患者女，14岁，近10个月间断头痛，曾有跑步后胸痛，无咳嗽、咳痰、夜间憋气等症状。患者在外院行超声心动图检查未见异常，脑血管分流检测提示发泡试验(+)。后患者于本院行动脉血气分析，结果示：pH值7.41(7.35~7.45；括号内为正常参考值范围，下同)、氧饱和度96.1%(95.0%~99.0%)，氧分压76(83~108) mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa),二氧化碳分压34(35~45) mmHg，肺泡－动脉氧分压差35(5~15) mmHg，临床考虑低氧血症待查。低氧血症是指血液中含氧量降低，动脉氧分压低于同龄人的正常下限。常见的低氧血症原因包括肺通气障碍和换气障碍。该患者二氧化碳分压不高、肺泡－动脉氧分压差明显升高，提示肺换气功能障碍。常见的肺换气功能障碍包括弥散障碍、通气－灌注(ventilation/perfusion, V/Q)比例失调、右向左分流，以及血红蛋白亲和力异常等。弥散障碍是氧从肺泡进入肺毛细血管的过程受损，通常由肺泡或肺间质炎性反应和纤维化所致。V/Q比例失调原因可以是阻塞性肺疾病、肺血管性疾病(如肺栓塞)、肺气肿等。右向左分流是指血液从右心流向左心而未被氧合，包括解剖分流和生理性分流2种类型。若血流不经过肺泡，即存在解剖分流，见于心内分流、肺动静脉畸形、肝肺综合征、遗传性毛细血管扩张症等；而生理性分流指的是没有通气的肺泡存在血流灌注，见于肺不张、大叶性肺炎等。发泡试验是对比增强的经颅多普勒超声检查，在对患者注射手振生理盐水后，若经颅多普勒超声能够探测到其大脑动脉中气栓，即为阳性，提示存在右向左的解剖分流。该患者发泡试验(+)，因此行 99Tc m－聚合白蛋白(macroaggregated albumin, MAA)肺首次通过显像(图1)及CT肺动脉造影(CT pulmonary angiography, CTPA；图2)，以进一步明确右向左分流的诊断及分流程度。

目的:采用限制性抗原亲和力酶联免疫法（LAg-Avidity EIA）估算我国重点地区男男性行为人群（MSM）的HIV-1新发感染率，分析估算结果的偏差及影响因素，为提高估算结果准确性提供参考依据。方法:采用群组随机化社区干预对照研究设计，根据人口规模及MSM中HIV感染者数选择20个城市作为研究现场；基于MSM中HIV-1感染率（7%），估算样本量共700例（各城市HIV-1新发感染者35人）。通过MSM手机社交软件，建立检测预约和问卷填写系统，于2019年4-11月开展基线横断面调查并对符合新发感染检测条件的样本进行LAg-Avidity EIA检测；将试验所得参数代入WHO指南中估算公式，得到MSM的HIV-1新发感染率，根据实际情况对结果进行校正。同时梳理样本收集及检测流程，分析影响新发感染率的因素。结果:研究对象完成HIV-1初筛10 650例中，阳性反应799例，样本缺失198例。实际送检621例，排除误报样本后，完成LAg-Avidity EIA检测520例，其中判定为HIV-1新发感染155例。20个城市MSM的HIV-1新发感染率为4.06%（95% CI：3.27%~4.85%）；校正样本缺失后，HIV-1新发感染率为5.53%（95% CI：4.45%~6.60%）；同时校正缺失及误报情况后，HIV-1新发感染率为5.66%（95% CI：4.67%~6.65%）。20个城市MSM的HIV-1新发感染率实际值为4.06%~5.66%。 结论:样本缺失及误报可能导致HIV-1新发感染率的估算偏差。确保样本均来源于调查人群并对样本收集及检测各环节进行严格质控，可减小HIV-1新发感染率的估算偏差。

