研究乳源性外泌体与脂质体进行膜融合得到的杂化外泌体装载青藤碱(sinomenine,SIN)后对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗效果.通过蔗糖密度梯度离心法从鲜牛乳中提取外泌体,采用乳化蒸发-低温固化法制备脂质体,共孵育法进行膜融合后对杂化外泌体进行表征:透射电镜检测形貌,纳米粒度电位仪检测粒径与电位,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测膜融合前后外泌体膜表面特征蛋白CD63和TSG101的表达.超声法装载青藤碱后,酶标仪检测其载药量与包封率.胶原抗体诱导法建立CIA大鼠模型,药效实验设对照组、模型组、SIN组、SIN-脂质体组、SIN-乳外泌体组、SIN-杂化外泌体组及阳性药(地塞米松)组.记录给药期间大鼠体质量变化,以足肿胀度、免疫器官指数、关节炎指数、微循环指标变化、滑膜组织病理学检查、血清炎症因子水平变化为指标进行药效学研究.透射电镜结果显示,杂化外泌体与乳外泌体外观均呈茶托状,共孵育后外泌体粒径由(97.92±3.42)nm 增长到(132.70±4.07)nm,Zeta 电位由(-2.01±0.33)mV 变为(-17.90±2.13)mV,WB结果显示CD63与TSG101蛋白在乳外泌体及杂化外泌体中均正常表达.酶标仪测定乳外泌体包封率31.64％±2.48％、载药量2.35％±0.52％,杂化外泌体包封率48.21％±3.12％、载药量3.17％±0.36％.药效学结果显示,与模型组相比,各给药组一般情况及足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数均得到显著改善(P＜0.05,P＜0.01),微血管综合评分及血管阻力显著下降(P＜0.05,P＜0.01),血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)炎症因子水平显著降低(P＜0.01),滑膜组织的病变得到一定程度的改善.同时与SIN组、SIN-脂质体组及SIN-乳外泌体组相比,SIN-杂化外泌体组具备更平稳持久的药效.该研究将乳源性外泌体与脂质体共孵育得到的杂化外泌体成功改善了外泌体载药量小与脂质体生物相容性差等问题,负载青藤碱的杂化外泌体对CIA大鼠有着良好的疗效,可有效解决青风藤等疗效佳但生物半衰期短的问题,为传统中药的新发展及类风湿性关节炎等疾病的治疗提供了新思路.

旨在探讨茱萸丸对动脉粥样硬化(AS)的影响及可能的作用机制.采用高脂饲料喂养诱导小鼠AS模型,造模周期为12周.造模成功的50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠按照随机数字表法分为5组,即模型组,茱萸丸低、中、高剂量组,阿托伐他汀钙组,每组10只;C57BL/6J小鼠10只作为空白组.空白组及模型组给予等体积无菌蒸馏水灌胃,茱萸丸低、中、高剂量组给予130.54、261.08、522.16 mg·kg-1灌胃,阿托伐他汀钙组给予10.40 mg·kg-1灌胃,每日1次,共12周.给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠主动脉、肝脏、附睾脂肪的病理学变化,并计算主动脉斑块面积占比、附睾脂肪面积、非酒精性脂肪肝活动性积分(NAS);油红O染色、Masson染色观察主动脉脂质及胶原纤维沉积,并计算主动脉红染脂质面积占比、主动脉胶原沉积面积占比;比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、铁离子水平;免疫荧光法检测主动脉环氧合酶2(COX2)、铁蛋白重链1(FTH1)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白水平;免疫组化法检测主动脉肿瘤蛋白53(p53)水平;蛋白免疫印迹法检测主动脉p53、SLC7A11蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测小鼠主动脉p53、SLC7A11、GPX4、FTH1、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)mRNA表达水平.结果显示,与空白组比较,模型组小鼠主动脉斑块面积明显扩大,胶原纤维沉积增加,肝脏脂质沉积增加,脂滴变多,附睾脂肪细胞体积扩大;血清中铁离子、MDA含量升高,SOD、GSH-Px水平降低;p53、COX2蛋白表达升高;主动脉FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达降低;PTGS2、NOX1 mRNA表达升高.与模型组比较,茱萸丸低、中、高剂量组及阿托伐他汀钙组小鼠主动脉斑块面积明显缩小,胶原沉积减少,肝脏脂质沉积减少,脂滴变少,附睾脂肪细胞体积缩小;血清中铁离子、MDA含量降低,SOD、GSH-Px水平升高;p53、COX2蛋白表达降低;主动脉FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达升高;PTGS2、NOX1 mRNA表达降低.综上所述,茱萸丸对小鼠AS主动脉斑块具有较好的治疗作用,其机制可能与调控p53/SLC7A11信号通路介导的氧化损伤及抑制细胞铁死亡有关.

