目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)诱发小鼠胆汁淤积和肝损伤机制研究.方法 体内实验:将成年雌性ICR小鼠随机分为对照组(玉米油)、DEHP组(200 mg·kg-1·d-1),共灌胃4周,建立胆汁淤积模型.收集所有小鼠血液与肝组织,生化仪检测血清、肝脏总胆汁酸(TBA)水平,酶标仪检测ALP、GGT;HE染色观察肝组织病理变化;实时定量PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;液相色谱-三重四级杆质谱仪(LC-MS/MS)检测小鼠肝脏胆汁酸谱.体外实验:培养小鼠肝细胞AML-12,使用DEHP(250 μmol/L)以及去氧胆酸(DCA)(125 μmol/L)和鹅去氧胆酸(CDCA)(125 μmol/L)处理细胞24 h,实时定量PCR检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平.计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 体内实验显示:与对照组相比,DEHP组小鼠肝体比,血清TBA、ALP、GGT及肝脏TBA均显著升高(t值分别为-4.396、-5.109、-8.504、-3.792和-7.974,P值均<0.05).与对照组相比,肝脏胆汁酸谱中胆酸(CA)、CDCA、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、DCA及熊去氧胆酸(UDCA)均显著升高(t值分别为-2.802、-3.177、-2.633、-2.874和-2.311,P值均<0.05).DEHP组小鼠肝脏HE染色显示为汇管区扩大、胆管变形、胆管周围伴有炎性细胞浸润,且肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平均显著升高(t值分别为-2.539、-2.823和-4.636,P值均<0.05).体外实验显示:0～1 000 μmol/L DEHP处理后肝细胞活力实际数值相差不超过15%,分别使用125、250以及500 μmol/L的DEHP刺激后,肝细胞的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平均明显升高(P值均<0.05).与单独使用DEHP刺激相比,CDCA联合DEHP刺激上调了细胞炎症因子IL-1β mRNA水平(P<0.01);DCA与DEHP联合刺激可显著增加细胞炎症因子IL-1β和IL-6的mRNA水平(P值均<0.01).结论 DEHP暴露导致小鼠胆汁淤积肝病的发生并诱发肝脏炎症,这可能与其促进有毒胆汁酸的产生进而加剧炎性因子分泌有关.

目的 建立土鳖虫中的黄曲霉毒素(AF)的亲和免疫柱净化-高效液相色谱-三重四级杆串联质谱检测方法.方法 以X-Brigde-C18(3.5 μm,3.0 mm ×50 mm)色谱柱分离,串联四级杆质谱仪检测,MRM模式进行定性定量分析,样品以60％甲醇为溶剂提取,检测土鳖虫中的AF B1、AF B2、AF G1、AF G2.结果 4种AF质谱检测的线性范围宽,相关性好,r≥0.997 9;方法精密度以6次测定值的RSD表示,为1.5％～3.4％;方法回收率用3个浓度进行添加实验,回收率范围为85.6％ ～ 98.9％;定量限范围为0.2 μg/L～0.7 μg/L;日内精密度的RSD(n=5)范围为1.1％ ～2.9％,日间精密度的RSD(n =9)范围为1.5％ ～2.8％.结论 本方法专属性强,操作简单,快捷,可作为土鳖虫中AF定量定性的有效检测方法.

背景:目前,对于体外生殖培养液的质量控制文件或技术标准中,对成分含量指标及检测方法未做明确规定,为保证该类产品的安全有效性,应及早建立质量标准.目的:采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中18种氨基酸指标成分,分析不同用途培养液中18种氨基酸的含量.方法:采用超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法,检测体外生殖培养液中 18 种氨基酸(甘氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、组氨酸、苏氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、色氨酸、胱氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、精氨酸)指标成分,色谱柱为SUPELCO Discovery HS F5-3(15 cm× 2.1 mm,3 μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.35 mL/min,柱温40 ℃;质谱采用电喷雾离子源,负离子模式扫面,扫描方式为多反应监测.结果与结论:18种氨基酸在0.25-12.5 mmol/L浓度范围内线性关系练好;18种氨基酸的平均加样回收率在86.3%-125.3%之间,精密度实验与重复性实验的相对标准偏差均小于4.7%,说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强,可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据.

目的 建立同位素稀释超高效液相色谱－串联质谱法测定人血清中维生素K1含量.方法 采用AB Sciex API 4000三重四级杆质谱仪,以稳定同位素标记的2H7－维生素K1为内标,利用甲醇沉淀血清中的蛋白质,然后加入正己烷进行液液萃取,离心后上清液经氮气吹干,用乙腈复溶.用电喷雾离子源( ESI)在正离子模式下,以MRM模式采集数据.结果 该方法的定量下限为0.1 ng/mL,线性范围为0.1～20 ng/mL,r＝0.999 2,日内、日间精密度的CV≤7.78%,回收率在92.23%～99.32%;样品室温放置4 h,处理后自动进样器放置24 h,于－80 ℃环境中反复冻融3次,稳定性均良好;检测1 108份血清样品结果显示90.61%在参考区间内.结论 建立了测定人血清中维生素K1含量的同位素稀释超高效液相色谱－串联质谱法,该法准确度高、检测限低,分析时问题,适合批量处理样品.

