目的:构建基于γ-H2AX焦点检测的时间-剂量-效应三维剂量估算模型，并对其可行性进行验证。方法:按随机数表法将小鼠分为0 、2 、4、6、8 Gy组，每组3只，进行X射线全身照射。照后1、6、24 h取胡须毛囊细胞。免疫荧光染色后，利用激光共聚焦显微镜观察照后1～24 h不同时间点γ-H2AX焦点数。将观察到的γ-H2AX平均焦点数经Dolphin′s模型校正后，拟合剂量-效应关系曲线。使用R软件，利用照射剂量、照后时间和校正后的γ-H2AX平均焦点数进行局部照射三维模型方程和曲面的建立。结果:γ-H2AX平均焦点数在固定时间点1、6和24 h随剂量的增加而增加，但在固定剂量点2、4、6、8 Gy随照射时间的延长而减少。拟合的局部照射剂量-效应关系曲线方程为：照后1 h， YF ＝ 2.853＋3.775 D， R2＝ 0.928；照后6 h， YF ＝ 0.144＋2.775 D， R2＝ 0.903；照后24 h， YF ＝ 0.066＋2.472 D， R2＝ 0.85。拟合的三维模型方程为 YF ＝ 6.837 t－1.728＋3.113 t－0.071D， R2 ＝ 0.897。将不同的照后时间代入三维曲面模型后呈现二维线性模型形式。将γ-H2AX焦点数和照射时间代入线性模型和三维模型表明，使用线性模型和三维模型估算受照剂量与实际照射剂量的相对偏差均不超过30%。 结论:使用γ-H2AX焦点数进行局部照射剂量估算，建立了时间-剂量-效应三维模型，此模型可初步用于照后1～24 h内所有时间点的剂量估算。

目的:探讨GNG4与卵巢癌顺铂耐药A2780/DDP细胞DNA损伤修复及化疗敏感性的关系。方法:将A2780/DDP细胞分为500 ng/ml顺铂作用组（cDDP组）、短发夹RNA（shRNA）-GNG4沉默GNG4表达组（shRNA组）、500 ng/ml顺铂和shRNA-GNG4干预组（shRNA+cDDP组）、未经顺铂和shRNA-GNG4干预组（空白对照组）。采用蛋白质印迹法检测各组细胞GNG4和γH2AX蛋白的表达，单细胞凝胶电泳法检测各组细胞DNA损伤情况，免疫荧光法检测γH2AX基因在损伤位点的焦点形成情况，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果:与其他3组相比，shRNA+cDDP组GNG4蛋白表达水平最低，γH2AX蛋白表达水平最高，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。单细胞凝胶电泳法检测显示，空白对照组、cDDP组、shRNA组、shRNA+cDDP组细胞彗星尾DNA百分含量分别为（7.7±2.5）%、（12.3±3.6）%、（20.1±2.1）%、（38.6±2.8）%，Olive尾距分别为5.12±1.89、8.23±2.97、14.99±3.65、22.43±3.17，shRNA+cDDP组细胞彗星尾DNA含量和Olive尾距均高于其他3组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。免疫荧光法检测显示，空白对照组、cDDP组、shRNA组、shRNA+cDDP组每个细胞中γH2AX的焦点数分别为（4.2±0.7）个、（5.1±0.5）个、（26.8±3.3）个、（71.3±6.2）个，shRNA+cDDP组均高于其他3组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。空白对照组、cDDP组、shRNA组、shRNA+cDDP组克隆形成率分别为（78.27±5.01）%、（45.67±3.29）%、（26.20±5.76）%、（1.56±0.21）%，shRNA+cDDP组均低于其他3组，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。 结论:下调GNG4的表达可增加卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其可能是通过抑制顺铂诱导的DNA损伤修复功能实现的。