目的:评价麻疹IgG抗体亲和力试验对判定麻疹病例的价值。方法:以中国疾病预防控制信息系统2013-2015年天津市麻疹实验室确诊病例和麻疹排除病例为研究对象。回顾性追溯保存的病例血清，开展麻疹IgG抗体亲和力试验，重新对麻疹排除病例进行归类。结果:共收集到326例麻疹病例血标本，其中实验室确诊病例267例，排除病例59例，≥20岁病例占92.33%（301/326）。麻疹IgG抗体亲和力试验显示，确诊病例和排除病例中麻疹IgG高亲和力抗体的比例分别为66.95%（158/236）和91.23%（52/57），差异有统计学意义（ χ2=13.33， P<0.001）。根据判定标准，15.25%（9/59）排除病例被重新判定为麻疹病例，其中8例是高亲和力抗体，有含麻疹成分疫苗（MCV）免疫史，判定为继发性免疫失败病例；1例为低亲和力抗体，有典型的麻疹临床症状，无MCV免疫史。 结论:麻疹IgG抗体亲和力试验能够提供有参考意义的血清学证据，可以减少麻疹急性期血清学诊断中由于IgM抗体假阴性而造成的错误排除。

目的:通过基因序列设计及优化，构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV) PreF蛋白，对其免疫原性进行评价。方法:分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列，并添加到RSV F蛋白序列后，将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达，收获上清经镍柱纯化后，制备出4种三聚体蛋白，并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物，采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果:SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明，制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构；抗原抗体亲和力试验表明，4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强；免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明，初次免疫后，两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高，再次免疫后，Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论:两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白，并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。

目的:制备心肌特异性多肽（PCM）修饰介孔硅纳米粒（MSN）包载精氨酸（LA）的纳米颗粒（PCM-MSN@LA），评价其对脓毒症心肌的特异性保护作用。方法:通过缩合反应制备PCM-MSN@LA，检测PCM-MSN@LA表征、LA修饰量和释放量，观察PCM-MSN@LA的细胞吞噬行为及其对组织的亲和力。①实验一：将SD乳鼠原代心肌细胞分为正常对照组（Con组）、脂多糖（LPS）组、精氨酸纳米粒组（MSN@LA/LPS组）、心肌靶向精氨酸纳米粒组（PCM-MSN@LA/LPS组）。LPS组用5 mg/L LPS刺激细胞16 h；MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组分别用含25 mg/L LA的MSN@LA及PCM-MSN@LA与LPS共同刺激细胞16 h。测定细胞活性和活性氧（ROS）产生水平；用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况；用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达。②实验二：按照随机数字表法将64只健康雄性C57BL/6小鼠分为假手术组（Sham组）、LPS组、MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组，每组16只。LPS组腹腔注射50 mg/kg LPS；MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组腹腔注射LPS后立即经尾静脉分别注射0.5 mg/kg的MSN@LA及PCM-MSN@LA。每组8只小鼠用于观察24 h存活情况；另外8只于术后12 h用超声心动图评价心功能，用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定心肌组织白细胞介素（IL-1、IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达。结果:PCM-MSN@LA呈球形，粒径约180 nm，Zeta电位约-21 mV，且可负载LA，LA修饰量及释放率分别为12.3%、24.3%，细胞吞噬实验显示PCM-MSN@LA具有心肌细胞和心肌组织靶向性。实验一：LPS刺激后心肌细胞活性下降，ROS生成增多，凋亡增多，eNOS及iNOS蛋白表达增多。与LPS组比较，MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组细胞活性增高，ROS及凋亡减少，eNOS、iNOS表达增多；且PCM-MSN@LA/LPS组较MSN@LA/LPS组可进一步提高细胞活性，减少ROS产生和细胞凋亡，增加eNOS、iNOS蛋白表达〔细胞活性（ A值）：0.51±0.08比0.41±0.03，ROS水平（相对荧光强度）：28 450±1 941比35 628±2 551，凋亡细胞/总细胞数：0.27±0.03比0.35±0.04，eNOS/β-Tubulin：1.467±0.046比1.201±0.131，iNOS/β-Tubulin：1.700±0.033比1.577±0.068，均 P<0.05〕。实验二：MSN@LA/LPS组和PCM-MSN@LA/LPS组术后24 h存活动物数多于LPS组（只：2、4比1， P值分别为0.36、0.03）。与Sham组比较，LPS组小鼠心功能明显下降，心肌组织炎性因子mRNA表达增多。与LPS组比较，PCM-MSN@LA/LPS组左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）明显升高，IL-1、IL-6、TNF-α的mRNA表达明显下降〔LVEF：0.456±0.019比0.337±0.017，LVFS：（21.97±1.78）%比（15.53±1.67）%，IL-1 mRNA（2 -ΔΔCT）：169.22±8.95比189.79±6.79，IL-6 mRNA（2 -ΔΔCT）：19.90±1.60比23.74±1.45，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCT）：8.21±0.81比11.00±1.48，均 P<0.05〕；而MSN@LA/LPS组与LPS组各指标比较差异无统计学意义。 结论:PCM-MSN@LA具有心肌靶向性，可显著提高心肌细胞活性，下调炎性因子表达，减少ROS产生，减轻脓毒症心功能不全，从而实现脓毒症心肌损伤的靶向治疗。