目的 建立动物源性中药中的克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺3种β2-受体激动剂残留的高效液相色谱-串联四级杆质谱(HPLC-MS/MS)检测方法 .方法 以Agilent XDB-C18(50mm×4.6 mm,5.0 μm)色谱柱分离,串联四级杆质谱仪检测,MRM模式进行定性定量检测分析,样品经酶解后,经MCX固相萃取柱净化,检测阿胶和人工牛黄中的克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺.结果 3种β2-受体激动剂质谱检测的线性范围宽,相关性好,r2≥0.997 1;方法 精密度RSD为1.4％～2.3％(n=6);方法 回收率范围为89.4％~102.8％;定量限范围为0.25～5.50 μg·L-1;日内精密度为2.4％~4.6％(n=5),日间精密度为1.9％~3.7％(n=9).结论 本方法 专属性强,操作简单、快捷,可作为动物源性中药中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺3种β2-受体激动剂残留的定量、定性的有效检测方法 .

目的 建立多种动物源性食品中11种喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法.方法 样品经提取后,提取液经HLB固相萃取柱进行净化.以C18色谱柱(3.0mm×10 mm,1.7 μm)为分离柱,甲醇-乙腈(1∶1,V/V)和0.1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,串联四级杆质谱仪检测,外标法定量.结果 本法在0.25 μg/kg～5.0μg/kg呈良好线性关系,相关系数＞0.99,平均回收率在78.0％ ～ 110.0％,最低检出限为0.2μg/kg ～0.3 μg/kg,相对标准差＜15％.结论 本法操作简单、灵敏度高、重现性好,能满足多种动物源性食品中11种喹诺酮类药物痕量残留的检测.

目的:建立运用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定鸡矢藤提取物中4个主要有效成分(鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷)含量的分析方法.方法:采用Venusil MP C18色谱柱(2.10 mm×50 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱(0 ～0.3 min,10％A;0.3 ～0.8 min,10％ ～ 95％A;0.8 ～3.0 min,95％A;3.0～3.2 min,95％ ～10％A;3.2～4.5 min,10％A),流速0.35 mL· min-1,柱温为室温,进样量10 μL.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式下多反应监测扫描(MRM),通过优化三重四级杆的质谱仪参数以及4个化合物相关的质谱参数,进行检测和定量分析.结果:通过仪器精密度,线性范围,重复性,稳定性,加样回收率等方法学验证,发现其结果均符合定量分析的相关标准.鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯、车叶草苷在测定浓度范围内均具有良好的线性关系(r≥0.994 7);平均加样回收率(n=6)在90.8％ ～ 112.1％,RSD均≤5.1％.结论:该方法简便、快速、准确、可靠,可用于鸡矢藤提取物中4种主要有效成分的含量测定.

目的 建立气相色谱-三重四级杆质谱仪(GC-MS/MS)同位素内标法同时测定小鼠尿液、血清、粪便中溴代阻燃剂2,2',4,4'-四溴联苯醚(BDE-47)及其10种羟基化多溴联苯醚的分析方法.方法 样品的提取方式分别采用液液萃取或者加速溶剂萃取(ASE),结合基于酸性硅胶的固相萃取(SPE)净化手段,以及硅烷化试剂(MTBSTFA)的衍生方法,经HP-5 MS毛细管柱进行了有效的分离,采用电子轰击源(EI)和动态多反应监测模式(dMRM)完成了11种分析物高灵敏度和特异性的分析.结果 分析物在1 ng/ml～100 ng/ml线性良好(r=0.993～0.999).方法检出限分别为0.070 ng/g～0.22 ng/g(血清)、0.008 5 ng/ml ～0.087 ng/ml(尿液)和0.068 ng/g ～0.29 ng/g(粪便).方法的平均回收率为73％～ 125％,日间偏差在0.8％～18.8％.结论 该方法灵敏度高,特异性好,准确度高,操作简便快速,适用于实际小鼠样本中多溴联苯醚及其羟基代谢物的测定.

目的 建立四乙基硼酸钠衍生-气相色谱-串联质谱仪测定葡萄酒及黄酒中不同形态的锡含量的方法 .方法试样采用乙酸乙酯提取,四乙基硼酸钠衍生,QuECheRS方法净化,经BRUKER BR-5 ms(30 m×0.25 mm×0.25μm)色谱柱分离,采用三重四级杆串联质谱的选择反应监测模式检测,外标法定量.结果 在0.01～0.50μg/mL内,8种有机锡化合物线性良好,相关系数均大于0.99,各有机锡化合物的方法检出限为0.2～2.0μg/L,回收率为70.1％ ～120.7％,相对标准偏差(RSD)均小于15％.结论 该方法可以用于测定液体类食品中的有机锡污染物.

目的 建立多种贝类食品中9种脂溶性贝类毒素超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法.方法 经甲醇提取,以Waters BEH C18(2.1 mm×10mm,1.7 μm)为分离柱,乙腈和0.01％氨水溶液为流动相梯度洗脱,超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪测定,外标法定量,测得游离态毒素;采用碱水解将酯化毒素转化为游离态,以Waters BEH C18(2.1 mm ×10 mm,1.7 μm)为分离柱,乙腈和0.01％氨水溶液为流动相梯度洗脱,超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪测定,外标法定量,测得毒素总量.结果 本法在2.5 ng/ml ～ 50 ng/ml内呈良好线性关系,相关系数＞0.99,最低检出限为10 μg/kg～20 μg/kg,相对标准偏差＜15％.结论 本方法操作简单、灵敏度高、重现性好,且具有较好的选择性和特异性,能满足贝类食品中9种脂溶性贝类毒素同时检测的要求,为贝类食物中毒诊断提供了可靠的实验室依据.