离断肢（指）体再植是挽救创伤性肢（指）体离断的首要治疗方法,如何提高手术的成功率以及术后的功能恢复至关重要。人的肢（指）体一旦离体后血液循环将停止,正常的生理代谢会被打乱,从而出现细胞变性、组织坏死等一系列的生理、病理变化,极大地影响肢（指）体再植的治疗效果。因此，如何科学地降低离断肢（指）体组织的代谢和减轻后续的缺血再灌注损伤,提高肢（指）体再植术成功率,是肢（指）体再植领域的热点问题。本文就现有的肢（指）体保存方法研究现状以及进展做出综述,通过大量检索和分析文献,总结了目前肢（指）体保存方法的优缺点,希望借此能为临床保存离断肢体提供参考。

目的:总结国内外各种肢体保存方法的研究进展，并分析不同方法保存肢体的效果。方法:广泛查阅国内外有关肢体保存方法的文献，对研究进展进行总结分析。结果:目前肢体保存方法主要包括低温干燥冷藏法、深低温冷冻法、低温灌注液灌注法、体外循环全血灌注法、高压氧法、异位寄养法。上述方法均能在不同程度上延长组织细胞活性，降低缺血—再灌注损伤，提高再植成活率及功能恢复。结论:根据断肢损伤情况、所处环境以及再植要求，如何完善保存方法并合理应用，有机结合，联合应用，扬长避短，甚至研发出更适合复合组织保存的技术及方法，将对离断肢体再植成活率及功能的恢复产生积极的意义。

目的:探讨二次冻融对胚胎移植临床结局的影响。方法:收集2015年—2020年在深圳市罗湖区人民医院生殖医学科行二次冻融胚胎移植的48个周期为观察组，随机选取同期实施一次冻融胚胎移植的98个周期为对照组。比较两组年龄、内膜厚度、移植胚胎数、移植优质胚胎数、胚胎复苏率、种植率、临床妊娠率、流产率、异位妊娠率及活产率。结果:两组患者年龄、内膜厚度、移植胚胎数与移植优质胚胎数比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。两组胚胎复苏率、异位妊娠率、流产率与活产率比较差异无统计学意义(均 P>0.05)。观察组的胚胎种植率与临床妊娠率显著低于对照组(32.47% vs 55.70%，39.58% vs 66.33%，均 P<0.05)。 结论:胚胎经过二次冻融再移植，临床妊娠率明显低于对照组，反复冻融可能影响了胚胎后续发育潜能。

目的 探索自体颅骨冷冻保存方案,包括保存温度、保存时间、保存方法以及管理流程.方法 回顾性分析2016 年1 月—2021 年12 月于宁夏医科大学总医院神经外科行去骨瓣减压术+自体颅骨回植术的325 例患者的临床资料,并结合相关文献进行复习.依据探索性保存方案使用之前和使用之后,将2016-2018 年的数据分为旧管理组,2019-2021 年的数据分为新管理组,进行两组数据自体颅骨回植效果的评价研究.结果 自体颅骨冷冻保存平均时间122.9 d.行回植术后平均住院时间为 12.3 d,经过新保存方案和管理流程应用之后,颅内感染率由3.4%降低到 1.7%.结论-80℃深低温保存自体颅骨效果良好,可有效减少颅内感染发生率.

目的 比较不同供体来源的同种异体血管在长时间深低温保存后出现的病理学差异.方法 将深低温保存时间超过3年的同种异体髂动脉分为脑死亡器官捐献(donation after brain death,DBD)组和心死亡器官捐献(donation after circulatory death,DCD)组,每组随机选取10例,复温后取样,通过苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色以及Masson染色观察血管的病理特点.结果 与DBD组对比,DCD组供体经历的热缺血时间较长(P＜0.01).经过长时间深低温保存后,DCD组血管在HE染色下的血管中膜损伤评分、外膜损伤评分和总体损伤评分高于DBD组(P＜0.05),其中血管外膜和中膜损伤评分与热缺血时间呈正相关.在Masson染色下,DCD组血管胶原纤维光密度值低于DBD组(P＜0.05),且该值与热缺血时间呈负相关.结论 DBD供体来源的同种异体髂动脉超3年深低温保存的质量优于DCD供体来源血管.

在医学解剖学、病理学、以及考古学等多个领域,人体标本发挥着重要的作用,因此完好地保存人体标本的重要性不言而喻.目前,国内外用于保存人体标本的方法有很多种,包括低温保存、液体保存、脱水保存等.其中液体保存最易推广,使用最为广泛.人体标本的保存液配方有上百种,甲醛是应用最广泛的保存液成分[1],但是甲醛在保存方面依然有很多不足,对于不同用途的人体标本达不到相应的保存需求,而且其对标本研究人员健康的损害日渐受到重视,它在保存液中的"黄金地位"已有所动摇.例如,解剖学、胚胎学等学科的教学标本,由于教学工作者与学习者需要长期接触人体标本,保存液对师生身心健康的影响越来越受到重视,降低保存液中甲醛含量和寻找甲醛替代品日益得到重视.而对于组织学、病理学等学科的解剖标本除了对形态完整性有要求,还要求保存液能更好地使标本保湿、保色,以达到与取样时标本物理性状的最大相似度.还有一些特殊标本的保存也值得深入研究,古代尸体标本,稀有样本的DNA、蛋白质等分子含有大量的生物进化信息,具有重大考古学、遗传学意义,因此除了需要维持标本的基本形态,更重要的是细胞分子水平的保存.但甲醛在保存DNA方面效果不佳,会导致DNA断裂[2]、提取的标本DNA质量下降或有效DNA成分随时间推移减少[2]等问题.正是由于这些不足,国内外科研人员正广泛地研究和开发新的人体标本保存液.现对近年来改良人体标本保存液的研究进展进行综述.

