通过举办消化内镜专科护士培训班,按准入要求录取培训对象,运用理论结合实践的培训模式,并通过严格的培训考核,逐步建立并完善内镜专科护士培训体系.三届消化内镜专科护士培训班共培养了 135名消化内镜专科护士,更好地为广大患者提供专业化的护理服务,现就消化内镜专科护士培训体系探索过程中的经验进行总结与分享.

目的:探讨低剂量（0.1 mg/kg）西达本胺治疗原发免疫性血小板减少症（ITP）的作用及机制。方法:①应用C57BL/6J小鼠建立ITP被动模型，灌胃给予0、0.01、0.1、0.5、5.0 mg/kg西达本胺，观察治疗前后ITP小鼠模型外周血血小板计数。②应用C57BL/6J小鼠建立ITP主动模型，灌胃给予0.1 mg/kg西达本胺，观察治疗前后ITP小鼠模型外周血血小板计数；4周后处死小鼠，流式细胞术检测脾细胞中CD4 +CD25 +Foxp3 +自然调节性T细胞（nTreg）比例并应用ELISA方法检测小鼠外周血IL-6水平。③分离ITP患者外周血单个核细胞，与低剂量西达本胺共培养72 h后检测nTreg细胞比例；免疫磁珠法分离CD4 +CD25 +调节性T细胞（Treg细胞）以及CD4 +CD25 -效应T细胞，将二者以1∶4比例混合共培养，加入低剂量西达本胺干预，检测Treg细胞对效应T细胞增殖的抑制作用。 结果:①低剂量西达本胺可明显提高ITP被动模型鼠外周血血小板水平。②低剂量西达本胺可显著提高ITP动物模型外周血血小板水平，降低出血相关死亡率。③低剂量西达本胺可显著提高ITP动物模型脾细胞中nTreg比例、降低血清IL-6水平。④低剂量西达本胺可显著提高ITP患者外周血单个核细胞培养体系中nTreg细胞比例、增强Treg细胞对效应T细胞增殖的抑制作用。结论:低剂量西达本胺可促进nTreg生成、增强Treg细胞的免疫抑制功能、降低IL-6水平，促进免疫耐受，对ITP有较好的治疗作用。

目的:观察前列腺癌（PCa）患者CD8 + T细胞中Notch受体的表达，分析Notch信号通路对PCa患者CD8 + T细胞功能的影响。 方法:收集2017年11月至2018年6月在山西省人民医院就诊的PCa患者45例、无菌性前列腺炎患者41例和健康对照者30名。分选外周血CD8 +T细胞，反转录实时定量PCR法检测CD8 + T细胞中Notch1~4 mRNA相对表达量。使用Notch信号通路抑制剂γ-分泌素抑制剂（GSI）刺激CD8 + T细胞，反转录实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA相对表达量变化，流式细胞术检测抗程序性死亡分子（PD）-1和CTLA-4阳性细胞比例变化。建立CD8 + T细胞与PCa细胞系LAPC4细胞的直接接触和间接接触培养体系，通过检测靶细胞的死亡比例和细胞因子分泌评估抑制Notch信号通路对CD8 +T细胞的杀伤功能的影响。组间比较采用单因素方差分析、LSD- t检验或配对 t检验。 结果:PCa患者CD8 +T细胞中Notch1~4 mRNA相对表达量（5.22±1.04、2.79±0.91、9.74±3.38、1.63±0.82）显著高于健康对照者（0.87±0.17、1.03±0.17、1.24±0.21、1.26±0.08）和无菌性前列腺炎患者（0.87±0.15、1.05±0.14、1.27±0.19、1.26±0.16）（均 P<0.05）。PCa患者CD8 +T细胞存在功能衰竭，主要表现为穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA相对表达量降低（均 P<0.000 1），PD-1：19.3%±5.4%和CTLA-4：11.7%±3.9%阳性细胞比例升高，直接接触共培养体系中PCa患者CD8 +T细胞诱导LAPC4细胞死亡比例下降（28.8%±6.4%比37.2%±2.6%， P=0.015），γ干扰素（IFN）-γ分泌水平降低[（61.7±10.6）ng/L比（88.6±20.2）ng/L， P=0.003 2]。使用GSI抑制Notch信号通路可增强PCa患者CD8 +T细胞中穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA相对表达量（均 P<0.01），PD-1 +CD8 +T细胞和CTLA-4 +CD8 +T细胞的比例降低。抑制Notch信号通路可增强直接接触共培养体系中PCa患者CD8 +T细胞诱导LAPC4细胞死亡比例（34.3%±7.2%， P=0.000 2），IFN-γ分泌水平亦升高[（88.4±33.6）ng/L， P=0.008 3]。 结论:PCa患者Notch受体表达升高诱导CD8 +T细胞功能衰竭。