目的 制备用于肿瘤光热治疗的载吲哚菁绿(ICG)血小板膜仿生纳米粒(ICG-PLP),并对其体外特性进行初步评价.方法 采用超声法制备ICG-PLP,并用激光粒度仪测定其粒径及zeta电位,用紫外分光光度法检测其包封率,在808 nm近红外光(2 W/cm2)照射下考察其光热性质,用SDS-PAGE观察血小板膜蛋白保留情况,用激光共聚焦显微镜考察制剂被小鼠巨噬细胞RAW264.7及人非小细胞肺癌细胞A549、小鼠黑色素瘤细胞B16-F10、小鼠乳腺癌细胞4T1摄取的情况,用MTT法检测ICG-PLP光毒性,通过考察溶血率及细胞相容性初步评价其安全性.在健康SD大鼠体内尾静脉注射给药后考察ICG、载ICG脂质体和ICG-PLP的体内循环时间.结果 成功制备了ICG-PLP,其平均包封率为(97.68±0.01)％,平均粒径为(109.77±0.76)nm,平均zeta电位为(-21.23±0.84)mV,多分散系数为0.22±0.01.ICG-PLP很好地保留了血小板膜上的蛋白质,并具有良好的光热性能.血小板膜能促进仿生纳米粒被A549、B16-F10、4T1等肿瘤细胞摄取,并减少巨噬细胞对仿生纳米粒的吞噬.ICG-PLP展示出良好的光热治疗效果,能杀伤肿瘤细胞,且有良好的安全性.静脉给药后,ICG-PLP能延长ICG在健康SD大鼠体内的滞留时间.结论 成功构建了ICG-PLP,其在药物靶向递送和肿瘤光热治疗方面具有很大的潜力.

目的:探讨新生儿出生时不同缺氧程度下脐血中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）的水平以及其与缺氧器官（肝脏、肾脏、心脏）受损的关系。方法:前瞻性选择2022年4~10月湖南妇女儿童医院产科分娩的所有新生儿为研究对象，根据宫内/产程中缺氧情况分为健康对照组、缺氧无窒息组、缺氧窒息组。所有新生儿断脐后均采集脐动脉血检测脐血血气及NGAL水平，生后24~48 h完善肝肾功能、心肌酶检测，分析脐血NGAL水平与各检测指标间的关系。结果:共纳入161例新生儿，健康对照组91例，缺氧无窒息组49例，缺氧窒息组21例。缺氧窒息组脐血NGAL水平高于缺氧无窒息组和健康对照组［（1.81±0.71）ng/ml比（1.22±0.53）ng/ml、（0.88±0.47）ng/ml］，缺氧无窒息组高于健康对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。脐血NGAL水平与新生儿性别、胎龄、出生体重、母亲年龄、体重指数、肌酸激酶同工酶MB均无显著相关性（ P>0.05），与Apgar评分、脐血血气pH、BE值存在较强负相关性（ r<-0.3， P<0.05），与乳酸、谷丙转氨酶、肌酐存在较强正相关性（ r>0.3， P<0.05）。受试者工作特征曲线分析显示，以谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮、肌酸激酶同工酶MB联合作为新生儿肝脏、肾脏、心脏受损实验室标准，当NGAL水平截断值为1.07 ng/ml 时，其敏感度和特异度分别为84.3%、60.3%。 结论:脐血NGAL水平在新生儿出生时随着缺氧加重有升高趋势，可能与缺氧后器官（肝脏、肾脏、心脏）受损相关。

