目的 研究艾滋病(AIDS)患者血清微小RNA(miR)-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p的检测意义.方法 选取2020年5月至2023年5月鹤壁市传染病医院收治的100例AIDS患者作为研究对象,设为AIDS组.另选取同期健康志愿者100例设为参考组.比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p水平.根据AIDS患者预后将AIDS组分为预后不良组、预后良好组,比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p、miR-296-5p水平.采用多因素Logistic回归分析AIDS患者预后不良的影响因素.结果 AIDS组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于参考组,miR-296-5p水平低于参考组,差异具有统计学意义(P＜0.05).预后不良组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于预后良好组,miR-296-5p水平低于预后良好组,差异具有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,miR-210-5p、miR-23a-3p水平升高及miR-296-5p水平降低均是AIDS患者预后不良的危险因素(P＜0.05).结论 AIDS患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平异常升高,miR-296-5p水平异常降低,其均对AIDS患者的预后具有一定的评估作用.

目的:探讨环状RNA（circular RNA，circRNA）BICD2（circ-BICD2）对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）谷氨酰胺代谢、细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响和可能机制。方法:纳入2016年1月至2018年1月就诊于郑州大学第一附属医院口腔科，手术切除的35例OSCC患者的肿瘤组织及其癌旁正常组织样本。通过实时定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测OSCC组织与癌旁组织、OSCC细胞（CAL27、SCC9、SCC15）与正常上皮细胞HIOEC细胞中circ-BICD2、miR-296-5p和转录球蛋白2（transgelin2，TAGLN2）的表达水平。生物信息学方法、双荧光素酶报告实验、RNA结合免疫沉淀反应（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）实验检测circ-BICD2与miR-296-5p、miR-296-5p与TAGLN2的靶向关系。在CAL27和SCC9细胞中分别转染circ-BICD2小干扰RNAsi-circ-BICD2#1（敲低1组）、si-circ-BICD2#2（敲低2组）及阴性对照si-NC（siRNA空白组）；在敲低1组细胞中分别转染miR-296-5p抑制物anti-miR-296-5p（抑制物组）及其阴性对照anti-miR-NC（抑制物对照组）。在CAL27和SCC9细胞中转染miR-296-5p模拟物（miR过表达组）及其阴性对照miR-NC（miR空白组）。在miR过表达组细胞中转染TAGLN2（共转染组）及空白质粒pcDNA（共转染对照组）。运用细胞计数试剂盒（cell counting kit 8，CCK-8）、集落形成实验、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell实验等检测OSCC生物学行为。同时检测谷氨酰胺（glutamine，gln）消耗量、α-酮戊二酸（α-ketoglutarate，α-KG）产生量和ATP浓度观察其对细胞代谢的影响。蛋白质印迹法检测各组CAL27和SCC9细胞中的细胞周期素D1（cyclinD1）和谷氨酰胺水解酶（glutamine hydrolase，GLS1）蛋白表达量。取4周龄清洁级BALB/c雌性裸鼠12只，于腋下皮肤分别注射转染sh-circ-BICD2（敲低组）和sh-NC（对照组）后的SCC9细胞单细胞悬液，建立移植瘤模型，每组6只。注射32 d时断颈处死裸鼠并切除肿瘤，检测肿瘤质量及两组的circ-BICD2、miR-296-5p及TAGLN2的表达水平。结果:OSCC组织中circ-BICD2、TAGLN2表达量（分别为2.54±0.71和1.86±0.15）显著高于正常组织（分别为1.00±0.35和1.00±0.11），miR-296-5p表达量（0.56±0.23）显著低于正常组织（1.00±0.32）（ P<0.05）。敲低1组CAL27和SCC9细胞活力、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数、S期细胞比例、gln消耗量、α-KG产生量、ATP浓度、cyclinD1和GLS1蛋白表达均显著低于siRNA空白组，细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著高于siRNA空白组（ P<0.05）。与抑制物对照组相比，抑制物组CAL27和SCC9细胞miR-296-5p表达显著降低，细胞活力、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数、S期细胞比例、gln消耗量、α-KG产生量、ATP浓度、cyclinD1和GLS1蛋白表达均显著升高，细胞凋亡率、G0-G1期细胞比例显著降低（ P<0.05）。与miR空白组相比，miR过表达组CAL27和SCC9细胞TAGLN2 mRNA、蛋白表达量均显著降低。与共转染对照组比较，共转染组CAL27和SCC9细胞TAGLN2 mRNA、蛋白表达量均显著升高（ P<0.05）。动物实验结果显示，与对照组相比，敲低组裸鼠的肿瘤体积、质量、circ-BICD2及TAGLN2的表达水平均显著降低，miR-296-5p表达水平显著升高（ P<0.05）。 结论:OSCC组织和细胞中circ-BICD2均为高表达，干扰circ-BICD2可抑制OSCC细胞增殖、迁移侵袭、谷氨酰胺代谢以及肿瘤生长，促进细胞凋亡，其机制与调控miR-296-5p/TAGLN2分子轴有关。

