目的:探讨妊娠合并系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者中长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long noncoding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1，lncRNA NEAT1)介导的表观修饰调控辅助性T细胞2(Th2)分化发育的作用及其机制。方法:选取2014年7月1日—2019年7月1日在河南省人民医院生产的正常单胎妊娠患者11例及妊娠合并SLE患者15例，收集外周血单个核细胞，qPCR检测NEAT1 mRNA表达水平。ELISA和流式细胞术检测IFN-γ和IL-4蛋白质表达水平。流式细胞术分选初始CD4 ＋T细胞，RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation，RIP)技术检测组蛋白甲基转移酶(EZH2)与NEAT1结合情况。干扰NEAT1表达后，实时定量聚合酶链反应技术(real time quantity polymerase chain reaction，RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测泛素E3连接酶(ITCH)的mRNA和蛋白质表达水平。运用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation，ChIP)技术检测妊娠合并SLE患者EZH2在ITCH启动子区的募集。过表达NEAT1和ITCH，ELISA检测IL-4蛋白质水平。采用 t检验进行数据统计学分析。 结果:妊娠合并SLE患者外周血NEAT1 mRNA水平显著高于正常妊娠对照组。妊娠合并SLE患者IFN-γ水平显著降低，IL-4水平显著上调。妊娠合并SLE患者初始CD4 ＋ T细胞中，NEAT1与EZH2结合显著高于对照组。干扰NEAT1表达以后，ITCH的mRNA和蛋白质水平显著升高。ChIP分析发现，妊娠合并SLE患者中，EZH2在ITCH启动子区的募集也显著上调；ITCH能够显著抑制初始CD4 ＋T细胞中IL-4的产生，而过表达NEAT1则能够上调IL-4的蛋白质水平。 结论:妊娠合并SLE患者NEAT1水平显著升高，NEAT1招募EZH2到ITCH启动子区，促进初始CD4 ＋T细胞发育分化为Th2细胞，导致Th1/Th2失衡，从而影响妊娠合并SLE的疾病进程。

目的:探讨膀胱癌组织中Dickkopf相关蛋白3（DKK3）、泛素结合酶E2T（UBE2T）表达与患者临床病理特征、预后的关系。方法:选取2019年2月至2021年3月73例于华润武钢总医院确诊的膀胱癌患者，以膀胱癌组织为研究组，以癌旁组织为对照组，Spearman等级相关分析膀胱癌组织中DKK3、UBE2T相关关系，影响膀胱癌患者预后的因素采用Cox回归分析， Kaplan- Meier分析DKK3、UBE2T与膀胱癌患者预后的关系。 结果:膀胱癌组织中DKK3阴性表达率、UBE2T阳性表达率高于癌旁组织（73.97%比50.68%、69.86%比21.92%， χ2＝8.430、33.790， P<0.05）。膀胱癌组织中DKK3与UBE2T为负相关，相关性系数 r＝－0.631、 P<0.01。肿瘤直径>2 cm（66.67%、66.67%）、TNM分期T2～T4（70.37%、68.63%）、淋巴结转移（68.52%、74.51%）的膀胱癌患者DKK3阴性、UBE2T阳性的表达比例高于肿瘤直径≤2 cm（33.33%、33.33%）、TNM分期Ta～T1（29.63%、31.37%）、未淋巴结转移（31.48%、25.49%）的患者（ χ2＝5.777、4.932、11.848， P<0.05）。多因素分析结果显示肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、UBE2T是膀胱癌患者预后危险因素[风险比（ HR）＝3.750、1.972、1.166、4.679， P<0.05]，DKK3（ HR＝0.857）是膀胱癌患者预后保护因素（ P<0.05）。DKK3阴性表达患者54例存活31例，DKK3阳性表达患者19例存活17例，DKK3阴性表达患者生存率高于DKK3阴性患者（89.47%比57.41%， χ2＝5.073， P<0.05），UBE2T阳性表达患者51例存活29例，UBE2T阴性表达患者22例存活19例，UBE2T阴性表达患者生存率高于UBE2T阳性患者（86.36%比56.86%， χ2＝4.702， P<0.05）。 结论:膀胱癌组织中DKK3、UBE2T表达与患者临床病理特征严重程度相关，与膀胱癌患者预后密切相关。