目的:观察小干扰RNA(siRNA)靶向干扰共刺激分子B7-H4基因对膀胱尿路上皮癌细胞增殖、侵袭、凋亡以及上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测膀胱癌BIU-87细胞和膀胱正常上皮SV-HUV-1细胞的B7-H4的表达；将B7-H4-siRNA脂质体转染BIU-87细胞，Western blot检测siRNA干扰B7-H4表达对膀胱癌BIU-87细胞B7-H4表达水平和EMT的影响，细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell侵袭试验和流式细胞术检测干扰B7-H4表达对膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭和凋亡的影响；构建慢病毒B7-H4基因过表达载体并转染BIU-87细胞，上述实验方法检测B7-H4的表达水平、恶性生物学行为和EMT转化的变化。以上均以未干扰BIU-87细胞为对照组。两组均数比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:BIU-87细胞B7-H4 mRNA表达量(19.501±1.753)高于SV-HUV-1细胞(1.008±0.078， t＝15.613， P<0.01)，差异有统计学意义；B7-H4蛋白在BIU-87细胞量(12.309±2.561)表达高于SV-HUV-1细胞(2.463±0.136， t＝8.541， P<0.01)，差异有统计学意义。B7-H4-siRNA敲低后BIU-87细胞B7-H4和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量低于未敲低组，而E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量则高于未敲低组。B7-H4-siRNA干扰BIU-87细胞72 h后B7-H4敲低组1、2和3组对应吸光度值分别为1.714±0.075、1.762±0.092和1.796±0.072，显著低于未敲低组(2.262±0.155， F＝6.017， P<0.01)，差异有统计学意义；成功将B7-H4过表达质粒转染BIU-87细胞后可以明显观察到过表达条带，且72 h后B7-H4过表达组吸光度值(2.858±0.147)显著高于对照组(2.353±0.209， t＝8.395， P<0.01)，差异有统计学意义；B7-H4-siRNA敲低后BIU-87细胞主要处于G 1期，细胞分裂周期延长，B7-H4过表达后BIU-87细胞主要处于S期，细胞分裂周期缩短，且BIU-87细胞凋亡数量[(6.037±0.153)个]显著高于过表达组[(3.646±0.065)个， t＝10.238， P<0.01]，差异有统计学意义；Transwell侵袭实验结果显示对照组细胞数量[(172.000±9.091)个]明显高于B7-H4敲低组1[(47.000±4.535)个、组2(41.000±8.643)个和组3(48.000±11.058)个， F＝13.742， P<0.01]，差异有统计学意义；当BIU-87细胞转染B7-H4过表达质粒后，B7-H4过表达组BIU-87细胞侵袭能力(338.672±10.663)明显高于对照组(43.732±6.847， F＝15.542， P<0.01)；BIU-87细胞转染B7-H4过表达质粒后，N-cadherin表达量(1.876±0.212)明显高于对照组(0.375±0.072， F＝8.436， P<0.01)，而E-cadherin的表达量(0.287±0.064)明显少于对照组(2.267±0.118， F＝9.785， P<0.01)。 结论:siRNA靶向干扰B7-H4后抑制膀胱尿路上皮癌细胞增殖、侵袭及EMT。