目的:构建基于血管化机制的骨不连类器官芯片，并探讨无菌性骨不连发生机制。方法:设计半开放微流控芯片，实现人骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stromal cells，BMSC）、人胚肺成纤维细胞（human fetal lung fibroblast 1，HFL1）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）共培养，建立三维器官芯片体系。设置HFL1与HUVEC不同比例与BMSC共培养，分为对照组（HFL1∶HUVEC=1∶1）、纤维化组（HFL1∶HUVEC=3∶1）与血管化组（HFL1∶HUVEC=1∶3）。通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、茜素红（alizarin red）染色观察BMSC成骨分化情况，qPCR分析成骨标志基因 SP7、 RUNX2、 ALPL、 BGLAP及血管化相关基因 KDR、 VWF转录情况，Western blot检测成骨标志蛋白RUNX2和ALP表达水平。 结果:BMSC、HFL1和HUVEC共培养体系中BMSC正常生长且出现明显生物矿化行为，血管内皮细胞能够形成有序血管结构，证实体系构建成功。相较对照组，纤维化组BMSC成骨分化下降趋势不明显，矿化标志基因 ALPL和 BGLAP相对表达量为0.55±0.19、0.42±0.27，差异均有统计学意义（ P<0.05）；血管化组基因 KDR和 VWF下调，相对表达量为0.49±0.17、0.49±0.21，差异均有统计学意义（ P<0.05）。相较对照组，血管化组BMSC成骨分化基因 SP7、 RUNX2、 ALPL和 BGLAP上调，相对表达量分别为2.91±0.52、3.83±1.87、3.22±1.29和5.21±1.46，差异均有统计学意义（ P<0.05）；血管化基因 KDR、 VWF上调，相对表达为8.24±2.84、5.32±1.67，差异均有统计学意义（ P<0.05）。Western blot结果表明RUNX2、ALP在血管化组中表达增加，纤维化组中表达减少。 结论:骨不连类器官芯片能够部分模拟骨不连局部微环境，纤维化可能导致骨形成能力和血管化水平显著下降，是无菌性骨不连发生的潜在重要原因。

目的:通过实验研究胆道闭锁(biliary atresia，BA)患儿总胆固醇(total cholesterol，TC)对胆管损伤的影响，并探讨其免疫学机制。方法:回顾性收集2011—2020年间广州市妇女儿童医疗中心收治的118例经术中胆管造影确诊的BA患儿、80例同龄婴儿肝炎综合征(infantile hepatitis syndrome，IHS)患儿以及165例无肝病学证据且无肝功能异常的同龄正常对照(normal control，NC)儿童外周血TC含量。分析TC与胆管损伤各指标及多种与BA形成相关免疫细胞之间的关联。在体外CD177 ＋中性粒细胞与胆道上皮细胞(biliary epithelial cell，BEC)共培养体系中加入胆固醇，观察其对BEC凋亡的影响，同时观察加入胆固醇刺激后CD177 ＋中性粒细胞内相关指标的变化；根据外周血TC检测数值将BA患儿分为高胆固醇BA组、正常胆固醇BA组，通过RNA测序分析，比较高胆固醇组、正常胆固醇组BA患儿CD177 ＋中性粒细胞基因表达差异。 