目的:研究聚乙烯吡咯烷酮(PVP)修饰的碳化钽(Ta 4C 3)纳米片对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞放射敏感性的影响。 方法:合成并表征Ta 4C 3-PVP纳米片。利用荧光显微镜观察MDA-MB-231细胞对异硫氰酸荧光素(FITC)标记Ta 4C 3-PVP纳米片的摄取情况。CCK-8法检测不同浓度的Ta 4C 3-PVP纳米片对MDA-MB-231细胞的毒性。将MDA-MB-231细胞分为空白对照组、Ta 4C 3-PVP组、单纯照射组和Ta 4C 3-PVP＋照射组，克隆形成试验检测细胞放射敏感性的改变，酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)水平和脂质氧化产物丙二醛(MDA)含量，免疫荧光法检测DNA双链断裂(DSBs)分子标志物γH2AX焦点形成及有丝分裂灾难形成。 结果:成功合成Ta 4C 3-PVP纳米片，呈薄片形貌，水动力直径和厚度分别约为143.93和1.35 nm。FITC标记的Ta 4C 3-PVP被MDA-MB-231细胞摄取后主要分布于细胞质中。Ta 4C 3-PVP纳米片在浓度高达400 μg/ml时，对MDA-MB-231细胞无明显毒性。克隆形成试验结果显示，50和100 μg/ml Ta 4C 3-PVP预处理使受照MDA-MB-231细胞的存活曲线分别较单纯照射组下移，且呈浓度依赖性，低、高浓度Ta 4C 3-PVP预处理的放射增敏比(SER D0 )分别为1.21和1.45。Ta 4C 3-PVP＋照射组于照射后2和12 h细胞内ROS水平均明显高于单纯照射组( q＝20.01、7.193， P< 0.05)，于照射后1、4和8 h Ta 4C 3-PVP＋照射组含≥5个γH2AX焦点的阳性细胞率均明显高于单纯照射组( q＝36.78、14.87、8.217， P< 0.05)，Ta 4C 3-PVP＋照射组于照射后24和48 h的MDA含量均明显高于单纯照射组( q＝14.02、7.015， P< 0.05)，Ta 4C 3-PVP＋照射组于照射后72 h的有丝分裂灾难比例明显高于单纯照射组( q＝16.33， P< 0.05)。 结论:Ta 4C 3-PVP纳米片通过提高辐射诱导的ROS水平增强人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的放射敏感性。

目的:下调食管癌ECA-109细胞的血管内皮生长因子A(VEGFA)表达，观察其辐射敏感性的改变并初步探讨其发生机制。方法:将食管癌ECA-109细胞分成VEGFA转染组、空载组、X射线组和VEGFA转染组联合X射线组。运用qPCR法检测VEGFA基因的表达；Western blot法检测VEGFA蛋白的表达；细胞增殖实验(CCK8法)测定细胞的增殖变化；克隆形成法分析不同照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)细胞的辐射敏感性；流式细胞术分析细胞凋亡变化；免疫荧光法检测γ-H2AX焦点的数量。结果:ECA-109细胞VEGFA转染组与空载组比较，VEGFA基因表达明显减少( t＝11.98， P<0.05)、VEGFA蛋白表达显著下调( t＝12.38， P<0.05)；ECA-109转染组细胞相较于空载组细胞，其增殖( A450值)明显受到抑制( t＝2.78、7.25、21.93、13.21， P<0.05)；与空载组比较，VEGFA转染组ECA-109细胞的 D0、 Dq、 SF2值下降( t＝5.83、8.56、7.68， P<0.05)，放射增敏比 SERD0、 SERDq分别为1.41、2.09，凋亡比例明显增加、且联合X射线后ECA-109细胞的凋亡比例进一步增加( t＝17.63、22.48、33.87， P<0.05)；ECA-109细胞VEGFA转染组和空载组在X射线照射后2 h内细胞核形成的γ-H2AX焦点数量均明显增加，24 h后空载组细胞核的γ-H2AX焦点数量恢复照射前水平，而转染组中的γ-H2AX焦点数量仍高于照射前水平( t＝7.00， P<0.05)。 结论:下调VEGFA能抑制食管癌细胞的增殖，减少细胞集落形成并促进其凋亡，增加食管癌ECA-109细胞的辐射敏感性，其机制与DNA损伤修复密切相关。