目的:探讨胰高糖素样肽-1（GLP-1）对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）状态下生长分化因子15（GDF15）表达的影响。方法:共对25例NAFLD合并2型糖尿病患者26周不同药物治疗后（利拉鲁肽组9例、西格列汀组8例、甘精胰岛素组8例）进行分析。收集治疗前后体重、体重指数（BMI）及血清GDF15水平，通过磁共振成像-质子密度脂肪含量测量肝内脂肪含量（IHL）。8周龄雄性C57BL/6小鼠进行12周高脂饮食喂养，采用随机数字表法分为高脂饮食（HFD）组（6只）、艾塞那肽组（GLP-1组）（6只），另设正常饮食对照组（6只），干预8周后收取肝脏组织。HepG2细胞用300 μmol/L棕榈酸钠（PA）处理，并予Exendin-4（浓度分别为0、1、20、100 nmol/L）干预，另设脱脂牛血清白蛋白对照组。使用lentiCRISPRv2-sgRNA载体构建稳定敲除GDF15的HepG2细胞，空载体转染的HepG2细胞作为阴性对照。转染的细胞用300 μmol/L PA处理，并予100 nmol/L Exendin-4干预。测定血清及细胞上清中GDF15蛋白水平及肝脏组织和HepG2细胞的GDF15 mRNA水平与甘油三酯（TG）含量。采用单因素方差分析、协方差分析、Pearson相关分析等进行统计学分析。结果:在NAFLD合并糖尿病人群中，西格列汀组和甘精胰岛素组血清GDF15水平在治疗前后无明显变化。而利拉鲁肽组在26周后血清GDF15水平为（920.3±265.4）pg/ml，比治疗前的（742.2±279.0）pg/ml明显升高，差异有统计学意义（ P=0.015）；体重、BMI、IHL明显下降（ P均<0.05）。利拉鲁肽组血清GDF15改变量与IHL改变量呈负相关（ r=-0.676， P=0.045）。GLP-1显著改善高脂饮食喂养小鼠的肝脏脂质沉积及炎症状态。与HFD组相比，GLP-1组小鼠肝脏组织GDF15 mRNA明显升高。GLP-1能改善PA诱导的HepG2细胞脂质沉积，并以剂量依赖的方式上调GDF15的表达与分泌。与阴性对照组相比，敲除GDF15显著削弱了GLP-1改善细胞TG蓄积及炎症状态。 结论:GLP-1可促进肝脏GDF15的表达与分泌，并改善NAFLD肝脏脂质沉积及炎症状态。

目的:制备载雷西莫特(R848)脂质微泡(R848-MBs)，观察其增强超声成像和增效高强度聚焦超声(HIFU)消融效果，并评估其协同HIFU改善肿瘤免疫微环境的能力。方法:通过薄膜水化－机械振荡法制备R848-MBs，并检测其基本表征和安全性，考察HIFU辐照R848-MBs体外控释药物作用及其体内药物代谢和生物分布情况；观察R848-MBs增强体内外超声成像效果；将6只EMT6荷瘤小鼠随机分为HIFU组和R848-MBs＋HIFU组，每组3只，通过评估消融前后小鼠肿瘤区域的造影平均声强变化、肿瘤区域辐照后即刻超声图像灰度值变化和肿瘤TTC染色、肿瘤HE染色观察其凝固性坏死情况，验证R848-MBs增效HIFU消融的效果；然后将45只荷瘤小鼠随机分为对照组、Free R848组、HIFU组、Blank-MBs＋HIFU组、R848-MBs＋HIFU组，每组9只，治疗后第3 d随机取各组中3只小鼠处死，免疫荧光染色检测肿瘤细胞表面CRT的表达水平，流式细胞术检测淋巴结、脾脏成熟DC比例和脾脏CD8 ＋T细胞比例以评估R848-MBs协同HIFU改善肿瘤免疫微环境的能力，通过测量剩余各组小鼠( n＝6)的肿瘤体积、观察并绘制生存曲线以评估各组治疗效果。 