目的:探讨大鼠脊髓损伤后线粒体自噬和凋亡相关蛋白的表达变化及其发生机制。方法:将96只健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（48只）和脊髓损伤组（48只），每组分为1、3、7、14、21、28 d共6个时间点，各时间点8只。假手术组将T 8~9棘突及椎板切除但不损伤脊髓，脊髓损伤组采用Allen法建立脊髓损伤模型。采用BBB评分评估两组伤后各时间点运动功能；HE染色观察两组伤后各时间点脊髓组织病理学改变；免疫荧光观察两组伤后各时间点电压依赖性阴离子通道蛋白1（VDAC1）分别与微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ、E3泛素连接酶（Parkin）、多泛素结合蛋白（p62）共定位阳性细胞情况；Western blot法检测两组各时间点线粒体LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、细胞质Parkin、线粒体Parkin、细胞质p62、线粒体p62、细胞质细胞凋亡蛋白（Bax）、线粒体Bax、细胞质细胞色素C（Cyt C）、线粒体Cyt C的表达情况。 结果:（1）假手术组伤后各时间点BBB评分均为（21.00±0.00）分，脊髓损伤组伤后1、3、7、14、21、28 d BBB评分分别为（0.94±0.50）分、（1.69±0.70）分、（4.13±0.99）分、（11.81±1.03）分、（15.06±1.12）分、（18.38±0.83）分（ P<0.01）。（2）与假手术组比较，脊髓损伤组伤后1、3 d脊髓组织结构明显破坏，可见大量出血灶，炎性细胞浸润，神经元肿胀，空洞形成；伤后7、14 d出血灶较前明显减少，神经元胞体肿胀，炎性细胞浸润，存在大量空洞；伤后21、28 d可见大量细胞参与修复，细胞排列紊乱。（3）与假手术组比较，脊髓损伤组伤后1、3 d VDAC1分别与LC3Ⅱ、Parkin、p62共定位阳性细胞数明显增多，此后共定位阳性细胞数逐渐减少。（4）假手术组和脊髓损伤组伤后1、3、7、14、21、28 d线粒体LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达量分别为0.56±0.05和1.00±0.05、1.19±0.11、0.86±0.05、0.80±0.08、0.66±0.13、0.51±0.11，细胞质Parkin表达量分别为0.80±0.13和0.47±0.08、0.29±0.06、0.57±0.07、0.70±0.05、0.97±0.09、0.88±0.12，线粒体Parkin表达量分别为0.67±0.09和1.07±0.18、1.27±0.15、0.82±0.12、0.59±0.09、0.53±0.13、0.57±0.14，细胞质p62表达量分别为1.25±0.08和1.04±0.04、0.94±0.05、1.09±0.05、1.19±0.06、1.20±0.04、1.27±0.05，线粒体p62表达量分别为0.61±0.06和0.88±0.07、1.09±0.09、0.98±0.07、0.70±0.08、0.68±0.08、0.60±0.09，细胞质Bax表达量分别为0.92±0.08和0.67±0.07、0.36±0.08、0.48±0.08、0.69±0.06、0.88±0.11、0.94±0.08，线粒体Bax表达量分别为0.57±0.04和0.74±0.04、0.91±0.05、0.76±0.05、0.63±0.08、0.61±0.05、0.57±0.05，细胞质Cyt C表达量分别为0.28±0.05和0.81±0.07、1.12±0.08、0.64±0.07、0.67±0.13、0.60±0.11、0.37±0.06，线粒体Cyt C表达量分别为1.02±0.07和0.91±0.14、0.37±0.07、0.73±0.06、0.91±0.11、0.95±0.13、1.10±0.15。与假手术组比较，脊髓损伤组线粒体LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在伤后3 d表达最高，细胞质Parkin在伤后3 d表达最低，线粒体Parkin在伤后3 d表达最高，细胞质p62在伤后3 d表达最低，线粒体p62在伤后3 d表达最高，细胞质Bax在伤后3 d表达最低，线粒体Bax在伤后 3 d表达最高，细胞质Cyt C在伤后3 d表达最高，线粒体Cyt C在伤后3 d表达最低。 结论:大鼠脊髓损伤后线粒体自噬及凋亡均增强，其发生机制可能是由于细胞质Parkin、p62转移至受损线粒体以增强线粒体自噬，而Bax从细胞质转移至受损线粒体内，促使线粒体中大量释放Cyt C以增强细胞凋亡。