目的:研究Ta 4C 3-PVP纳米片对三阴性乳腺癌4T1细胞小鼠移植瘤的放射增敏作用。 方法:于雌性BALB/c小鼠右侧腹皮下注射4T1细胞建立4T1荷瘤小鼠模型，按肿瘤体积大小均匀分为空白对照组、单纯Ta 4C 3-PVP组、单纯照射组、Ta 4C 3-PVP联合照射组。尾静脉注射20 mg/kg Ta 4C 3-PVP预处理24 h后给予8 Gy单次肿瘤局部X射线照射，测量移植瘤体积、瘤重，检测肿瘤细胞增殖标志物Ki-67蛋白表达、DNA双链断裂(DSBs)分子标志物γ-H2AX焦点形成，绘制肿瘤生长曲线并计算放射增敏系数(EF)及抑瘤率。 结果:与空白对照组相比，单纯照射组、Ta 4C 3-PVP联合照射组于照射后16 d均能明显抑制肿瘤生长( t＝5.41、9.59， P < 0.05)、降低瘤重( t＝2.67、4.40， P < 0.05)，其中Ta 4C 3-PVP联合照射组的EF达1.57，抑瘤率约为64%，明显优于单纯照射组(42%)。免疫组织化学结果显示，与空白对照组相比，单纯照射组和Ta 4C 3-PVP联合照射组肿瘤细胞Ki-67蛋白表达受到明显抑制( t＝5.73、8.02， P < 0.05)、γ-H2AX焦点产额明显增加( t＝2.97、9.86， P < 0.05)，且Ta 4C 3-PVP联合照射组较单纯照射组Ki-67表达抑制更显著( t＝4.75， P < 0.05)、γ-H2AX焦点产额更多( t＝4.42， P < 0.05)。 结论:Ta 4C 3-PVP纳米片可通过增加射线诱导的DNA DSBs，增强4T1荷瘤小鼠移植瘤的放射敏感性。

目的:探讨泛素结合酶2T（UBE2T）对肺腺癌放射敏感性的影响及其可能的机制。方法:收集2019年3月至2021年12月在遵义医科大学第二附属医院经病理证实，且经单纯放射治疗的各期肺腺癌患者45例，按实体肿瘤疗效评价（RECIST）1.1标准进行疗效评价，分为放疗敏感组（25例）、放疗抵抗组（20例），前者为完全缓解+部分缓解，后者为疾病稳定+疾病进展。免疫组化（IHC）检测通过染色强度和阳性细胞数计分，结合卡方检验分析患者石蜡标本UBE2T表达水平与放射敏感性间的相关性。利用人肺腺癌细胞，构建慢病毒UBE2T干扰（UBE2Tsh）的A549细胞和UBE2T过表达的SPC-A-1细胞，行放射及克隆形成实验检测细胞的存活分数，多靶单击模型拟合生存曲线。免疫荧光技术检测DNA双链损伤（DSB）标记物γH2AX聚焦点水平（γH2AX聚焦点数/单个细胞）。蛋白质印迹法检测UBE2T、γH2AX、Rad51蛋白表达。流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率。二分类变量资料统计采用Fisher's精确概率法，计量资料采用 t检验。 结果:UBE2T高表达同肺腺癌患者放疗抵抗相关（ P<0.05）。慢病毒UBE2T干扰提高A549细胞的放射敏感性，放射增敏比（SER）为1.795，UBE2T过表达降低SPC-A-1细胞的放射敏感性，SER为0.293。UBE2Tsh A549细胞照射后细胞核内γH2AX聚焦点数显著增加（ P<0.01），γH2AX蛋白表达量增加（ P<0.01），Rad51蛋白表达量降低（ P<0.001），UBE2T过表达SPC-A-1细胞γH2AX蛋白表达量降低（ P<0.05），Rad51蛋白表达量增加（ P<0.001）。UBE2Tsh A549细胞照射后G 2期细胞占比减少（ P<0.01），细胞凋亡增加（ P<0.001）。 结论:UBE2T可能通过增强肺腺癌细胞放疗所致DNA双链损伤修复，诱导细胞周期G 2期阻滞，减少细胞凋亡介导放疗抵抗。

