEB2-Mut)分别与miR-215-5p模拟物(miR-215-5p mimic)和对照物(miR-NC)共转染细胞，双荧光素酶报告基因测定实验研究miR-215-5p与ZEB2的相互作用。结果:与对照组比较，miR-215-5p在IL-1β诱导软骨细胞凋亡模型中表达上调(2.87±0.07)倍。双荧光素酶报告实验发现ZEB2是miR-215-5p的直接作用靶点。miR-215-5p mimic处理可使转染pmiR-ZEB2-WT的细胞荧光素酶活性降低为miRNA对照组的40.2%，而在转染pmiR-ZEB2-Mut的细胞中miR-215-5p mimic组与对照组比较，差异无统计学意义。miR-215-5p抑制剂使IL-1β诱导的软骨细胞凋亡水平降低为对照组的50.9%，并且可降低软骨细胞凋亡标志物cleaved Caspase-3水平和核因子-κB(NF-κB) p65的磷酸化水平为对照组的68.2%和75.4%。结论:miR-215-5p通过靶向ZEB2促进白细胞介素-1β诱导软骨细胞凋亡。

Oral cancer(OC)is the most common form of head and neck cancer.Despite the high incidence and unfavourable patient outcomes,currently,there are no biomarkers for the early detection of OC.This study aims to discover,develop,and validate a novel saliva-based microRNA signature for early diagnosis and prediction of OC risk in oral potentially malignant disorders(OPMD).The Cancer Genome Atlas(TCGA)miRNA sequencing data and small RNA sequencing data of saliva samples were used to discover differentially expressed miRNAs.Identified miRNAs were validated in saliva samples of OC(n=50),OPMD(n=52),and controls(n=60)using quantitative real-time PCR.Eight differentially expressed miRNAs(miR-7-5p,miR-10b-5p,miR-182-5p,miR-215-5p,miR-431-5p,miR-486-3p,miR-3614-5p,and miR-4707-3p)were identified in the discovery phase and were validated.The efficiency of our eight-miRNA signature to discriminate OC and controls was:area under curve(AUC):0.954,sensitivity:86%,specificity:90%,positive predictive value(PPV):87.8%and negative predictive value(NPV):88.5%whereas between OC and OPMD was:AUC:0.911,sensitivity:90%,specificity:82.7%,PPV:74.2%and NPV:89.6%.We have developed a risk probability score to predict the presence or risk of OC in OPMD patients.We established a salivary miRNA signature that can aid in diagnosing and predicting OC,revolutionising the management of patients with OPMD.Together,our results shed new light on the management of OC by salivary miRNAs to the clinical utility of using miRNAs derived from saliva samples.

目的 探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制.方法 分别提取缺氧(1％氧浓度,缺氧组)和常氧(21％氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达.利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法对差异表达的miRNA即has-miR-215-5p进行鉴定,通过miRNA靶基因数据库网站(Target Scan)分析has-miR-215-5p的靶基因.Western Blot检测两组细胞中靶基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)的蛋白表达水平,细胞计数实验检测两组EEC的增殖情况,划痕实验检测两组EEC的迁移能力.结果 测序结果显示,缺氧组EEC中has-miR-215-5p表达显著上升(P＜0.001),RT-qPCR验证结果与测序结果一致.miRNA Target Scan数据库检索结果显示,BLCAP是has-miR-215-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示has-miR-215-5p与BLCAP-3'-UTR结合,结合位点突变后结合活性消失.Western Blot结果显示,与常氧组相比,缺氧组EEC中的BLCAP蛋白表达显著下降(P＜0.001).CCK-8及划痕实验分别提示与常氧组相比,缺氧组的EEC增殖能力显著降低、迁移能力显著增强(P＜0.001).结论 缺氧条件下EEC中has-miR-215-5p可能通过与BLCAP-3'-UTR结合,抑制BLCAP的表达活性,导致EEC的增殖降低与迁移增强.

目的 探讨基于多个外泌体微小RNA(miRNA)表达水平构建子痫前期(PE)风险模型的可行性,并验证其对PE的预测效能.方法 选择2019年6月—2021年12月建档且孕周≤20周的孕妇1037例作为研究对象,入组后收集所有患者首次建档的一般资料及实验室检查资料.通过qRT-PCR分析所有样本中外泌体miRNA表达情况(包括miR-155-5p、miR-215-5p、miR-203a-3p、miR-199a-5p及miR-125a-3p).而后对所有患者随访至妊娠结束,统计随访期间PE发生情况并根据结果将患者分为PE组及对照组.使用Cox回归分析PE的影响因素,以ggrisk包构建多miRNA风险模型,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估所构建模型对PE的预测效果.结果 截至2022年10月31日随访结束,最终完成随访974例(93.92%).PE组65例和对照组909例.PE组年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕12周腰围均大于对照组,吸烟史及饮酒史占比高于对照组(P＜0.05).PE组三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、血小板分布宽度、平均血小板体积、血红蛋白、miR-155-5p、miR-199a-5p、miR-215-5p水平均高于对照组,而促甲状腺激素、miR-125a-3p及miR-203a-3p水平低于对照组(P＜0.05).miR-125a-3p、miR-155-5p、miR-199a-5p、miR-203a-3p及miR-215-5p表达水平为PE发生的独立预测因子(P＜0.05).由上述外泌体miRNA构建的风险预测模型在PE发生方面具有良好的预测价值(AUC=0.998,P＜0.001),敏感度为96.92%(63/65),特异度为 93.94%(854/909).结论 miR-125a-3p、miR-155-5p、miR-199a-5p、miR-203a-3p及miR-215-5p与PE的发生相关,以上述外泌体中5个miRNA构建的PE预测模型效果较好.