目的:制备融合C3Fab的抗程序性死亡-配体1（PD-L1）纳米抗体P3C8-C3Fab，并研究其对血浆半衰期的影响。方法:将来源于蛋白G的C3Fab肽段，通过DNA重组技术与纳米抗体P3C8进行分子融合，并构建重组质粒pET21a-P3C8-C3Fab，在大肠杆菌BL21菌株中进行诱导表达和纯化，并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测P3C8-C3Fab与PD-L1蛋白、小鼠IgG和表达PD-L1肿瘤细胞的结合，利用双抗夹心ELISA检测不同时间小鼠血清中残留P3C8-C3Fab，以评估C3Fab对PD-L1纳米抗体血浆半衰期的延长作用。结果:成功构建了融合C3Fab的抗PD-L1纳米抗体P3C8-C3Fab，其在BL21菌中以可溶形式高效表达，经纯化获得质量分数约为90%的NbP3C8-C3Fab蛋白，得率为7.18 mg/L。P3C8-C3Fab随着质量浓度的增加，对PD-L1蛋白和小鼠IgG亲和力也逐渐升高，且呈现浓度相关性；P3C8-C3Fab与肺癌A549细胞的结合呈浓度相关性。小鼠血清中P3C8-C3Fab的浓度标准曲线呈典型的S型浓度相关性；P3C8血浆半衰期仅为0.44 h，而P3C8-C3Fab的血浆半衰期达到9.36 h，血浆半衰期延长了21.27倍。结论:C3Fab与纳米抗体P3C8连接可以显著延长其血浆半衰期，对改善纳米抗体的体内作用具有应用价值。

目的:探讨慢性荨麻疹（CU）患者血清免疫球蛋白E（IgE）、可溶性IgE高亲和力受体α（sFcεRⅠα）、IgG型抗IgE、IgG型抗FcεRⅠ自身抗体的水平及意义。方法:收集2018年1至7月于上海市第一人民医院首诊的43例CU患者作为CU组，同时选择37例皮炎湿疹患者及51名健康体检者分别作为疾病对照（DC）组及健康对照（NC）组。采用免疫比浊法检测血清IgE，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗IgE、抗FcεRⅠ和sFcεRⅠα。采用非参数检验分析各组指标水平的差异，Spearman相关分析评估各指标间的相关性及其与病情的关系，受试者工作特征曲线分析各指标诊断价值。结果:CU组血清IgE、抗IgE、抗FcεRⅠ水平显著高于NC组，中位数分别为65.70 IU/ml比17.10 IU/ml，χ 2=28.541， P=0.001；0.61比0.39，χ 2=27.408， P=0.001；0.64比0.51，χ 2=29.102， P<0.001。CU组抗FcεRⅠ水平显著低于DC组，0.64比0.83，χ 2=25.869， P=0.007。CU、DC、NC组血清sFcεRⅠα中位数分别为5.74、5.38和4.50 ng/ml，差异无统计学意义，χ 2=3.463， P=0.177。IgE与sFcεRⅠα、抗IgE与抗FcεRⅠ水平呈正相关（ r=0.455， P<0.001； r=0.611， P<0.001）。四指标与病程、症状严重程度无明显相关关系， P>0.05。IgE、抗IgE、抗FcεRⅠ对CU的诊断效能（AUC均=0.72）优于sFcεRⅠα（AUC=0.61），四项联合检测可达最高诊断效能（AUC=0.83）；抗FcεRI对CU与DC具鉴别诊断价值，AUC=0.70， P=0.002。 结论:CU患者血清IgE、抗IgE及抗FcεRⅠ水平显著升高。肥大细胞活化相关分子具有成为CU诊断指标的潜能。