结果:BA患儿外周血TC含量为4.9(4.0，6.1)mmol/L，高于NC组的3.7(3.1, 4.1)mmol/L及IHS组的4.2 (3.3，5.4)mmol/L，差异有统计学意义( P<0.05)；BA患儿外周血TC含量[4.9(4.0, 6.1)mmol/L]与胆管损伤指标γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyltransferase，GGT)含量[497.0(298.5，843.0)U/L]呈正相关( r＝0.401， P<0.05)，同时与直接胆红素(direct bilirubin，DBIL)、总胆汁酸(total bile acid，TBA)含量呈正相关( r＝0.338， P<0.05； r＝0.235， P<0.05)；在肝脏组织胆管细胞凋亡数量比例层面，高胆固醇BA组为0.724±0.146，正常胆固醇BA组为0.232±0.141，NC组(患儿年龄相近门静脉海棉样变儿童)为0.242±0.228，高胆固醇BA组与其余两组间差异有统计学意义( P<0.05)；BA患儿外周血TC含量[4.4(3.1，5.5)mmol/L]与外周血CD177 ＋中性粒细胞比例[(26.5±6.4)%]呈正相关( r＝0.503， P<0.05)，与外周血单核细胞[1.0(0.8，1.2)×10 9/L]、中性粒细胞[(3.2±1.4)×10 9/L]无相关性( P>0.05); BA患儿外周血TC含量[(4.7±1.6)mmol/L]与外周血T细胞数量(4 952.1±1 985.0)个/μL呈正相关( r＝0.488， P<0.05)，与外周血B细胞971.0(664.8，1 636.1)个/μL无相关性( P>0.05)；与正常胆固醇BA组相比，高胆固醇BA组线粒体氧化磷酸化相关基因( CYBB、 CALR、 MT- CYB、 MT- ND5、 MT- ND1)表达显著上调，差异有统计学意义( P<0.05)；在胆固醇刺激下，CD177 ＋中性粒细胞中代表线粒体氧化磷酸化的指标TOMM20及DNA 8-OHdG的平均荧光强度分别为73.47±6.36、159.07±10.17，较刺激前差异有统计学意义( P<0.05)，而CD177 ＋中性粒细胞胞外诱捕网指标MPO和H2B分别为60.51±4.26、157.46±9.40，较刺激前差异有统计学意义( P<0.05)；同时在CD177 ＋中性粒细胞与BEC共培养体系中，加入胆固醇刺激后BEC细胞活率较刺激前差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:胆道闭锁中胆固醇可上调CD177 ＋中性粒细胞线粒体氧化磷酸化水平，促进胞外诱捕网的释放，引起胆管损伤。

目的:通过对肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)进行热应激处理，观察热应激下CAFs对结肠癌细胞增殖和迁移的影响。方法:提取结肠癌组织(取自华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科手术切除的结肠腺癌新鲜组织标本)原代培养的CAFs，收集43 ℃热应激下处理1 h的CAFs上清液作为热应激条件培养基，37 ℃持续恒温的CAFs上清液作为恒温条件培养基，处理人类结肠癌细胞株SW-480(取自华中科技大学同济医学院附属协和医院普外实验室保存细胞株)，细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测热应激条件培养基和恒温条件培养基下结肠癌细胞的增殖能力，划痕实验和Transwell实验观察热应激条件培养基和恒温条件培养基对结肠癌细胞迁移能力的影响。酶联免疫吸附实验检测白细胞介素(IL)-11在条件培养基中的表达水平。组间均数比较采用 t检验。 结果:热应激条件培养基处理的SW-480细胞的增殖能力强于恒温条件培养基，在72、96 h差异有统计学意义( t＝3.915， P<0.05； t＝3.866， P<0.05)。热应激条件培养基处理的SW-480细胞的迁移能力强于恒温条件培养基，热应激组48 h划痕愈合率为(38.9±6.2)%，高于恒温组的(14.7±4.1)%，差异有统计学意义( t＝4.616， P<0.05)；Transwell体系共培养，热应激CAFs组48 h迁移结肠癌细胞计数为(173±30)个，高于恒温CAFs组(51±5)个，差异有统计学意义( t＝5.591， P<0.01)。热应激条件培养基上清中的IL-11相对吸光度值较恒温条件培养基显著升高，差异有统计学意义( t＝2.790， P<0.05)。 结论:热应激CAFs可增强结肠癌细胞的增殖和迁移，该过程可能与IL-11的旁分泌调节有关。