目的:评估聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制剂尼拉帕利对食管鳞癌细胞辐射敏感性的影响并初步探讨其机制。方法:将人食管鳞癌ECA-109、KYSE-150细胞株分为对照组、尼拉帕利组、单纯照射组、联合组（尼拉帕利+照射）。CCK-8法测定细胞增殖水平的变化；克隆形成实验检测细胞存活率的变化；流式细胞术分析细胞周期及凋亡的变化；免疫荧光法检测细胞内γH2AX聚焦点的数量，蛋白质印迹法测定细胞中PARP-1、剪切体cleaved PARP、RAD51、丝裂原活化蛋白激酶MAPK［细胞外信号调节激酶1和2（ERK1/2）］、p-MAPK（ERK1/2）蛋白的表达。所有数据以 xˉ±s表示，两组间经正态性检验符合正态分布的数据采用独立样本 t检验，多组样本之间采用单因素方差分析。 结果:在人食管鳞癌ECA-109、KYSE-150细胞株中，尼拉帕利+照射可显著抑制食管鳞癌细胞增殖，与单纯照射组相比，联合组细胞的平均致死剂量（D 0）、准阈剂量（D q）、2 Gy照射后细胞存活率（SF 2）均下降。单纯照射对食管鳞癌ECA-109、KYSE-150细胞的凋亡作用有限，与单纯照射组相比，尼拉帕利+照射可进一步增加食管癌细胞的凋亡率（ P=0.015、 P=0.006）。在ECA-109细胞中，与单纯照射组相比，联合组细胞G 2/M期阻滞显著增加（ P<0.001）。在食管癌ECA-109细胞株中，与对照组相比，联合组在2 h后可显著诱导γH2AX聚焦点的形成，并延缓其修复（ P<0.001），且联合组增强了照射诱导的PARP-1的裂解，降低了Rad51及p-MAPK（ERK1/2）的表达。 结论:尼拉帕利能增加食管癌细胞的辐射敏感性。其机制是通过抑制食管癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制辐射诱导的DNA损伤修复和调控MAPK-ERK信号通路来增加食管癌细胞的辐射敏感性。

目的:观察聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂尼拉帕利及帕米帕利对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞放射敏感性的影响，并对其机制进行探讨。方法:将乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞分为空白对照组、尼拉帕利组、帕米帕利组、单纯照射组、尼拉帕利联合照射组、帕米帕利联合照射组。CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响，克隆形成实验检测药物对细胞放射敏感性的影响，流式细胞术分析药物联合照射对细胞周期和凋亡的影响，免疫荧光法检测细胞内γ-H2AX焦点数量的变化，qPCR法及Western blot实验检测细胞中FANCG、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结果:尼拉帕利及帕米帕利均能抑制乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞的增殖，呈时间-剂量依赖性。随着照射剂量的增加，两种细胞的放射生物学参数 D0、 Dq、 SF2逐渐减小，而放射增敏比SER D0、SER Dq逐渐增大。尼拉帕利联合照射组及帕米帕利联合照射组与空白对照组相比，G 2/M期比例增加( tMCF-7＝41.66、44.08， P<0.05； t436＝24.69、18.91， P<0.05); G 0/G 1期比例减少( tMCF-7＝8.67、29.61， P<0.05； t436＝26.39、29.12， P<0.05)；细胞凋亡率显著增加( tMCF-7＝11.17、11.71， P<0.05； t436＝42.68、15.89， P<0.05)。与空白对照组相比，MCF-7细胞的单纯照射组、尼拉帕利联合照射组在射线照射后2 h，细胞核内γ-H2AX焦点数量显著增加( t＝8.89、21.72， P<0.05)；照射后24 h单纯照射组细胞核内γ-H2AX焦点数量基本恢复照射前水平，而尼拉帕利联合照射组细胞核内γ-H2AX焦点数量仍大量存在( t ＝8.82， P<0.05)。尼拉帕利联合照射组与空白对照组比较，MCF-7细胞的FANCG、Bcl-2 mRNA表达明显减少( tFANCG＝14.07， P<0.05； tBcl-2＝29.21， P<0.05)；Bax mRNA表达明显增多( t＝8.90， P<0.05)；与空白对照组相比，尼拉帕利联合照射组MCF-7细胞的FANCG、Bcl-2蛋白水平显著下降( tFANCG＝7.09， P<0.05； tBcl-2＝10.24， P<0.05)；Bax蛋白水平显著升高( t＝2.90， P<0.05)。 结论:PARP抑制剂尼拉帕利及帕米帕利能增加乳腺癌MCF-7及MDA-MB-436细胞的放射敏感性，其机制可能与下调FA-BRCA通路中FANCG的表达，调节凋亡相关基因，抑制DNA损伤修复有关。