目的 通过基因芯片检测新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型中差异性表达miRNA,构建HIE中miRNA及其靶基因调控网络.方法 将7d龄新生SD大鼠12 只随机分为HIE组及假手术对照组,每组6只.采用Rice法建立新生大鼠HIE模型,造模24h取新生大鼠海马组织,基因芯片检测HIE组和假手术对照组海马组织中差异性表达的miRNA,采用生物信息软件分析相关miRNA调控的靶基因及信号通路.结果 筛选出差异性表达的miRNA共22 个,其中表达上调9 个(mm u-miR-215-5 p,mmu-miR-1249-3p,mmu-miR-3072-5p,mmu-miR-324-3p,mmu-miR-690,mmu-miR-874-5p,11_10767,11_10888,13_12928_star)、表达下调共 13 个(mmu-miR-141-3p,mmu-miR-182-5p.mmu-miR-183-5p,mmu-miR-190a-3p,mmu-miR-200a-3p,mmu-miR-200b-3p,mm u-miR-200c-3p,mmu-miR-429-3p,mmu-miR-455-3p,mmu-miR-760-5p,mmu-miR-96-5p,6_5971_star,9_8784).GO功能分析显示,差异性表达的miRNA调控基因在生物过程中主要参与调节生物生长发育、神经元形成与分化过程,KEGG 通路分析显示主要有丝裂原活化蛋白激酶信号通路被激活.结论 差异性表达的miRNA可能参与调控HIE发病的机制,将为HIE的机制研究、临床诊断及药物设计提供理论依据和新的思路.

目的 筛选不同转移潜能肝癌细胞株的 microRNA (miRNA)差异表达谱,并预测分析差异表达miRNAs调控的靶基因与功能.方法 提取总RNA进行miRNA芯片分析,通过分析MHCC-97H(高转移)、Hep3B(不转移)两种不同转移潜能肝癌细胞株与正常肝细胞L02比较,以及两种肝癌细胞株相互比较的miRNA差异表达谱,筛选出差异表达明显的miRNAs进行qRT-PCR验证,利用4个靶基因预测软件(TargetScan、miRanda、miRWalk、miRDB)进行靶基因预测,并通过生物信息学分析来探讨候选靶基因的生物学功能.结果 与正常肝细胞 L02相比,肝癌细胞株 MHCC-97H、Hep3B中的 miR-192-5p、miR-215-5p 表达均明显上调,而miR-130a-3p、miR-196a-5p 则明显降低;与不转移肝癌细胞株Hep3B相比,miR-224-5p在肝癌细胞株 MHCC-97H中明显上调,而miR-146a-5p、miR-483-3p、miR-200b-3p则明显降低.qRT-PCR验证结果与芯片结果相一致.结论 MHCC-97H及Hep3B两种转移能力不同的肝癌细胞株的 miRNAs存在差异表达,这些差异表达的miRNAs与肝细胞癌的发生发展、转移侵袭密切相关.

目的 研究miRNA 452-5P及miRNA 215-5P在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并分析其诊断价值.方法 收集30组结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织,采用实时荧光定量PCR技术检测全部患者结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织中miRNA 452-5p、miRNA 215-5p的表达,分析其与临床病理资料之间的关系,并进行ROC分析.结果 miRNA 452-5P在结肠癌组织中表达显著下调(P<0.001),miRNA 215-5p在结肠癌组织中表达显著上调(P<0.001),两种miRNA与结直肠癌患者年龄、性别、分化程度、肿瘤位置、浸润深度、淋巴转移、Dukes分期等均不相关.miRNA 452-5p曲线下面积AUC=0.859(95％CI:0.719.0.999),miRNA 215-5p曲线下面积为AUC=0.879(95％CI:0.757.1.0).2-miRNAs panel曲线下面积为AUC=0.930(95％CI:0.833.1.0).结论 miRNA 452-5p在结肠癌组织中表达显著下调,miRNA 215-5p在结直肠癌组织中表达显著上调.2-miRNAs panel对结直肠癌诊断价值较高,可作为潜在的结直肠癌诊断价值的分子标志物和治疗靶点.

