目的:探讨新生儿出生时不同缺氧程度下脐血中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）的水平以及其与缺氧器官（肝脏、肾脏、心脏）受损的关系。方法:前瞻性选择2022年4~10月湖南妇女儿童医院产科分娩的所有新生儿为研究对象，根据宫内/产程中缺氧情况分为健康对照组、缺氧无窒息组、缺氧窒息组。所有新生儿断脐后均采集脐动脉血检测脐血血气及NGAL水平，生后24~48 h完善肝肾功能、心肌酶检测，分析脐血NGAL水平与各检测指标间的关系。结果:共纳入161例新生儿，健康对照组91例，缺氧无窒息组49例，缺氧窒息组21例。缺氧窒息组脐血NGAL水平高于缺氧无窒息组和健康对照组［（1.81±0.71）ng/ml比（1.22±0.53）ng/ml、（0.88±0.47）ng/ml］，缺氧无窒息组高于健康对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。脐血NGAL水平与新生儿性别、胎龄、出生体重、母亲年龄、体重指数、肌酸激酶同工酶MB均无显著相关性（ P>0.05），与Apgar评分、脐血血气pH、BE值存在较强负相关性（ r<-0.3， P<0.05），与乳酸、谷丙转氨酶、肌酐存在较强正相关性（ r>0.3， P<0.05）。受试者工作特征曲线分析显示，以谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮、肌酸激酶同工酶MB联合作为新生儿肝脏、肾脏、心脏受损实验室标准，当NGAL水平截断值为1.07 ng/ml 时，其敏感度和特异度分别为84.3%、60.3%。 结论:脐血NGAL水平在新生儿出生时随着缺氧加重有升高趋势，可能与缺氧后器官（肝脏、肾脏、心脏）受损相关。

目的:制备pH敏感脂质体，避免溶酶体对单磷酸脂质A(monophosphoryl lipid A，MPLA)的降解，提高MPLA的利用率。方法:以DOPE、CHEMS为载体材料，采用薄膜分散法制备pH敏感脂质体。应用动态光散射仪测定脂质体的粒径及Zeta电位，透射电镜观察不同pH值条件下pH敏感脂质体的外观形态，应用流式细胞术评价THP-1、DC2.4细胞对脂质体的吞噬效果，激光共聚焦显微镜下观察脂质体与溶酶体的共定位情况。以乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)为模式抗原，配伍MPLA pH敏感脂质体免疫BALB/c小鼠，ELISA定量检测血清乙型肝炎表面抗体(anti-HBs)水平，ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数(spot forming cells, SFCs)。结果:制备的pH敏感脂质体的平均粒径为(90.90±1.13) nm，多分散指数(polydispersity index, PDI)为0.076±0.013，Zeta电位为(－27.900±0.666) mV，随着溶液的pH值减小粒径明显增大，呈现不规则形态，具备显著的pH敏感性。THP-1细胞吞噬pH敏感荧光脂质体的吞噬率为10.40%，DC2.4细胞的吞噬率为12.40%，吞噬荧光脂质体的吞噬率分别为1.09%和0.28%。激光共聚焦显微镜观察到pH敏感荧光脂质体被THP-1细胞吞噬后，存在于细胞质中，而荧光脂质体存在于溶酶体中，MPLA pH敏感脂质体与MPLA脂质体比较可以显著提高小鼠细胞免疫应答水平，MPLA pH敏感脂质体组的IFN-γ和IL-2 SFCs水平均显著高于MPLA脂质体组( P<0.01)和无佐剂组( P<0.001)。 结论:pH敏感脂质体递送系统可以提高MPLA的利用率，使MPLA更好地发挥佐剂作用。