目的:探讨结核抗原Ag85作用于巨噬细胞后对霍奇金淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响，以及结核感染在霍奇金淋巴瘤进展中的可能作用。方法:采用Transwell嵌套法建立霍奇金淋巴瘤细胞株KM-H2与人单核细胞白血病细胞株THP-1（模拟巨噬细胞）非直接接触共培养体系。KM-H2细胞单独培养为KM-H2组，Ag85干预的KM-H2细胞为KM-H2+Ag85组，KM-H2细胞与THP-1细胞共培养为KM-H2+THP-1组，Ag85干预的KM-H2细胞与THP-1细胞共培养为KM-H2+THP-1+Ag85组。采用CCK-8法检测各组KM-H2细胞的增殖情况，绘制生长曲线；采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况；采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞p53、c-myc、bcl-2、血管内皮生长因子受体3（VEGFR3）mRNA表达水平；采用蛋白质印迹法检测各组细胞bax、bcl-2蛋白的表达。结果:培养24、48 h后KM-H2+Ag85组细胞增殖能力均高于KM-H2组（均 P=0.001），而培养24、48、72 h后KM-H2+THP-1组细胞增殖能力均低于KM-H2组（均 P<0.05）；培养48、72 h后KM-H2+THP-1+Ag85组细胞增殖能力均低于KM-H2组（均 P<0.05），但与KM-H2+THP-1组相比，培养24、48 h后KM-H2+THP-1+Ag85组细胞增殖能力均增强，培养72h后两组间差异无统计学意义（ P>0.05）。KM-H2+Ag85组细胞凋亡率[（0.92±0.80）%]低于KM-H2组[（6.02±1.63）%]（ P<0.001），KM-H2+THP-1组细胞凋亡率[（8.57±0.57）%]高于KM-H2组（ P<0.05），而KM-H2+THP-1+Ag85组细胞凋亡率[（0.60±0.13）%]较KM-H2+THP-1组降低（ P<0.001）。KM-H2+Ag85组细胞bcl-2、VEGFR3 mRNA相对表达量均高于KM-H2组（ P值分别为0.018、0.017），c-myc mRNA相对表达量低于KM-H2组（ P=0.016），两组间p53 mRNA相对表达量差异无统计学意义（ P>0.05）；KM-H2+THP-1+Ag85组细胞p53 mRNA相对表达量低于KM-H2+THP-1组（ P=0.048），bcl-2、VEGFR3 mRNA相对表达量均高于KM-H2+THP-1组（ P值分别为0.016、0.021）。KM-H2+Ag85组细胞bax蛋白表达较KM-H2组降低（ P=0.019），bcl-2蛋白表达较KM-H2组增加（ P=0.001）；KM-H2+THP-1+Ag85组细胞bax蛋白表达较KM-H2+THP-1组降低（ P=0.011），两组间bcl-2蛋白表达差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:结核抗原Ag85可能通过影响巨噬细胞功能而抑制霍奇金淋巴瘤KM-H2细胞的凋亡，并增强其增殖活性。