Background::The pathogenesis of osteosarcoma (OS) is still unclear, and it is still necessary to find new targets and drugs for anti-OS. This study aimed to investigate the role and mechanism of the anti-OS effects of miR-296-5p.Methods::We measured the expression of miR-296-5p in human OS cell lines and tissues. The effect of miR-296-5p and its target gene staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1 on proliferation, migration, and invasion of human OS lines was examined. The Student’s t test was used for statistical analysis. Results::We found that microRNA (miR)-296-5p was significantly downregulated in OS cell lines and tissues (control vs. OS, 1.802 ± 0.313 vs. 0.618 ± 0.235, t= 6.402, P < 0.01). Overexpression of miR-296-5p suppressed proliferation, migration, and invasion of OA cells. SND1 was identified as a target of miR-296-5p by bioinformatic analysis and dual-luciferase reporter assay. Overexpression of SND1 abrogated the effects induced by miR-296-5p upregulation (miRNA-296-5p vs. miRNA-296-5p + SND1, 0.294 ± 0.159 vs. 2.300 ± 0.277, t= 12.68, P = 0.003). Conclusion::Our study indicates that miR-296-5p may function as a tumor suppressor by targeting SND1 in OS.

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages, TAMs）外泌体中lnc-SLC2A12-10:1对乳腺癌（breast cancer，BC）细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法:GEO芯片分析BC中差异表达的lnc-SLC2A12-10:1，qRT-PCR测定lnc-SLC2A12-10:1、miR-296-5p在组织和细胞中的表达。分离TAMs及外泌体。干预外泌体中lnc-SLC2A12-10:1及细胞中的miR-296-5p的表达后借助MTT、Transwell试验检测细胞增殖及侵袭情况。结果:相对于癌旁组织，lnc-SLC2A12-10:1在BC组织中显著上调（ t=7.09， P<0.001）。与正常乳腺细胞比较，T47D、MDA-MB-468细胞中lnc-SLC2A12-10:1的表达均明显上调（ t=9.90， P<0.001）（ t=12.18， P<0.001）。lnc-SLC2A12-10:1能作为miR-296-5p的ceRNA。敲减lnc-SLC2A12-10:1能够抑制BC细胞增殖、侵袭，miR-296-5p-inhibitor能促进BC细胞增殖、侵袭，但该作用能被si-lnc-SLC2A12-10:1-Exo部分挽救（均 P<0.05）。 结论:TAMs外泌体中携带的lnc-SLC2A12-10:1能促进BC细胞增殖、侵袭，从而推进BC的进展。

目的:探讨miRNA-296-5p（miR-296-5p）对缺氧诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其相关机制。方法:选择人胰腺癌细胞株PANC-1；收集上海市奉贤区中心医院和蚌埠医学院附属第一医院2010年1月至2014年12月55例胰腺癌患者手术切除的胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织。采用免疫组织化学及原位杂交法检测胰腺癌及癌旁正常胰腺组织芯片中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、miR-296-5p的表达水平，分析二者的相关性及其与患者临床病理特征的关系。PANC-1细胞分为缺氧组和常氧组，采用Transwell法测定两组细胞迁移与侵袭能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-296-5p及HIF-1α mRNA表达。转染小干扰RNA（siRNA）干扰HIF-1α的表达，将细胞分为PANC-1组（空白对照）、PANC-1-NC组（阴性对照）、PANC-1-siRNA组，检测miR-296-5p的表达；同时转染miR-296-5p激动剂和抑制剂，分为Agomir-miR-296-5p组（激动剂组）、Agomir-miR-296-5p-NC组（激动剂阴性对照组）、Antagomir-miR-296-5p组（抑制剂组）、Antagomir-miR-296-5p-NC组（抑制剂阴性对照组）；Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力。采用荧光素酶报告基因系统验证miR-296-5p启动子区是否存在HIF-1α的结合位点。结果:胰腺癌组织HIF-1α高表达率高于癌旁正常胰腺组织[81.8%（45/55）比0（0/10）， P<0.01]；胰腺癌组织miR-296-5p高表达率低于癌旁正常胰腺组织[12.7%（7/55）比90.0%（9/10）， χ2=27.23， P<0.01]。HIF-1α表达和miR-296-5p表达呈负相关（ r=-0.53， P<0.01）；miR-296-5p低表达与肿瘤长径、TNM分期、淋巴结转移均有关（均 P<0.05）。常氧组PANC-1侵袭细胞数为（15.3±2.1）个，缺氧组为（24.7±1.5）个，差异有统计学意义（ t=0.26， P=0.003）；常氧组PANC-1迁移细胞数为（20.7±3.8）个，缺氧组为（32.7±1.2）个，差异有统计学意义（ t=5.25， P=0.006）。常氧组PANC-1细胞HIF-1α mRNA相对表达量为0.30±0.02，缺氧组为1.00±0.01，差异有统计学意义（ t=56.45， P<0.01）；常氧组PANC-1细胞miR-296-5p相对表达量为3.05±0.20，缺氧组为1.14±0.04，差异有统计学意义（ t=16.05， P<0.01）。PANC-1组、PANC-1-NC组、PANC-1-siRNA组侵袭细胞数分别为（24.7±1.5）个、（25.7±1.5）个、（12.0±1.7）个，差异有统计学意义（ F=68.13， P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞侵袭能力下降（ t=9.50， P=0.001）；迁移细胞数分别为（32.7±1.2）个、（37.0±1.0）个、（17.3±1.2）个，差异有统计学意义（ F=262.09， P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞迁移能力下降（ t=16.26， P<0.01）。Antagomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力增强（均 P<0.05）；Agomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力减弱（均 P<0.05）。荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性结果显示，miR-296-5p存在与HIF-1α结合的靶点。 结论:HIF-1α通过负向调控miR-296-5p在缺氧诱导的胰腺癌细胞的侵袭、迁移中发挥重要作用。