目的:找到复方莪术油脂质体凝胶(zedoary turmeric oil compound liposomes gel,ZTOC-LG)的最佳制备工艺并进行体外透皮性能研究及其稳定性考察.方法:采用乙醇注入法制备复方莪术油脂质体(zedoary turmeric oil compound liposomes,ZTOC-L),再以卡波姆-940为基质制备脂质体凝胶剂,通过单因素实验和正交实验,以脂质体凝胶剂的成型性、光泽度、均匀度、黏度、pH、涂展性、稳定性等组成的综合评分为评价指标,优选ZTOC-LG的制备工艺.采用Franz扩散池比较ZTOC-LG和普通凝胶的指标物质经皮渗透性和皮肤滞留量.通过温度、光照、湿度实验对ZTOC-LG的稳定性进行了考察.结果:最优基质处方为卡波姆0.2g,甘油3.5g,三乙醇胺0.1g.体外透皮实验表明,ZTOC-LG中的吉马酮和维A酸的24 h累积渗透量和渗透速率均小于普通凝胶,皮肤滞留量均大于普通凝胶.稳定性实验表明ZTOC-LG对温度和光照敏感,对湿度不敏感.结论:该脂质体凝胶剂的制备工艺简单可行,质量可控,且能提高药物在局部皮肤中的滞留量从而达到长效缓释的作用.

目的 制备D-α-生育酚-聚(2-乙基-2-(噁)唑啉)琥珀酸酯[D-α-tocopheryl poly(2-ethyl-2-oxazoline)succinate,TPOS]修饰小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)脂质复合物(TPOS-L/siRNA).方法 以普通siRNA脂质复合物(CLs/siRNA)和PEG修饰CLs/siRNA (PEG-L/siRNA)为对照,对TPOS-L/siRNA的包封率、形态、稳定性、体外释放、细胞摄取等进行评价.结果 根据正负电荷的静电吸引作用通过直接混合方法等体积混合空白CLs和siRNA,得到CLs/siRNA.CLs/siRNA具有脂质双分子层结构,包封率为(86.68±1.41)％,粒径小于200 nm.TPOS或PEG-DSPE修饰后,对CLs/siRNA包封率和粒径基本无影响,而且均能赋予脂质复合物良好的稳定性;同时TPOS-L/siRNA具有较好的pH敏感性,能够响应微酸环境,细胞摄取明显增强.结论 TPOS能够构建良好的siRNA载体,并能增加该纳米载体的稳定性和pH敏感性.

多肽修饰的pH敏感脂质体作为药物或核酸的载体可以主动靶向肿瘤部位,使抗肿瘤药物或核酸在特定区域释放,降低药物对正常组织或细胞的毒副作用、提高药物/核酸的治疗效果.笔者主要从多肽修饰的pH敏感脂质体的释药机制、修饰方式和应用等方面进行综述,为多肽修饰的pH敏感脂质体的制备及抗肿瘤药物载体设计方面的研究提供相应参考.

背景:顺铂具有很高的抗肿瘤活性,但严重的不良反应限制了其临床应用.脂质体给药系统可通过被动和主动靶向策略,避免其对正常细胞的毒性,增强肿瘤细胞内的药物浓度.目的:综述长循环pH敏感顺铂脂质体的制备及应用研究进展.方法:以“长循环pH敏感顺铂脂质体;纳米载体;肿瘤治疗;生物毒性”或“long-circulating;pH-sensitive liposomes containing cisplatin;nanocarriers;treatment of tumors;biological toxicity”为检索词,检索万方、爱思维尔数据库和PubMed数据库中关于长循环pH敏感顺铂脂质体的文章.结果与结论:目前多采用冻干再水化法和逆向蒸发法制备长循环pH敏感顺铂脂质体,其中逆向蒸发法已被证明是最适合的方法,因为其制备的脂质体载体粒径小,可形成纯化的长循环pH敏感顺铂脂质体最终产物.长循环pH敏感顺铂脂质体改进了顺铂的药代动力学,减少了其生物毒性,且具有肿瘤细胞局部定位特性.在胰腺肿瘤小鼠模型实验中,长循环pH敏感顺铂脂质体给药系统与以往传统顺铂静脉给药方法相比具有明显优势,表明这种纳米载体给药系统在未来抗肿瘤治疗应用中具有极佳的前景.

