Background::The pathogenesis of osteosarcoma (OS) is still unclear, and it is still necessary to find new targets and drugs for anti-OS. This study aimed to investigate the role and mechanism of the anti-OS effects of miR-296-5p.Methods::We measured the expression of miR-296-5p in human OS cell lines and tissues. The effect of miR-296-5p and its target gene staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1 on proliferation, migration, and invasion of human OS lines was examined. The Student’s t test was used for statistical analysis. Results::We found that microRNA (miR)-296-5p was significantly downregulated in OS cell lines and tissues (control vs. OS, 1.802 ± 0.313 vs. 0.618 ± 0.235, t= 6.402, P < 0.01). Overexpression of miR-296-5p suppressed proliferation, migration, and invasion of OA cells. SND1 was identified as a target of miR-296-5p by bioinformatic analysis and dual-luciferase reporter assay. Overexpression of SND1 abrogated the effects induced by miR-296-5p upregulation (miRNA-296-5p vs. miRNA-296-5p + SND1, 0.294 ± 0.159 vs. 2.300 ± 0.277, t= 12.68, P = 0.003). Conclusion::Our study indicates that miR-296-5p may function as a tumor suppressor by targeting SND1 in OS.

目的:探讨miRNA-296-5p介导第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸蛋白激酶(PTEN/PI3K/AKT)信号通路发挥抑制神经细胞SK-N-SH中肠道病毒71型(EV71)病毒复制的作用机制。方法:收集临床EV71病毒感染手足口病患儿及正常体检儿的血清样本，采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组儿童血清炎症因子降钙素原(PCT)、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-13的表达变化。取对数生长期经EV71病毒感染的人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞，设置对照组、miRNA-296-5p mimic组和miRNA-296-5p inhibitor组，根据Lipofectamine ? 2000?细胞转染试剂进行转染。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法观察三组细胞中EV71-VP1病毒基因mRNA和蛋白以及PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子表达。 结果:ELISA检测结果表明EV71病毒感染手足口病患儿血清炎症因子PCT、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-13的水平明显高于正常体检儿( P<0.05)。qRT-RCR和Western blot结果显示EV71病毒感染后神经细胞SK-N-SH中miRNA-296-5p和PTEN的mRNA和蛋白水平明显降低，而EV71-VP1和PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的mRNA和蛋白水平明显升高( P<0.05)；miRNA-296-5p mimic组中PTEN表达明显升高，同时抑制EV71-VP1的表达和PI3K/AKT信号通路的活化，而miRNA-296-5p inhibitor组可逆转上述作用( P<0.05)。 结论:miRNA-296-5p通过靶向PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制神经细胞SK-N-SH中EV71病毒的复制，同时降低细胞炎症反应，靶向miRNA-296-5p及其下游PTEN/PI3K/AKT信号通路有望为临床EV71病毒导致的手足口病治疗提供可行的治疗靶点。

目的:探讨miRNA-296-5p（miR-296-5p）对缺氧诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其相关机制。方法:选择人胰腺癌细胞株PANC-1；收集上海市奉贤区中心医院和蚌埠医学院附属第一医院2010年1月至2014年12月55例胰腺癌患者手术切除的胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织。采用免疫组织化学及原位杂交法检测胰腺癌及癌旁正常胰腺组织芯片中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、miR-296-5p的表达水平，分析二者的相关性及其与患者临床病理特征的关系。PANC-1细胞分为缺氧组和常氧组，采用Transwell法测定两组细胞迁移与侵袭能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-296-5p及HIF-1α mRNA表达。转染小干扰RNA（siRNA）干扰HIF-1α的表达，将细胞分为PANC-1组（空白对照）、PANC-1-NC组（阴性对照）、PANC-1-siRNA组，检测miR-296-5p的表达；同时转染miR-296-5p激动剂和抑制剂，分为Agomir-miR-296-5p组（激动剂组）、Agomir-miR-296-5p-NC组（激动剂阴性对照组）、Antagomir-miR-296-5p组（抑制剂组）、Antagomir-miR-296-5p-NC组（抑制剂阴性对照组）；Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力。采用荧光素酶报告基因系统验证miR-296-5p启动子区是否存在HIF-1α的结合位点。结果:胰腺癌组织HIF-1α高表达率高于癌旁正常胰腺组织[81.8%（45/55）比0（0/10）， P<0.01]；胰腺癌组织miR-296-5p高表达率低于癌旁正常胰腺组织[12.7%（7/55）比90.0%（9/10）， χ2=27.23， P<0.01]。HIF-1α表达和miR-296-5p表达呈负相关（ r=-0.53， P<0.01）；miR-296-5p低表达与肿瘤长径、TNM分期、淋巴结转移均有关（均 P<0.05）。常氧组PANC-1侵袭细胞数为（15.3±2.1）个，缺氧组为（24.7±1.5）个，差异有统计学意义（ t=0.26， P=0.003）；常氧组PANC-1迁移细胞数为（20.7±3.8）个，缺氧组为（32.7±1.2）个，差异有统计学意义（ t=5.25， P=0.006）。常氧组PANC-1细胞HIF-1α mRNA相对表达量为0.30±0.02，缺氧组为1.00±0.01，差异有统计学意义（ t=56.45， P<0.01）；常氧组PANC-1细胞miR-296-5p相对表达量为3.05±0.20，缺氧组为1.14±0.04，差异有统计学意义（ t=16.05， P<0.01）。PANC-1组、PANC-1-NC组、PANC-1-siRNA组侵袭细胞数分别为（24.7±1.5）个、（25.7±1.5）个、（12.0±1.7）个，差异有统计学意义（ F=68.13， P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞侵袭能力下降（ t=9.50， P=0.001）；迁移细胞数分别为（32.7±1.2）个、（37.0±1.0）个、（17.3±1.2）个，差异有统计学意义（ F=262.09， P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞迁移能力下降（ t=16.26， P<0.01）。Antagomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力增强（均 P<0.05）；Agomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力减弱（均 P<0.05）。荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性结果显示，miR-296-5p存在与HIF-1α结合的靶点。 结论:HIF-1α通过负向调控miR-296-5p在缺氧诱导的胰腺癌细胞的侵袭、迁移中发挥重要作用。