结果:成功制备了安全性良好的载药脂质微泡R848-MBs，微泡浓度为2.58×10 9/ml，光镜和激光共聚焦显微镜下呈球形空泡，粒径为 (1.72±0.11)μm，表面电位为(－10.16±0.73)mV，经HIFU(90 W，3 s)辐照后药物累计释放率高达 (84.81±1.58)%，体内血浆中R848浓度迅速下降，治疗后24 h R848-MBs＋HIFU组肿瘤组织中的药物浓度高于R848组 ( P<0.01)；体内外R848-MBs在造影模式下超声显像明显增强；同时，载药微泡还能显著增效HIFU消融效果，R848MBs＋HIFU组小鼠消融前后肿瘤区域的造影平均声强变化大于R848组 ( P<0.05)，HIFU联合R848-MBs组即刻超声灰度值变化(46.34±3.21)显著大于单纯HIFU组(10.67±1.53)，差异有统计学意义 ( P<0.000 1)，肿瘤HE染色、TTC染色可观察到凝固性坏死；体内疗效结果显示R848MBs＋HIFU组具有最强的治疗效果，R848-MBs联合HIFU治疗相较于静脉注射游离R848治疗可显著延长小鼠存活时间 ( P<0.01)。此外，免疫荧光染色和流式结果显示R848-MBs联合HIFU组肿瘤组织表面CRT表达水平上升，肿瘤引流淋巴结 [(58.53±1.04)%]显著高于单纯HIFU组[(37.56±2.13)%， P<0.001]，脾成熟DC比例[(70.65±1.91)%]显著高于单纯HIFU组[(36.46±3.89)%， P<0.001]，脾CD8 ＋T细胞比例[(27.46±3.04)%]明显高于单纯HIFU组[(18.69±0.29)%， P<0.01]。 结论:载药脂质微泡R848-MBs不仅能被HIFU控释，还能增效HIFU消融，并具有良好的协同刺激肿瘤特异性免疫效应。

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-29a-5p在心肌梗死后心室重塑心肌纤维化中的作用，探讨miR-29a-5p通过靶基因Endoglin调控心肌梗死后心肌纤维化的作用机制。方法:选取2019年1月至2019年10月在郑州大学第二附属医院收治的30例心肌梗死患者和20例非急性冠脉综合征的患者，取血液标本，分别进行血清miR-29a-5p和NTPRO-脑钠肽(BNP)的检测。体内实验，建立小鼠心肌梗死模型，尾静脉分别注射miR-29a-5p mimics和阴性对照试剂。4周后处死小鼠，取部分心肌组织用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别对miR-29a-5p、Endoglin、BNP进行检测。体外实验，处死1日龄小鼠，分离获得心肌成纤维细胞并进行培养。将培养的细胞用脂质体2000对细胞进行转染miR-29a-5p mimics和阴性对照试剂，转染后加入50 μmol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)持续48 h。用图像J软件检测各组成纤维细胞的表面积。另取细胞用miR-29a-5p mimics或antagomir，pRL-TK-endoglin-3’端非编码区(3’UTR)载体，pGL3-basic质粒进行共转染。转染48 h，获得细胞，用双荧光素酶报告试验系统检测细胞相对荧光素酶活性，并用Real-time PCR和Western blot分别检测Endoglin在各组的表达。采用单因素方差分析和LSD检验。结果:急性心肌梗死(AMI)患者血清中miR-29a-5p含量[(3.57±0.53) ng/ml]明显降低( F＝935.899， P<0.01)，NTPRO-BNP含量明显升高[(9.47±5.06) ng/ml， F＝65.440， P<0.01]。小鼠MI组miR-29a-5p表达水平明显降低(0.51±0.12， t＝4.315， P<0.01)，在AngⅡ诱导的心肌纤维化模型中同样发现miR-29a-5p的表达水平明显降低(0.65±0.26， t＝4.511， P<0.01)。miR-29a-5p mimics处理心肌成纤维细胞中Endoglin蛋白含量和mRNA表达水平降低(0.49±0.09， t＝352.312， P<0.01)，在miR-29a-5p antagomir处理心肌成纤维细胞中Endoglin蛋白含量和mRNA表达水平升高(2.15±0.14， t＝7.814， P<0.05)。 结论:miR-29a-5p是心肌纤维化的重要调节因子。