目的:建立降低抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应的抗体表达系统，以期降低目标抗体的ADE效应。方法:对哺乳细胞抗体表达载体Fc区进行L234A和L235A点突变，建立抗体表达载体pFRT-IgG1κ-FcM。选取前期工作中获得的1株具有显著ADE效应的抗体Wt-WNV利用pFRT-IgG1κ-FcM系统进行表达，获得突变后抗体FcM-WNV。ELISA检测FcM-WNV与靶抗原西尼罗病毒包膜蛋白DⅢ(West Nile virus envelope protein-DⅢ，WNV E-DⅢ)的结合，流式细胞术分析FcM-WNV与人高亲和力IgG Fc受体hFcγRⅠ(hCD64)的结合。假病毒感染宿主细胞(BHK21和K562)试验检测FcM-WNV的体外中和活性。结果:FcM-WNV与Wt-WNV表达水平相当，能识别结合WNV E-DⅢ，且呈浓度依赖效应；与Wt-WNV相比，FcM-WNV与hCD64的结合力明显减弱，表现为荧光强度明显降低；与前期实验结果一致，Wt-WNV在5 μg/ml的浓度下具有明显增强WNV假病毒感染K562细胞的作用，而FcM-WNV在5 μg/ml浓度下，能有效阻断假病毒感染K562和BHK21细胞。结论:本研究建立的抗体表达系统可有效降低目标抗体的ADE效应。

目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)单克隆抗体，为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例，乳腺癌8例)患者外周血，构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆，测序并构建全长轻重链表达载体质粒，共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体，抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性，生物膜干涉(biolayer interferometry，BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter，FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果:成功构建肺癌单链抗体噬菌体库，抗体库库容≥10 8，筛选获得两株单抗，分别为BTHG17-1，BTHG17-2，酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL，亲和力在10 －8 mol/L水平，两抗体结合相同表位，可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白，具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。 结论:获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment，scFv)，具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性，为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。

目的:制备抗白细胞介素1β（IL-1β）纳米抗体，并观察其对缺氧小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:利用DNA重组技术，使用pET-16b和pHEN1表达载体构建抗IL-1β纳米抗体的重组质粒（pET-16b-4G6M-VHH、pET-16b-5BVP-VHH、pET-16b-5MVZ-VHH和pHEN1-4G6M-VHH、pHEN1-5BVP-VHH、pHEN1-5MVZ-VHH，其中VHH为重链单域抗体，4G6M-VHH、5BVP-VHH、5MVZ-VHH分别为3种抗IL-1β的纳米抗体），将构建成功的质粒分别转入大肠杆菌Rosetta2（DE3）表达菌中进行诱导表达及镍柱纯化，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹对表达产物及纯化产物进行鉴定，并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定其亲和力。将纯化所得亲和力最高的抗IL-1β纳米抗体（pHEN1-5MVZ-VHH）应用于小鼠HL-1心肌细胞缺氧模型（分为正常对照组、缺氧模型组、空白质粒组及12.5、25.0、50.0 μg/ml pHEN1-5MVZ-VHH处理组），并检测细胞存活率及凋亡率。结果:SDS-PAGE和Western印迹结果显示，成功得到相对分子质量约15 000的抗IL-1β纳米抗体；ELISA结果显示，与pET-16b载体组相比，pHEN1载体组所表达的纳米抗体与IL-1β抗原的亲和力更高（4G6M-VHH组：3.20±0.03比1.20±0.03， P<0.001；5BVP-VHH组：3.18±0.06比1.21±0.02， P<0.001；5MVZ-VHH组：3.38±0.05比1.62±0.04， P<0.001）；细胞存活及凋亡检测结果显示，与缺氧模型组相比，25.0 μg/ml及50.0 μg/ml pHEN1-5MVZ-VHH处理组HL-1细胞活性增加［（75.55±2.23）%比（46.90±2.51）%， P<0.001；（74.36±1.96）%比（46.90±2.51）%， P<0.001］，凋亡率降低［（6.83±0.27）%比（10.24±0.76）%， P<0.001；（6.68±0.38）%比（10.24±0.76）%， P<0.001］。 结论:pET-16b和pHEN1载体均能表达出抗IL-1β纳米抗体，且pHEN1载体表达的纳米抗体具有更好的抗原亲和作用。此外，pHEN1-5MVZ-VHH治疗可减少缺氧小鼠心肌细胞凋亡。