目的 了解单采血小板在深低温保存过程中凋亡相关micmRNA (miRNA)的表达改变.方法 应用miRNA微孔板芯片技术分析-80℃保存不同时间单采血小板凋亡相关miRNA表达谱的差异,同时利用qRT-PCR技术验证该结果的准确性;采用生物信息学软件预测差异表达miRNA可能的靶基因.结果 与新鲜单采血小板相比,凋亡相关miRNA表达谱在血小板-80℃保存5d时无明显变化、保存7d时仅有2种明显上调变化的miRNA:miR-216和miR-296.选择表达谱中miR-216 miR-296 miR-7和miR-16共4种miRNA做qRT-PCR验证:以新鲜血小板表达水平为基准值1,-80℃保存5、7d后miR-216的相对表达量分别为1.81±0.21和2.88±0.23,miR-296的相对表达量分别为2.27±0.20和3.85±0.17,miR-7的相对表达量分别为0.89±0.06和0.76±0.03,miR-16的相对表达量分别为1.12±0.35和1.40±0.32,miR-216和miR-296在＜7 d保存过程中表达上调(P＜0.05),miR-7和miR-16的表达未发生明显变化(P＞0.05).结论 短期(＜7 d)深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的表达谱接近新鲜单采血小板.

目的 通过微透析定量检测兔离断后肢经10％二.甲基亚砜灌注后的保护剂浓度,并观察经深低温冷冻-复温后血管、肌肉损伤状况,讨论该复合组织深低温保存预处理方法的保护效果.方法 2013年6月至2016年6月,取离断兔后肢,以10％二甲基亚砜自股动脉灌入,利用微透析技术进行取样,100 min内每5 min取样一次,所取样本采用冰点渗透压仪检测浓度,以不同时间点的平均浓度绘制时间-浓度变化曲线;将样本随机分为新鲜组、实验组、对照组,经冷冻-复温后通过苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化、电镜观察血管和骨骼肌损伤状况.结果 10％二甲基亚砜在灌注30 min后曲线趋于平缓,浓度稳定在5％左右;经该方法预处理的复合组织经深低温冷冻-复温后观察微观形态,可见骨骼肌损伤较重,血管内皮组织损伤尚可.结论 10％二甲基亚砜灌注的兔离断后肢,其肌肉内浓度仅能达到5％,无法达到10％的有效保护浓度;同时该方法对血管内皮的深低温冻存的保护尚可,但无法对骨骼肌深低温冷冻提供有效的保护.

目的:探讨银制封闭式玻璃化冷冻载体促进人卵巢组织冷冻后移植严重免疫缺陷(SCID)鼠新生血管效果.方法:收集2015年4月至2016年6月在我院妇科手术治疗的患者卵巢组织共8例,每例患者标本随机等量分配到银制封闭式冷冻管及传统封闭式冷冻管玻璃化冷冻保存.选取40只SCID鼠,分为银制封闭式玻璃化冷冻管组及传统封闭式玻璃化冷冻管组(每组20只),分别移植两种封闭式玻璃化冷冻法复苏后的卵巢皮质到SCID鼠皮下,测定CD31反映卵巢皮质新生血管,比较两组人卵巢组织冷冻复苏后移植SCID鼠皮下保存效果.结果:移植后3天和7天,两组中卵巢皮质新生血管数差异无统计学意义(P＞0.05);移植后14天和21天,银制封闭式玻璃化冷冻管组中卵巢皮质新生血管数高于传统封闭式玻璃化冷冻管组(P＜0.05).结论:银制封闭式玻璃化冷冻管与传统封闭式玻璃化冷冻管相比能更好地保存卵巢皮质功能,在深低温保存人卵巢组织中具有应用价值.

目的 研制速冻箱及无源型血液运输箱,用于战时深低温保存红细胞的短途运输.方法 速冻箱采用深冷混合工质节流制冷机作为冷源,有效容积约为60 L.运血箱由填充相变介质HFC-4310 mee的不锈钢封装盒和保温箱组成,内部有效容积约为10 L.结果 速冻箱空载时,箱内温度从常温降至-80℃,所需时间约为70 min,箱内极限温度为-128℃,降温时间约180 min;负载后箱内温度降至-125℃,约需500 min.将封装盒从-125℃条件下速冻箱中取出移至运血箱中,随后从-80℃冰箱中取出冰冻红细胞(用水替代)15袋(500 ml/袋)放入运血箱,运血箱内温度维持在-65℃以下的时间可达到10 h.结论 研制的低温速冻箱及配套使用的相变材料运血箱可实现红细胞低温保存的短途便携运输.