目的:探究微小RNA-296-5p(miR-296-5p)对脑梗死(CI)后神经功能损伤的影响及其与血管紧张素转换酶2(ACE2)信号通路介导的内皮祖细胞(EPC)活力的调节关系.方法:选取本院70例确诊为CI且伴有神经功能损伤的患者血清标本(CI组)和70例健康志愿者的血清标本(健康组),RT-qPCR法检测两组血清miR-296-5p、ACE2和Mas mRNA的表达.构建大鼠CI模型,将SD大鼠随机分为健康对照组、模型对照组、sh-miR-296-5p组和ACE2过表达组(OE-ACE2组).对各组大鼠进行神经功能损伤严重程度评分(NSS).TTC染色法观察各组大鼠CI情况.RT-qPCR法检测大鼠血清miR-296-5p、ACE2和Mas的mRNA表达.分离并常规培养EPC,将EPC随机分为对照组(control组)和sh-miR-296-5p组、OE-ACE2组、OE-miR-296-5p+OE-ACE2组和sh-miR-296-5p+sh-ACE2组.CCK-8法测定EPC活力情况.流式细胞术检测EPC凋亡情况.RT-qPCR法检测EPC中miR-296-5p、ACE2和Mas mRNA的表达.双萤光素酶报告基因实验验证miR-296-5p和ACE2的关系.结果:(1)临床试验:与健康组相比,CI患者血清miR-296-5p水平显著上升(P<0.05),ACE2和Mas的 mRNA表达水平显著降低(P<0.05).(2)动物实验:与健康对照组相比,模型对照组大鼠的NSS评分、CI面积、血清miR-296-5p水平和Mas mRNA表达水平显著上升(P<0.05),ACE2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05).与模型对照组相比,sh-miR-296-5p组和OE-ACE2组大鼠NSS评分、CI面积、血清miR-296-5p水平和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05),ACE2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05).(3)细胞实验:与control组相比,sh-miR-296-5p组和OE-ACE2组EPC细胞的A450和miR-296-5p水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著升高(P<0.05).与sh-miR-296-5p组相比,sh-miR-296-5p+sh-ACE2组细胞的A450和miR-296-5p水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05).与OE-ACE2组相比,OE-miR-296-5p+OE-ACE2组细胞的A450、miR-296-5p水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05).结论:敲减miR-296-5p可能通过介导ACE2信号通路,抑制EPC活力,减轻CI后神经功能损伤.

目的 探讨高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭的调控作用及其机制.方法 提取转染miR-296-5p过表达和miR-296-5p干扰及其阴性对照物(NC)后的ESCC细胞外泌体,并采用透射电镜与Western blotting法进行鉴定;将ESCC细胞分为三组,干扰组、过表达组分别加入miR-296-5p干扰或过表达细胞的外泌体培养,NC组加入NC转染细胞的外泌体培养48 h;取各组细胞,MTT法检测细胞活力、Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,RT-PCR、Western blotting法检测细胞黏附分子3(CADM3)、CADM1、CADM4、钙黏蛋白E(E-cadherin)及血管内皮细胞生成浸润相关蛋白CD31、CD44.结果 细胞活力、迁移和侵袭细胞数过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05).细胞中CADM1、CADM4、E-cadherin基因及蛋白表达水平干扰组>NC组>过表达组,CADM3、CD31、CD44基因及蛋白表达水平过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05).结论 高表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体可能通过调控CADM、E-cadherin、CD31、CD44等基因表达提高ESCC细胞的侵袭、迁移能力.