目的 了解单采血小板在深低温保存过程中凋亡相关micmRNA (miRNA)的表达改变.方法 应用miRNA微孔板芯片技术分析-80℃保存不同时间单采血小板凋亡相关miRNA表达谱的差异,同时利用qRT-PCR技术验证该结果的准确性;采用生物信息学软件预测差异表达miRNA可能的靶基因.结果 与新鲜单采血小板相比,凋亡相关miRNA表达谱在血小板-80℃保存5d时无明显变化、保存7d时仅有2种明显上调变化的miRNA:miR-216和miR-296.选择表达谱中miR-216 miR-296 miR-7和miR-16共4种miRNA做qRT-PCR验证:以新鲜血小板表达水平为基准值1,-80℃保存5、7d后miR-216的相对表达量分别为1.81±0.21和2.88±0.23,miR-296的相对表达量分别为2.27±0.20和3.85±0.17,miR-7的相对表达量分别为0.89±0.06和0.76±0.03,miR-16的相对表达量分别为1.12±0.35和1.40±0.32,miR-216和miR-296在＜7 d保存过程中表达上调(P＜0.05),miR-7和miR-16的表达未发生明显变化(P＞0.05).结论 短期(＜7 d)深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的表达谱接近新鲜单采血小板.

目的 对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者外周血血清miRNA差异表达分析,为筛选出T2DM发生发展有关的miRNA分子标记物奠定基础,从而为T2DM预防、早期诊断和治疗方案提供指导.方法 采用Gene-ChipTM miRNA 4.0 Array筛选3组受试者外周血血清(T2DM组、T1DM组、对照组)的差异miRNA,并对差异miRNA进行靶基因预测和靶基因信号通路富集分析(KEGG).结果 T2DM组分别与对照组,T1DM组相比,hsa-miR-505-3p和hsa-miR-548an均上调,hsa-miR-296-3p,hsa-miR-3160-5p,hsa-miR-33a-5p,hsa-miR-572和hsa-miR-96-5p均下调.通过靶基因预测和Pathway分析,筛选出5个miRNA(hsa-miR-505-3p,hsa-miR-548an,hsa-miR-296-3p,hsa-miR-3160-5p,hsa-miR-33a-5p,hsa-miR-572和hsa-miR-96-5p)、7个基因(MTOR,SLC2A2,PRKCE,IRS2,IRS1,MAPK8,MAPK10)可能与2型糖尿病胰岛素抵抗相关.结论该研究筛选出的5个miRNA和7个基因,可为2型糖尿病胰岛素抵抗的研究提供理论基础.

目的 研究OBI患者血浆特征性miRNA表达谱,为进一步明确miRNAs在其发生和发展中相关分子机制奠定基础.方法 收集2017年11月-2018年9月在本站初筛HBsAg-/HBV-DNA+并经随访确诊为OBI的无偿献血者血浆,同时收集年龄、性别相匹配的23名健康献血者血浆.从中分别选取3例应用miRNA测序技术进行miR-NA表达谱分析;随后采用qRT-PCR对有显著差异表达的miRNAs进行验证;最后通过TargetScan7.1和miRDB v5对筛选出的miRNAs的靶基因进行预测,并对靶基因进行KEGG通路和GO功能富集分析.结果 与健康献血者相比,OBI患者血浆中有32个miRNAs表达存在统计学差异(FC≥1.5,P＜0.1,CPM≥1),包括16个上调的hsa-miR-7706,-511-5p,-1299,-3913-5p,-99b-3p,-503-5p,-296-3p,-501-3p,-3158-3p,-3615,-15b-5p,-451a,-486-5p,-25-3p,-106b-3p,-92a-3p,和16个下调的hsa-miR-187-3p,-219a-5p,-491-5p,-514a-3p,-221-5p,-132-5p,-203a-3p,-3168,-206,-218-5p,-1224-5p,-1-3p,-9-5p,-30a-5p,-30c-5p,let-7f-2-3p.生物信息学分析表明,这些差异表达的miRNAs主要参与基因表达和转录、细胞发育和代谢、蛋白修饰和激酶活性调控等相关的多种生物学过程,以及包括PI3K/Akt在内的多条信号通路.最后,qRT-PCR验证结果显示,在OBI患者血浆中hsa-miR-486-5p,-25-3p和-92a-3p表达量显著高于健康献血者,hsa-miR-1-3p显著低于健康献血者(P均＜0.05),与测序结果相符合;尽管hsa-miR-206表达量也低于健康献血者,但无统计学意义.结论 在OBI患者血浆中同样存在特征性miRNA表达谱,其在HBV感染的特定过程中可能起到重要作用,将其筛选鉴定出有助于对OBI的病理机制的阐述和将来在临床辅助筛查诊断中的应用.

