目的:筛选肠道病毒71型(EV71)中和表位，确定诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸基序，为合成肽疫苗研发提供理论依据。方法:利用噬菌体随机十二肽库淘选EV71中和抗体特异性结合克隆并测序，推导出中和表位的关键序列。合成含有关键序列且N端乙酰化(AC)和C端连接血蓝蛋白(KLH)的系列肽段，免疫小鼠后收集血清，经Western blot、ELISA和中和试验验证肽段的免疫原性以及免疫后血清的中和活性。结果:经过3轮淘选和克隆测序后，分析确定关键基序为KQEKDL。Western blot结果表明修饰后的含关键基序的系列肽段免疫小鼠获得的血清与EV71和VP1蛋白均有不同程度结合。ELISA结果表明仅含有最短关键基序的合成肽段(AC-KQEKDL-KLH)免疫后血清对其余3条肽段及EV71的反应最强。中和试验结果表明该肽段免疫后血清的中和效价也最高。结论:利用噬菌体随机肽库技术成功筛选出EV71中和表位，确定KQEKDL关键基序可能是诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸序列，为了解免疫应答机制、免疫原性评价及多肽疫苗的研发提供理论依据。

目的:制备人乳头瘤病毒6型L1(HPV6 L1)蛋白特异性单克隆抗体，探索抗体的结合特点、交叉活性以及中和效果。方法:从免疫HPV6 L1蛋白小鼠脾细胞中提取抗体基因，构建ScFv噬菌体抗体文库。用HPV6 L1蛋白对文库进行富集筛选，将获得的抗体基因表达成鼠IgG后，验证抗体与L1蛋白的结合性质以及对假病毒的中和效果。结果:成功构建了针对HPV6 L1的ScFv抗体文库，库容量为6.54×10 7。抗体文库经HPV6 L1筛选后获得了两株抗体，命名为Q9和Q11。经ELISA检测，Q9-IgG与HPV6 L1反应的滴度约为10 6，与HPV18和45 L1的滴度为10 2。Q11-IgG与HPV6 L1结合的滴度约为4×10 4，而与其他型别L1均不结合。经过假病毒中和试验测定，Q9-IgG没有中和活性，而Q11-IgG针对HVP6假病毒的中和滴度约为10 4.5。 结论:Q9和Q11均为HPV6 L1特异性单克隆抗体，但二者交叉反应性、抗原识别位点及中和活性均具有明显差异。该抗体可为HPV6病毒的基础研究、免疫学诊断以及治疗制剂研发提供工具抗体。

目的:制备能与VirB12抗原高亲和力结合的新疆双峰驼纳米抗体，为后续研究奠定基础。方法:采用VirB12重组蛋白6次免疫新疆双峰驼，从外周血中分离得到淋巴细胞后提取总RNA，通过巢式PCR扩增VHH基因片段构建噬菌体VHH展示文库。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）固相亲和富集方法进行筛选。进行3轮亲和筛选后随机挑取出第2、3轮富集的克隆，ELISA分析可溶性表达的纳米抗体与VirB12蛋白的结合情况。经过序列测定和多重比对去除重复序列，最后得到个5非冗余序列，分别命名为D1、E6、H8、H9和H10。将筛选鉴定的5个纳米抗体基因转化WK6菌株，在16 ℃下进行胞间质可溶性表达，经Ni亲和柱纯化表达后，Western Blot和ELISA法检测纳米抗体与VirB12抗原的结合能力与热稳定性。结果:经VirB12蛋白免疫后的血清抗体效价最少为1∶24 000。从VirB12抗原免疫的新疆双峰驼淋巴细胞中获得了滴度为2.8×10 8 cfu/ml的VHH噬菌体展示文库。5株纳米抗体在WK6菌中以可溶形式表达。结果表明，5株抗VirB12纳米抗体质量分数接近90%，且具有较高的抗原结合活性与明显的抗原-抗体浓度相关性；4株纳米抗体均表现出较高的热稳定性，在90 ℃处理后，仍能保留60%以上的结合活性。 结论:通过固相筛选富集和可溶性单克隆检测鉴定获得了5株具有较高亲和力和热稳定性的抗VirB12纳米抗体，为VirB12纳米抗体的进一步开发奠定了基础。