目的:探讨泛素结合酶2T（UBE2T）对肺腺癌放射敏感性的影响及其可能的机制。方法:收集2019年3月至2021年12月在遵义医科大学第二附属医院经病理证实，且经单纯放射治疗的各期肺腺癌患者45例，按实体肿瘤疗效评价（RECIST）1.1标准进行疗效评价，分为放疗敏感组（25例）、放疗抵抗组（20例），前者为完全缓解+部分缓解，后者为疾病稳定+疾病进展。免疫组化（IHC）检测通过染色强度和阳性细胞数计分，结合卡方检验分析患者石蜡标本UBE2T表达水平与放射敏感性间的相关性。利用人肺腺癌细胞，构建慢病毒UBE2T干扰（UBE2Tsh）的A549细胞和UBE2T过表达的SPC-A-1细胞，行放射及克隆形成实验检测细胞的存活分数，多靶单击模型拟合生存曲线。免疫荧光技术检测DNA双链损伤（DSB）标记物γH2AX聚焦点水平（γH2AX聚焦点数/单个细胞）。蛋白质印迹法检测UBE2T、γH2AX、Rad51蛋白表达。流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率。二分类变量资料统计采用Fisher's精确概率法，计量资料采用 t检验。 结果:UBE2T高表达同肺腺癌患者放疗抵抗相关（ P<0.05）。慢病毒UBE2T干扰提高A549细胞的放射敏感性，放射增敏比（SER）为1.795，UBE2T过表达降低SPC-A-1细胞的放射敏感性，SER为0.293。UBE2Tsh A549细胞照射后细胞核内γH2AX聚焦点数显著增加（ P<0.01），γH2AX蛋白表达量增加（ P<0.01），Rad51蛋白表达量降低（ P<0.001），UBE2T过表达SPC-A-1细胞γH2AX蛋白表达量降低（ P<0.05），Rad51蛋白表达量增加（ P<0.001）。UBE2Tsh A549细胞照射后G 2期细胞占比减少（ P<0.01），细胞凋亡增加（ P<0.001）。 结论:UBE2T可能通过增强肺腺癌细胞放疗所致DNA双链损伤修复，诱导细胞周期G 2期阻滞，减少细胞凋亡介导放疗抵抗。

多发性骨髓瘤（MM）是好发于老年患者的恶性浆细胞疾病。近10余年靶向新药（包括硼替佐米、来那度胺等）、造血干细胞移植及嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞免疫治疗的应用，使骨髓瘤患者的疗效和预后取得了革命性进步 [1]，但MM至今仍无法治愈，患者终将面临疾病复发进展，进而难治 [2]。如何为复发/难治性MM（RRMM）患者选择治疗方案仍然是临床面临的难题。泊马度胺是第三代免疫调节剂，具有多重抗骨髓瘤机制，通过与Cereblon结合激活E3泛素连接酶复合物活性，促进底物蛋白Ikaros和Aiolos泛素化和蛋白水解，抑制MM细胞增殖 [3-5]，并发挥免疫调节和抗血管生成作用，对既往硼替佐米及来那度胺等靶向药物耐药的MM患者有显著疗效。2013年泊马度胺被美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于治疗RRMM，2020年11月泊马度胺在我国获批上市。目前泊马度胺在国内应用时间较短，其治疗RRMM的疗效、安全性数据较少。因此本研究回顾性分析50例应用泊马度胺治疗的RRMM患者的疗效及安全性，旨在为RRMM患者的治疗选择提供借鉴和参考。

目的:探究剪切因子3B亚基1（subunit 1 of splicing factor 3b，SF3B1）、泛素结合酶E2变体2（ubiquitin conjugating enzyme E2 V2，UBE2V2）和组蛋白甲基转移酶（SET domain-containing protein 2，SETD2）的表达与老年骨质疏松性椎体骨折（osteoporotic vertebral fracture，OVF）的相关性。方法:收集2020年8月至2021年8月烟台市烟台山医院31例骨质疏松性椎体骨折（vertebral fracture，VF）（VF组）和16例骨质疏松非椎体骨折（non vertebral fracture，NVF）（NVF组）的老年患者（年龄>60岁）的外周血样本，提取RNA进行转录组测序筛选差异表达基因。通过基因本体论（gene ontology，GO）分析、蛋白相互作用（protein protein interaction，PPI）网络分析、ROC曲线分析筛选VF相关基因。采用qRT-PCR检测基因的表达水平。结果:相对于NVF组，VF中有822个差异表达基因，691个上调，131个下调。qRT-PCR结果显示，相对于NVF患者（1.55±0.33）（1.70±0.33）（1.64±0.33），VF患者外周血中SF3B1（1.83±0.23）（ t=2.84， P=0.008）、UBE2V2（2.24±0.43）（ t=3.91， P<0.001）的表达增强，SETD2（1.18±0.46）（ t=3.25， P=0.003）表达降低。ROC曲线分析显示，SF3B1、UBE2V2和SETD2在VF中的AUC分别为0.803 4（ P=0.007）、0.814 5（ P=0.005）和0.786 3（ P=0.001 4）。 结论:SF3B1、UBE2V2和SETD2与老年OVF高度相关，对OVF的诊断和预测具有重要价值。