目的 探讨蒙古族高血压病人和汉族高血压病人血管内皮细胞微小RNA(miRNA)表达谱之间的差异关系.方法 将2017年9月—2018年9月赤峰市医院、锡林郭勒盟医院、海拉尔区人民医院就诊的128例蒙古族高血压病人作为观察组,将136例汉族高血压病人作为对照组.比较蒙古族和汉族高血压病人血管内皮细胞miRNA表达谱.结果 ①蒙古族高血压病人血液中hsa-miR-132、hsa-miR-192、hsa-miR-212、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-17、hsa-miR-30、hsa-miR-72、hsa-miR-144、hsa-miR-150、hsa-miR-638、hsa-miR-1249和hsa-miR-185表达上调,hsa-miR-155、hsa-miR-27b、hsa-miR-149、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-133b、hsa-miR-1825、hsa-miR-1280、hsa-miR-150表达明显下调.②miRNA差异表达量与高血压分级有关,即高血压分级越高,上调或下调越大,3级高血压最明显.③miRNA-132、miRNA-192、miRNA-212、miRNA-361-5p、miRNA-17、miRNA-155、miRNA-27b的特异度和敏感度较高,可作为蒙古族高血压病人与汉族高血压病人差异的标记物.结论 蒙古族与汉族高血压病人血液中miRNA表达存在差异,miRNA-132、miRNA-192、miRNA-212、miRNA-361-5p、miRNA-17、miRNA-155、miRNA-27b的特异度和敏感度较高,可作为蒙古族高血压病人与汉族高血压病人差异的标记物.

目的 利用高通量测序技术筛选卵巢储备功能减退(DOR)与卵巢功能正常卵泡液外泌体中差异表达的miR-NAs,探讨其对DOR的发病影响.方法 收集DOR患者和卵巢功能正常者(对照组)的卵泡液各15例,各组每5例卵泡液混合为均一样本提取外泌体,共进行3次生物学重复.使用Illumina HiSeq4000测序平台对DOR组和对照组卵泡液外泌体中的miRNAs进行测序分析,使用miRanda和TargetScanS软件、GO以及KEGG数据库对差异显著的miRNAs进行靶基因预测、生物学功能富集以及信号通路预测.结果 与对照组相比,DOR卵泡液外泌体有80个显著差异表达的miRNAs,其中31个表达上调(包括hsa-miR-4792、hsa-let-7c-3p和hsa-miR-184等),49个表达下调(包括hsa-miR-136-3p、hsa-miR-296-3p和hsa-miR-337-5p等)(P<0.05);通过miRanda和TargetScanS的算法预测所有差异表达miRNA的靶基因共17159个,经GO和KEGG分析发现,这些靶基因主要富集的生物学功能有电离型谷氨酸受体信号通路、氨基酸转运调节、脂多糖介导信号通路及发育相关的凋亡过程等,主要参与调节的信号通路有趋化因子信号通路、环磷酸腺苷信号通路、肿瘤坏死因子信号通路及丝裂原活化蛋白激酶信号通路等.结论 来源于DOR和卵巢功能正常者的卵泡液外泌体的miRNAs表达谱存在显著差异,差异表达的miRNAs可能在DOR的发生中起到重要的调控作用,这些miRNAs可能经过靶基因参与调节多种生物学功能以及信号通路进而影响DOR的病理生理过程.

目的 研究血小板微RNA(microRNA)基因miR-96-5p在血小板储存过程中抗凋亡的机制,探讨血小板储存时间的影响因素.方法 用定量PCR方法检测储存起始和储存至第5天的健康血液捐献者的单采血小板中的24种与凋亡相关的miRNAs的表达水平的变化,检测结果进行统计学分析,判断miRNA在调节血小板存活或者凋亡方面的作用.结果 与储存起始比较,血小板储存至第5天miR-96-5p、miR-16-5p、miR-155-5p、miR-148a-5p和miR-296-5p的表达显著上升(P＜0.01),而miR-7-5p、miR-145-5p、miR-15a-5p、miR-25-3p以及miR-24-3p的表达显著下降(P＜0.01).转染miR-96-5p抑制物至血小板72 h后,增加了细胞半胱氨酸蛋白酶-3(cas-pase-3)的活性,抑制了Bcl-2和Bcl-xl的表达,促进了Bax的积累和活性caspase-3的加工.结论 miR-96-5p在血小板储存中可能发挥抗凋亡作用.