目的:制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)单克隆抗体，为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法:采集110例胸部肿瘤(肺癌102例，乳腺癌8例)患者外周血，构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆，测序并构建全长轻重链表达载体质粒，共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体，抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性，生物膜干涉(biolayer interferometry，BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter，FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果:成功构建肺癌单链抗体噬菌体库，抗体库库容≥10 8，筛选获得两株单抗，分别为BTHG17-1，BTHG17-2，酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL，亲和力在10 －8 mol/L水平，两抗体结合相同表位，可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白，具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。 结论:获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment，scFv)，具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性，为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。

目的:探究人源化膜金属蛋白酶——含有TRAB结构域的蛋白2A（TRABD2A）单克隆抗体对接受联合抗逆转录病毒疗法（cART）的人免疫缺陷病毒（HIV-1）感染者储存库细胞的作用效果，建立基于TRABD2A阻断抗体的全新HIV-1储存库检测方法。方法:2021年5—12月于中国医科大学附属第一医院收集研究对象51例。其中健康者2名，接受cART的HIV-1感染者（cART组）41例，未接受cART的HIV-1感染者（no-cART组）8例。采用噬菌体展示库技术构建人源化TRABD2A单克隆抗体，分别处理HIV-1感染者、未接受cART的HIV-1感染者及健康对照者的外周血单个核细胞（PBMC）和CD4+T淋巴细胞，利用荧光素酶报告系统、单分子免疫阵列检测技术等方法检测细胞培养上清中病毒含量，同时使用流式细胞术、荧光实时定量聚合酶链式反应检测处理后细胞的活化和病毒基因表达情况，比较不同处理组之间病毒释放量和表面活化标志CD25、CD69、HLA-DR（人类白细胞DR抗原）表达量的差异。结果:接受cART的HIV-1感染者的PBMC经人源化TRABD2A单克隆抗体处理后检测HIV-1产量，未处理组为0（0，440），使用负抗体所释放的病毒量为0（0，390），二者差异无统计学意义（ P>0.05），而使用正抗体所释放的病毒量为1 259（0，4 269）和3 142（1 292，5 060），与使用负抗体所释放的病毒量相比，差异均有统计学意义（ P<0.05）。利用健康对照者PBMC对感染者PBMC进行倍比稀释，经正抗体处理后病毒释放量等比例下降［未稀释、稀释5、25、125、625倍对应的HIV-1产量分别为4 670（3 339，7 697）、1 860（1 509，4 615）、1 550（1 150，2 680）、602（255，1 441）、2（0，37）］。且TRABD2A单抗处理后的细胞静息状态与未处理组差异无统计学意义（未处理组与正抗体-1处理组的CD25阳性细胞百分率分别为3.89±1.31、4.60±1.74，CD69阳性细胞百分率分别为2.50±1.27、2.18±0.51，HLA-DR阳性细胞百分率分别为7.66±3.78、8.79±3.42； P均>0.05），未处理与正抗体-1的病毒群抗原基因（Gag）表达量分别为1和0.82±0.55，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:人源化TRABD2A单克隆抗体能够有效阻断TRABD2A的蛋白活性，可在不改变细胞静息状态和全基因组转录水平的情况下，显著促进HIV-1感染者外周血中储存库细胞释放子代病毒，且通过此方式所引起的储存库病毒释放量与储存库细胞数量呈正相关。

新型冠状病毒肺炎在全球范围内广泛传播，对公众健康构成严重威胁。快速有效的检测手段对疫情监测与控制具有重要的意义。噬菌体抗体库是基于噬菌体展示技术发展起来的抗体文库，包含数以亿计的抗体变体，能够筛选出高特异性、高亲和力的抗体，已在多个领域中得到广泛应用，对于开发抗原检测试剂以及抗体治疗药物具有重要意义。本文对噬菌体展示技术及其在新型冠状病毒（SARS-CoV-2）检测与新型冠状病毒肺炎防治中的研究进展进行综述，为开发新型试剂、优化检测方法提供参考。