目的:揭示黑素瘤中可能与泛素结合酶2S（UBE2S）存在相互作用的基因，探讨UBE2S参与调控黑素瘤细胞生物学行为的分子机制。方法:将A375黑素瘤细胞分为基因敲降组和阴性对照组，分别用含LV-UBE2S-RNAi（14011-1）的慢病毒和CON053慢病毒转染细胞构建UBE2S敲降细胞株和阴性对照细胞株。提取两组细胞株RNA，并将其纯化及片段化，与芯片探针杂交洗染获取芯片数据。采用Ingenuity路径分析软件对获得的差异表达基因的芯片数据进行进一步解析，鉴定可能与UBE2S存在相互作用的基因，应用免疫印迹法对UBE2S调控的下游分子进行验证。采用双尾 t检验筛选差异基因。 结果:在基因敲降组与阴性对照组之间共筛选出差异倍数绝对值> 2且 P < 0.05的差异基因512个，其中上调基因247个，下调基因265个。差异基因信息的Ingenuity路径分析结果证实，干扰素信号和肝X受体/视网膜X受体活化通路显著激活，真核起始因子2和核因子κB信号通路则被抑制。预测上游调控因子中IFNA2为强烈激活，核因子κB（复合物）被抑制。综合以上生物信息学分析结果，推测黑素瘤细胞UBE2S基因可通过调节IFITM1、STAT1、ISG15和TNFRSF11B基因的表达发挥功能。免疫印迹显示，A375细胞UBE2S基因敲降前后，IFITM1蛋白均未表达，敲降后ISG15蛋白表达上调19.94倍，STAT1蛋白表达上调1.47倍，TNFRSF11B蛋白表达下调79.1%。 结论:UBE2S可能通过与STAT1、ISG15和TNFRSF11B的相互作用，共同调控黑素瘤肿瘤细胞生物学行为。

目的 我们前期的研究表明,双硫仑(disulfiram,DSF)通过核蛋白定位蛋白 4同源物(nuclear protein localization protein 4 homolog,NPL4)介导的泛素-蛋白酶体通路发挥抗T细胞肿瘤[主要包括急性T淋巴白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)和T细胞淋巴瘤(T-cell lymphoma,TCL)]的作用.本研究旨在探讨双硫仑对T细胞肿瘤中泛素-蛋白酶体通路相关基因表达的调节作用,为T细胞肿瘤的精准靶向治疗提供依据.方法 应用 0.4 μM双硫仑处理T-ALL细胞株Jurkat 48 h,采用转录组测序分析显著性差异表达的基因,并采用 10例 T细胞肿瘤样本(GZFPH数据集)进行实时荧光定量 PCR验证差异基因相对表达水平.最后,从TARGET和GSE58445数据库中下载262例T-ALL和140例TCL的转录组测序数据进行生存分析.结果 0.4 μM双硫仑处理Jurkat细胞 48h后,在泛素-蛋白酶体通路中,有 86个下调和 35个上调的基因;其中,单因素Cox回归和生存曲线分析发现,仅有泛素结合酶 E2 J1(ubiquitin conjugating enzyme E2 J1,UBE2J1)基因的低表达与TARGET和GSE58445数据集中T-ALL和TCL患者的不良预后相关(P＜0.05).将UBE2J1的表达水平、年龄和性别纳入单因素和多因素Cox回归分析,结果提示UBE2J1的低表达是T-ALL和TCL患者的独立预后影响因子(P＜0.05).结论 双硫仑可调控UBE2J1基因的表达,其低表达与T细胞肿瘤患者的不良预后相关,为进一步阐明双硫仑的抗肿瘤作用及其调控的UBE2J1基因作为T细胞肿瘤的危险分层的分子标志物提供理论依据.