目的:利用生物信息学分析方法，筛选出原位肝癌和转移灶中的差异基因及其参与的代谢通路，寻找肝癌转移治疗新的代谢靶点。方法:从基因表达汇编数据库(GEO)中下载编号为GSE40367的肝癌原发和转移基因表达谱数据。筛选出差异基因后，对差异基因进行基因本体论(GO)功能富集和京都百科全书基因和基因组(KEGG)通路分析。利用STRING数据库和cytoscape软件分析差异基因间的蛋白相互作用。通过文献检索获得肝癌转移中代谢组的变化，对差异基因和代谢物用MetaboAnalyst 4.0进行联合分析。利用Kaplan-Meier生存曲线在线对关键基因进行生存分析。结果:从GSE40367中共筛选出564个差异基因，相比于原位肿瘤，转移癌中上调基因287个，下调基因277个。差异基因GO功能富集在一元羧酸代谢、脂肪酸代谢和脂质转运等过程。KEGG主要富集在胆汁分泌、ABC转运蛋白、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢以及糖异生等通路。联合分析表明，主要相关代谢通路是烟酸和烟酰胺代谢、苯丙氨酸代谢、精氨酸生物合成和糖酵解或糖异生等。对关键基因的生存分析发现， CTH基因低表达可能与肝癌不良预后相关， PCK1、 AOX1基因的高表达可能与肝癌不良预后相关。 结论:利用生物信息学分析揭示了与肝癌转移相关的代谢通路及通路中基因和代谢物的变化，提示了肝癌转移发生的分子机制，为肝癌转移治疗提供了新的代谢靶点。

目的:制备pH敏感脂质体，避免溶酶体对单磷酸脂质A(monophosphoryl lipid A，MPLA)的降解，提高MPLA的利用率。方法:以DOPE、CHEMS为载体材料，采用薄膜分散法制备pH敏感脂质体。应用动态光散射仪测定脂质体的粒径及Zeta电位，透射电镜观察不同pH值条件下pH敏感脂质体的外观形态，应用流式细胞术评价THP-1、DC2.4细胞对脂质体的吞噬效果，激光共聚焦显微镜下观察脂质体与溶酶体的共定位情况。以乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)为模式抗原，配伍MPLA pH敏感脂质体免疫BALB/c小鼠，ELISA定量检测血清乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)水平，ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数(spot forming cells, SFCs)。结果:制备的pH敏感脂质体的平均粒径为(90.90±1.13) nm，多分散指数(polydispersity index, PDI)为0.076±0.013，Zeta电位为(－27.900±0.666) mV，随着溶液的pH值减小粒径明显增大，呈现不规则形态，具备显著的pH敏感性。THP-1细胞吞噬pH敏感荧光脂质体的吞噬率为10.40%，DC2.4细胞的吞噬率为12.40%，吞噬荧光脂质体的吞噬率分别为1.09%和0.28%。激光共聚焦显微镜观察到pH敏感荧光脂质体被THP-1细胞吞噬后，存在于细胞质中，而荧光脂质体存在于溶酶体中，MPLA pH敏感脂质体与MPLA脂质体比较可以显著提高小鼠细胞免疫应答水平，MPLA pH敏感脂质体组的IFN-γ和IL-2 SFCs水平均显著高于MPLA脂质体组( P<0.01)和无佐剂组( P<0.001)。 结论:pH敏感脂质体递送系统可以提高MPLA的利用率，使MPLA更好地发挥佐剂作用。