目的:评价从噬菌体库筛选获得的1株抗狂犬病病毒单克隆抗体的基本特征。方法:从抗狂犬病病毒噬菌体库中筛选获得1个阳性克隆，扩增获得其抗体轻重链可变区，构建全分子抗体的表达质粒后在HEK293 EBNA1细胞中瞬时表达，亲和纯化后对该抗体进行体外抗狂犬病病毒中和活性、中和指数、逃逸株测序、差示扫描荧光法热稳定性分析，并与数据库中街毒株糖蛋白比对关键氨基酸位点。结果:该抗体体外抗狂犬病病毒中和活性为691IU/mg；该抗体对狂犬病病毒CVS-11和CTN株的中和指数分别为8.52和7.05；CVS-11逃逸株糖蛋白测序分析表明，该抗体针对的关键氨基酸主要为N37 K、N194 K和K205 N。与1 338株狂犬病病毒街毒株糖蛋白基因比对表明，37、194和205位上仅有1个街毒株在194位上与突变逃逸株氨基酸类型相同。该抗体Tm值为70.58±0.31 ℃。结论:获得1株高中和指数的全分子人源抗狂犬病病毒中和抗体，该抗体具有较好的热稳定性。

目的 从应用噬菌体展示随机肽库技术和生物信息学方法筛选出的候选人精子特异性抗原表位肽中鉴定新的人精子特异性抗原表位.方法 多肽固相合成法合成候选人精子特异性抗原表位肽单体和三聚体.斑点免疫印迹法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测与抗精子抗体(ASA))阳性血清的免疫反应.ELISA检测免疫小鼠血清抗候选人精子特异性抗原表位肽抗体滴度.计算机辅助精子分析检测候选人精子特异性抗原表位肽免疫小鼠血清对人精子的作用.结果 高效液相色谱法和质谱法测定结果显示,合成的候选人精子特异性抗原表位肽纯度和结构与设计相符.斑点免疫印迹法和ELISA检测结果显示,氨基酸序列为n-TRRIHRHMTIRR-c的候选人精子特异性抗原表位肽及其三聚体与35 例ASA阳性血清中的17 例呈较强的免疫反应.该候选人精子特异性抗原表位肽及其三聚体免疫小鼠血清处理人精子后,精子活力相关参数较对照组均明显降低(P<0.05),其中三聚体导致的精子活力相关参数下降尤为明显(P<0.01).结论 氨基酸序列为n-TRRIHRHMTIRR-c的十二肽具有人精子特异性抗原表位,是一种新的人精子特异性抗原表位肽.

目的 利用全合成纳米抗体库筛选制备黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的纳米抗体.方法 制备AFB1完全抗原并依托全合成纳米抗体库进行4轮筛选,将捕获的高亲和力抗体基因转化至原核表达系统表达,分析纯化后的抗体特异性及亲和力,并构建抗体G5-AFB1复合三维结构,分析二者的结合特点.结果 在AFB1完全抗原制备基础上筛选,随着轮数的增加,特异性噬菌体明显富集,最终获得一株阳性单克隆G5,经鉴定,其半数效应浓度(effec-tive concentration 50％,EC50)为 0.953 μmol/L,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为 43 μmol/L.另外,G5-AFB1复合物不仅形成了稳定的氢键,也具备较好的疏水和静电作用.结论 通过全合成纳米抗体库可以筛选出良好的AFB1抗体,为AFB1检测与治疗提供了良好基础,也证实了噬菌体展示技术以及全合成纳米抗体库在小分子生物毒素抗体制备中具有较大的发展潜力.

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性.通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持.方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体.通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定.结果:构建了一个库容为5.47×108 cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L.且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位.结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断.