目的:探讨miRNAs介导的胶质瘤肿瘤微环境(TME)中巨噬细胞(Mφ)的恶性转化及其机制。方法:应用集落刺激因子诱导表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠骨髓来源细胞(BMDCs)分化，获得Mφ-GFP。将胶质瘤干细胞(GSCs)与Mφ-GFP体外共培养，筛选具备无限增殖潜能的Mφ-GFP，即恶变巨噬细胞(t-Mφ)。通过miRNAs芯片分析获取t-Mφ与正常Mφ的miRNAs差异表达谱。分别比较目标miRNA在中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)不同世界卫生组织(WHO)分级胶质瘤组织、来源于手术切除的10例胶质瘤组织与瘤旁组织、t-Mφ与正常Mφ中的表达水平，并分析目标miRNA表达水平与患者生存期的相关性。采用流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(WB)及荧光素酶活性实验探讨目标miRNA调控TME中Mφ恶变的分子机制。结果:通过建立双色荧光示踪共培养体系，成功获得具备无限增殖潜能的单克隆GFP +细胞，并表达Mφ标志物F4/80和CD11b。miRNAs芯片差异表达谱和qRT-PCR结果证实，与正常Mφ相比，miR-223-3p在t-Mφ中的表达显著升高。临床分析中，胶质瘤组织样本中miR-223-3p的表达水平显著高于配对的瘤旁组织( P<0.01)。对CGGA的分析结果发现，胶质母细胞瘤中的miR-223-3p表达水平显著高于低级别胶质瘤(WHO 2/3级)( P<0.001)。生存分析结果提示，低表达miR-223-3p胶质瘤患者的总体生存期显著优于高表达组( P<0.01)。下调miR-223-3p可促进t-Mφ的凋亡( P<0.01)。生物信息学分析显示，受体相互作用蛋白激酶(RIPK3)基因3′-UTR区存在miR-223-3p潜在的结合位点。荧光素酶活性实验结果显示，与共转染miR-223-3p模拟物对照和RIPK3-WT的细胞相比，共转染miR-223-3p模拟物和RIPK3-WT的t-Mφ细胞荧光强度显著降低( P<0.01)。qRT-PCR和WB实验结果证实，miR-223-3p下调的t-Mφ中RIPK3的表达水平显著高于对照组( P<0.01)，而miR-223-3p过表达的t-Mφ中RIPK3的表达水平显著低于对照组( P<0.05)。此外，miR-223-3p抑制剂/RIPK3抑制剂组t-Mφ的凋亡细胞比例显著低于miR-223-3p抑制剂组( P<0.01)。 结论:GSCs可诱导TME中Mφ的恶性转化，而miR-223-3p可靶向抑制t-Mφ中RIPK3的表达，进而抑制t-Mφ的细胞凋亡。

目的:观察耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）脓毒症患者外周血自然杀伤（NK）细胞亚群和功能，探讨基质金属蛋白酶（MMP）对MRSA脓毒症患者NK细胞功能的影响。方法:选择2017年1月至2018年6月本科收治的MRSA脓毒症患者21例和健康对照者（NC）11例，分离外周血单个核细胞（PBMC），流式细胞术检测NK细胞亚群比例。通过检测PBMC与靶细胞共培养体系中CD107a、CD69、CD16的表达评估NK细胞功能。分选NK细胞，实时定量PCR法检测MMP mRNA，使用MMP抑制剂刺激NK细胞，检测共培养体系中CD107a变化。组间比较采用成组 t检验或配对 t检验。 结果:总NK细胞比例在NC和MRSA脓毒症患者之间的差异无统计学意义（ P>0.05），MRSA脓毒症患者CD56brightCD16-NK细胞[（5.36±1.02)% vs (4.30±0.89)%]和CD56-CD16+NK细胞[（24.04±2.92）% vs （9.70±1.54）%]升高（ P<0.05），CD56dimCD16+NK细胞（71.22±13.03）% vs （87.64±7.05%）]降低（ P<0.01）。NK细胞通过不同受体介导相应靶细胞杀伤后，MRSA脓毒症患者NK细胞中CD107a[（33.55±3.84）% vs （25.34±6.20%）]和CD69[（14.96±1.47%） vs （18.80±1.49）%]比例低于NC（ P<0.01），CD16 MFI[（247.1±50.31） vs （189.4±57.54）]高于NC（ P<0.01）。MMP-1/2/3/9 mRNA在MRSA脓毒症患者NK细胞中的相对表达量升高（ P<0.01）。抑制MRSA脓毒症患者NK细胞MMP使CD107a比例升高[（33.67±8.03%） vs （25.87±6.23）%， P=0.018]。 结论:MRSA脓毒症患者存在NK细胞亚群失衡和功能衰竭，这可能与MMP诱导的抗体依赖细胞介导的毒性作用降低有关。