目的 探讨白术内酯Ⅲ(A Ⅲ)通过微小RNA-296-5p(miR-296-5p)对自发性高血压大鼠(SHR)脑卒中的作用及可能机制.方法 使SHR连续2个月自由饮用0.9％氯化钠溶液,然后给予1％氯化钠溶液喂养,构建SHR脑卒中模型.将模型大鼠分为模型组(Model组)、A Ⅲ低剂量组(A Ⅲ-L组)、A Ⅲ高剂量组(A Ⅲ-H组)、阳性药物尼莫地平组(Nim组)、miR-296-5p 激动剂组(miR-296-5p agomir 组)、agomir NC 组、A Ⅲ-H+miR-296-5p agomir 组、A Ⅲ-H+agomir NC 组,每组 12只.检测并记录大鼠神经症状评分、平均动脉压、存活时间、血小板黏附率变化,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠脑组织海马CA1区病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测海马CA1区中miR-296-5p表达.结果 与NC组比较,Model组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤严重,差异有统计学意义(P＜0.05);与Model组比较,A Ⅲ-L组、A Ⅲ-H组、Nim组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达降低,存活时间延长,海马CA1区病理损伤减轻,差异有统计学意义(P＜0.05);与Model组、agomir NC组比较,miR-296-5p agomir组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤加剧,差异有统计学意义(P＜0.05);与A Ⅲ-H组、A Ⅲ-H+agomir NC组比较,A Ⅲ-H+miR-296-5p agomir组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤严重,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 A Ⅲ可能通过抑制miR-296-5p表达对SHR脑卒中起到治疗作用.

目的 研究circ-E2F3通过抑制miR-296-5p影响宫颈癌进展的作用机制.方法 采用qRT-PCR检测宫颈癌组织和癌旁组织中circ-E2F3的表达量,筛选宫颈癌细胞系,通过qRT-PCR检测宫颈癌细胞系和正常宫颈黏膜上皮细胞中circ-E2F3的表达量.采用CCK-8检测细胞活力,通过检索数据库筛查circ-E2F3可能的分子机制,并通过双荧光素酶分析、qRT-PCR等方法证实其调控机制.结果 circ-E2F3在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系CaSki中表达上调.体外实验证实circ-E2F3能促进宫颈癌细胞增殖;体内实验证实circ-E2F3通过抑制miR-296-5p促进肿瘤细胞生长.结论 circ-E2F3通过抑制miR-296-5p在宫颈癌的进展中发挥重要作用,高表达的circ-E2F3可能是判断宫颈癌进展的重要指标.

目的 研究环状RNA脂肪非典型钙黏蛋白1(CircFAT1)调节miR-296-3p/微管关联蛋白RP/EB家族成员 1(MAPRE1)轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响.方法 以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测鼻咽上皮细胞NP69、人鼻咽癌细胞株CNE2 及其放射线抵抗细胞CNE2-RR中CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1 表达.将体外培养的CNE2 细胞随机分为对照组、CircFAT1 敲低组、阴性对照组、CircFAT1 敲低+miR-296-3p inhibi-tor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2 细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1 表达;以CCK-8法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)染色与流式细胞实验检测各组CNE2 细胞增殖、凋亡.将体外培养的CNE2-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircFAT1 敲低组、放射+CircFAT1 敲低+miR-296-3p inhibitor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2-RR细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1 表达;以CCK-8法、Edu染色与流式细胞实验检测各组CNE2-RR细胞增殖、凋亡.以双荧光素酶报告基因实验检测 CNE2-RR 中 CircFAT1 对 miR-296-3p 的靶向调节与 miR-296-3p 对 MAPRE1 的靶向调节.结果 与NP69 细胞相比,CNE2、CNE2-RR细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05);与CNE2 细胞相比,CNE2-RR细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05).与对照组相比,CircFAT1 敲低组CNE2 细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);阴性对照组CNE2 细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1 对CNE2 细胞各指标的影响.与对照组、放射组分别相比,放射+CircFAT1 敲低组CNE2-RR细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);放射组、放射+阴性对照组CNE2-RR细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1 对放射处理下CNE2-RR细胞各指标的影响.CircFAT1 可靶向下调CNE2-RR细胞miR-296-3p表达,而miR-296-3p可靶向下调CNE2-RR细胞MAPRE1 表达.结论 敲低CircFAT1 可通过上调miR-296-3p而降低MAPRE1 表达,从而抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡并增强其放射敏感性.