目的:探讨泛素结合酶 E2T(ubiquitin-binding enzyme E2T,UBE2T)在人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcino-ma,PTC)中的表达情况及其对患者预后的影响,同时探讨UBE2T在PTC细胞中的功能,旨在识别其可能的调控机制,为未来PTC的靶向治疗策略提供理论依据.方法:采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,系统分析UBE2T在PTC中的表达及其与患者预后的关系.通过Western blot技术检测UBE2T在甲状腺肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达.在PTC细胞系(TPC-1、KTC-1)中进行UBE2T敲减实验,借助CCK-8、平板克隆、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot检测相关蛋白水平的变化.结果:TCGA数据库生物信息学分析表明,PTC组织中UBE2T显著升高,且其表达与患者无疾病间隔、淋巴结转移相关(P＜0.01).UBE2T敲减导致TPC-1和KTC-1细胞增殖活力显著下降,同时抑制细胞迁移和侵袭,诱导STAT磷酸化下调.敲减UBE2T的细胞系加入STAT激活剂后,细胞增殖显著提高.结论:敲减UBE2T能抑制PTC细胞系TPC-1和KTC-1的增殖、迁移和侵袭,UBE2T通过调控JAK-STAT信号通路促进细胞增殖,提示UBE2T有可能成为PTC的治疗靶点.

目的 探讨WW结构域E3 泛素蛋白连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1,WWP1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)在射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)患者血清中的表达水平及临床意义.方法 选取华北医疗健康集团峰峰总医院 2021 年 1 月～2022 年 9 月收治的 153 例HFpEF患者为观察组,并根据患者纽约心脏病协会(New York Heart Association,NYHA)心功能分级分为心功能分级Ⅰ～Ⅱ级组(n=64)和心功能分级Ⅲ～Ⅳ级组(n=89),另选取同期体检健康的 148 例志愿者为对照组.血清WWP1,NLRP3 水平与患者心功能指标的相关性采用Pearson分析;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清WWP1 和NLRP3水平对HFpEF患者心衰严重程度的诊断价值.结果 与对照组比较,观察组血清WWP1(1.68±0.35 vs 1.04±0.19)和NLRP3(6.72±1.26 ng/ml vs 4.57±0.84 ng/ml)表达水平明显升高,差异具有统计学意义(t=19.623,17.359,均P＜0.05);与心功能分级Ⅰ～Ⅱ级组比较,心功能分级Ⅲ～Ⅳ级组血清WWP1(1.87±0.39 vs 1.42±0.32)和NLRP3(7.53±1.40 ng/ml vs 5.59±1.18 ng/ml)表达水平明显升高,差异具有统计学意义(t=7.744,9.017,均P＜0.05);心功能分级Ⅰ～Ⅱ级组与心功能分级Ⅲ～Ⅳ级组心率、左心房内径(left atrial diameter,LAD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左室舒张末期后壁厚度(left ventricular end-diastolic posterior wall thickness,LVPWT)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、二尖瓣舒张早期流速峰值(peak mitral early diastolic velocity,E)/舒张晚期流速峰值(peak late diastolic velocity,A)以及心房颤动发生率比较差异均具有统计学意义(t/χ2=2.757～7.069,均P＜0.05);HFpEF患者血清WWP1 水平与LAD,LVEDD,LVPWT呈正相关(r=0.547,0.471,0.536,均P＜0.05),与LVEF和E/A呈负相关(r=-0.485,-0.417,均P＜0.05);血清NLRP3 水平与LAD,LVEDD,LVPWT呈正相关(r=0.534,0.494,0.520,均P＜0.05),与LVEF和E/A呈负相关(r=-0.462,-0.523,均P＜0.05).ROC结果显示,血清WWP1 和NLRP3 水平单独诊断HFpEF患者心衰严重程度的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为 0.825 和 0.855,两者联合诊断的AUC(0.924)显著大于血清WWP1 和NLRP3 水平单独诊断的AUC(Z=3.600,P<0.001;Z=3.053,P=0.002).结论 血清WWP1 和NLRP3 水平在HFpEF患者中明显升高,且与患者心功能密切相关,血清WWP1和NLRP3 对HFpEF患者心衰严重程度具有一定的诊断价值.