目的 探讨下调miR-215-5p对TGF-β诱导的人肺成纤维细胞IMR-90增殖的影响及其机制.方法 将体外培养的IMR-90细胞分为对照组、TGF-β组、TGF-β+ NC inhibitor组、TGF-β+ miR-215-5p inhibitor组.对照组细胞正常培养;TGF-β组给予10 ng/mL的TGF-β处理细胞;TGF-β+ NC inhibitor组和TGF-β+ miR-215-5p inhibitor组细胞先采用NC inhibitor或者miR-215-5p inhibitor转染细胞,24 h后加入10 ng/mL的TGF-β处理细胞.采用MTT法检测各组在转染后24、48、72、96 h的细胞增殖能力;流式细胞术检测转染48 h后细胞周期变化情况;荧光定量PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组细胞cyclinD1、RB1和α-SMA的表达.结果 转染后48、72、96 h,TGF-β组细胞增殖能力高于对照组(P均＜0.05),TGF-β+ miR-215-5p inhibitor组细胞增殖能力低于TGF-β+NC inhibitor组(P均＜0.05).与对照组相比,TGF-β组G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高(P均＜0.05);与TGF-β+ NC inhibitor组相比,TGF-β+ miR-215-5p inhibitor组G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低(P均＜0.05).与对照组相比,TGF-β组cyclinD1、αα-SMA的表达升高,RB1的表达降低(P均＜0.05);与TGF-β+ NC inhibitor组相比,TGF-β+ miR-215-5p inhibitor组cyclinD1、αα-SMA的表达降低,RB1的表达升高(P均＜0.05).结论 下调miR-215-5p对TGF-β诱导的人肺成纤维细胞IMR-90增殖具有抑制作用.该作用可能原因为下调miR-215-5p能够抑制RB1表达进而下调cyclinD1,阻碍TGF-β诱导的肺成纤维细胞的周期转换进而抑制肺成纤维细胞的增殖;同时,下调miR-215-5p也能够抑制α-SMA的表达阻碍TGF-β诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化.

目的 筛选原发性骨性关节炎(OA)膝关节软骨细胞中差异表达的环状RNA(circRNA)及miRNA,并分析其生物学功能、相关代谢通路及相互作用.方法 首先用GeneSpring software V13.0软件筛选出5例OA及5例正常对照的膝关节软骨细胞差异表达的CircRNA,然后对差异表达的CircRNA进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(采用KEGG通路数据库);将OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA原始数据(下载自ArrayExpress,获取号为:E-MTAB-3514)进行对数转换,然后使用Quantile方法对数据进行标准化处理,以P<0.05,OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA差异倍数≥2或≤0.5为筛选条件,用R包limma中的经验贝叶斯模型(eBayes)筛选差异表达的miR-NA;用miRror工具进行差异miRNA的靶基因预测,使用KOBAS软件对找到的靶基因进行GO及代谢通路注释富集分析.用miRanda软件对0A膝软骨细胞差异表达的miRNA进行miRNA-circRNA相互作用预测分析.结果 与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出1380个表达差异的circRNA,其中215个差异circRNA表达上调,1165个表达下调.分子功能层面,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合、钙通道调节剂活性;细胞组成层面,差异表达的circRNA主要影响细胞外基质成分、带状胶原纤维、纤维状胶原蛋白三聚体;生物学过程层面,差异表达的circRNA主要影响细胞成分形态发生、软骨细胞发育和肢体发育.差异表达的circRNA相关代谢通路与糖原生物合成、补体和凝血级联、PDGF信号途径、胶原纤维组装和其他多聚体结构有关.与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出差异表达miRNA 24个,其中上调表达及下调表达的miRNA各12个.生物学过程层面,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止、神经生长和细胞发育.细胞组成层面,主要影响细胞内部分、翻译释放因子复合体、膜结合的细胞器、核转录抑制因子复合物;在细胞组成层面,差异表达的miRNA主要影响有机环状化合物结合、核酸结合和杂环化合物结合;差异表达的miRNA主要与蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移、泛素蛋白酶体途径、基因表达和蛋白质代谢有关.与has-miR-762相关的circRNA有71个,与has-miR-18a-3p相关的circRNA有25个,与has-miR-136-5p相关的cir-cRNA有5个,与has-miR-3131相关的circRNA有17个,与has-miR3-189-3p相关的circRNA有29个.结论 OA膝关节软骨细胞中差异表达的circRNA有1380个,其中215个上调表达,1165个下调表达,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合等分子功能,细胞外基质成分、带状胶原纤维等细胞成分,糖原生物合成、补体和凝血级联等相关代谢通路.OA膝关节软骨细胞差异表达miRNA 24个,其中上、下调表达的miR-NA各12个,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止等分子功能,细胞内部分、翻译释放因子复合体等细胞成分,蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移等相关代谢通路.circRNA和miRNA共同通路有Cell adhesion molecules pathway、Circadian entrainment pathway;circRNA-miRNA相互作用网络中,has-miR-762、has-miR-18a-3p、has-miR-136-5p与circRNA关系最为密切.