目的:研究Ⅰ、Ⅳ fimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖（ Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide，Pg-LPS）对共培养条件下人脐动脉平滑肌细胞（human umbilical artery smooth muscle cell，HUASMC）增殖和迁移能力的影响，探讨牙周炎与动脉粥样硬化（atherosclerosis，As）相关的生物学基础和机制。 方法:厌氧培养Ⅰ、Ⅳ fimA型Pg，分别提取、纯化并鉴定两型Pg-LPS；体外原代培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）和HUASMC，并采用鼠尾Ⅰ型胶原建立HUVEC-HUASMC共培养细胞模型；实验分为T1组（质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的ⅠfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞）和T2组（质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的ⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞），以及阴性对照组（不加LPS组）；细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）法检测HUASMC的增殖能力，Transwell迁移小室观察HUASMC的迁移能力。比较各组不同质量浓度Pg-LPS刺激共培养细胞2、8、24及48 h后，HUASMC的增殖及迁移能力的变化。结果:共培养细胞在Ⅰ、Ⅳ fimA型Pg-LPS的作用下，在24及48 h时，两型Pg-LPS的各质量浓度组中，HUASMC的 A值均较阴性对照组显著上调（ P<0.05）；在48 h时5.0、10.0 mg/L ⅣfimA型Pg-LPS 刺激共培养细胞后，HUASMC的 A值（分别为1.386±0.044、1.455±0.058）均显著高于相同浓度ⅠfimA型Pg-LPS刺激共培养中HUASMC的 A值（分别为1.168±0.064、1.204±0.088）（ P<0.05）；此外，在48 h时，5.0、10.0 mg/L Ⅳ fimA型Pg-LPS 刺激共培养细胞后，HUASMC的 A值均显著高于0.5、1.0 mg/L Ⅳ fimA型Pg-LPS 刺激共培养中HUASMC的 A值（分别为1.170±0.082、1.239±0.089）（ P<0.05）。HUASMC的迁移结果显示，在8、24及48 h时，Ⅰ、ⅣfimA型Pg-LPS各质量浓度组中，HUASMC的迁移数量均较同组内2 h时相同Pg-LPS质量浓度下HUASMC迁移数量显著上调（ P<0.05）；在48 h时，除10.0 mg/L ⅣfimA型Pg-LPS外，其余各Pg-LPS质量浓度组HUASMC的迁移数量均较同组内24 h时相同Pg-LPS质量浓度下HUASMC迁移数量显著增加（ P<0.05）；且在48 h时，2.0 mg/L Ⅳ fimA型Pg-LPS刺激共培养细胞后，HUASMC的迁移数量（204.00±20.98）较相同浓度下Ⅰ fimA型Pg-LPS刺激后HUASMC迁移数量（141.89±18.28）显著上调（ P<0.05）；在同一观察时点，同型Pg-LPS浓度越高，HUASMC的迁移数量越多（ P<0.05）。 结论:Ⅰ、ⅣfimA型Pg-LPS均能促使共培养细胞中HUASMC的增殖和迁移能力增强；Pg-LPS的毒力与其fimA基因型相关，ⅣfimA型Pg-LPS较ⅠfimA型Pg-LPS刺激作用更显著，更易导致HUASMC功能紊乱，从而为重度牙周炎更易促进As的进展提供依据。