目的:探讨低糖联合棕榈酸的代谢环境对人结直肠癌细胞SW480的抑制作用及其促进放射增敏的机制研究。方法:在低糖、棕榈酸、低糖联合棕榈酸的处理下CCK-8筛选明显抑制SW480细胞增殖的处理条件。通过流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位及凋亡变化；免疫荧光γ-H 2AX染色及克隆形成实验检测放射敏感性变化；蛋白印迹法检测蛋白质水平变化。 结果:与对照组相比，低糖联合120μmol/L棕榈酸处理显著抑制SW480细胞增殖( P<0.01)；CPT1a、PFKFB3、PKM表达增加，NDUFV1、NDUFV2、NDUFS1表达减少；ROS水平增加( P<0.01)；ATP水平降低( P<0.01)。射线处理后低糖联合120μmol/L棕榈酸处理组γ-H 2AX焦点数量增多( P<0.05)；D 0值降低( P<0.01)；ROS水平增加( P<0.001)；细胞凋亡增加( P<0.001)；γ-H 2AX蛋白表达增加( P<0.01)。NAC预处理能够逆转ROS、凋亡和γ-H 2AX蛋白表达的变化。 结论:低糖联合棕榈酸诱导SW480细胞代谢应激，抑制肿瘤增殖，在联合射线照射时通过诱导ROS产生和DNA损伤促进SW480细胞放射增敏。

目的:探讨Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及相关机制。方法:蛋白免疫印迹法检测肺癌细胞系中Myosin X表达量以获取实验对象。运用CRISPR/Cas9技术建立敲除Myosin X的H1975细胞系(KO组)和感染对照病毒的H1975细胞系(NC组)，并进行敲除效率验证。克隆形成实验及多靶单击模型检测两组细胞对射线敏感性差异。γ-H 2AX焦点形成实验及RNAseq差异分析技术寻找可能参与Myonsin X介导的肺癌细胞系放射敏感性调节机制。 结果:Myosin X在H1975细胞中表达量明显高于其他细胞系( P<0.01)。经鉴定成功构建了Myosin X sgRNA-Lenti-CRISPR v2慢病毒载体，嘌呤霉素筛选后得到Myosin X完全敲除的H1975(KO组)及对照组(NC组)细胞系。克隆形成实验证明相较于NC组，KO组对射线的敏感性更强(D 0值从1.28 Gy下降至1.03 Gy，SF 2从0.29下降至0.21，放射敏感性比为1.24)。γ-H 2AX焦点形成实验显示照后1、6 h KO组形成的损伤焦点数均多于NC组( P<0.05)，RNAseq差异分析技术结果显示KO组ISLR蛋白表达明显低于NC组( P<0.05)。 结论:敲除Myosin X可以增强肺癌H1975细胞的放射敏感性，其机制可能与干扰DNA双链损伤修复以及降低ISLR表达有关。