目的:制备叶酸壳聚糖姜黄素pH敏感脂质体(FA-CS-Cur-pH-Lip),考察其理化性质及靶向性.方法:首先制得叶酸偶联壳聚糖(FA-CS),通过离子交联法使其包覆姜黄素pH敏感脂质体(Cur-pH-Lip)制得FA-CS-Cur-pH-Lip.考察其包封率、平均粒径、分散度、Zeta电位、形态及体外释药特性.通过MTT法和细胞摄取实验验证其靶向性.结果:制备的FA-CS-Cur-pH-Lip电镜下呈球形或近球形,平均粒径347.6 nm,多分散系数(PDI) 0.170,Zeta电位为37.9 mV,包封率为95.6％.FA-CS-Cur-pH-Lip在PBS(pH 7.4和5.5)释放介质中48 h的Cur累积释放率分别为58.14％和96％,表现出很强的pH敏感性能.FA-CS-Cur-pH-Lip对MCF-7细胞和A549细胞增殖抑制作用强,且具有明显的叶酸受体靶向性.结论:本研究成功制得具有主动靶向和pH敏感特性的FA-CS-Cur-pH-Lip,为进一步研究其体内抗肿瘤作用奠定了基础.

制备透明质酸(HA)和细胞穿膜肽(R6H4-SA)共修饰的青蒿琥酯纳米结构脂质载体(HA-R6H4-NLC/ART)用于抗肿瘤治疗,对所得HA-R6H4-NLC/ART进行理化性质表征及体外药物释放评价,并进行肝癌HepG2细胞摄取及细胞毒性研究.结果表明,HA-R6H4-NLC/ART外观呈类球状,平均粒径集中在160 nm左右.体外释放实验表明,该递药系统具有缓释特性.细胞结果显示,在微酸性环境中,pH敏感性穿膜肽R6H4-SA介导细胞摄取纳米粒能力显著高于非敏感性穿膜肽R8-SA.同时,HA-R6H4-NLC/ART对HepG2细胞具有靶向作用,HA受体饱和实验表明,HA-R6H4-NLC/ART是通过细胞表面HA受体的介导而胞吞.HA与R6H4-SA共修饰后的HA-R6H4-NLC/ART与未修饰或R6H4-SA单修饰组相比,在微酸性环境和透明质酸酶降解条件下,细胞摄取能力显著提高,并具有更强的抗肿瘤效果.以上结果表明,透明质酸和细胞穿膜肽R6H4-SA共修饰的载青蒿琥酯纳米结构脂质载体,能够有效识别并穿透肿瘤细胞膜进入细胞,是一种潜在高效的抗肿瘤药物靶向给药系统.

目的:建立测定米索硝唑pH敏感脂质体中主成分含量的方法.方法:采用金属离子沉淀法(以ZnCl2为金属离子沉淀剂)预处理除去米索硝唑pH敏感脂质体中的辅料磷脂酰乙醇胺;采用紫外分光光度法(UV)测定其中主成分的含量(检测波长为322 nm),并将测定结果与高效液相色谱法(HPLC)进行比较[色谱柱为Hypersil C18,流动相为甲醇-水(20:80,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm,柱温为30℃,进样量为20μL].结果:两种方法检测米索硝唑的质量浓度线性范围分别为0.96～30.72μg/mL(r=0.9996)、0.48～4.80μg/mL(r=0.9995);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2％;回收率分别为97.23％～102.33％(RSD=1.05％,n=9)、97.35％～99.75％(RSD=1.15％,n=9);含量测定结果分别为99.86％、100.16％、100.32％和99.95％、99.98％、100.05％.结论:UV法结合金属离子沉淀法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性好,可用于米索硝唑pH敏感脂质体中主成分的含量测定,其结果与HPLC法含量测定结果一致.

目的对抗肿瘤药物雷替曲塞进行关键质量属性的研究,为该药pH敏感脂质体的研究提供实验依据.方法建立雷替曲塞高效液相色谱(HPLC)含量测定方法和有关物质测定方法,通过破坏性实验和水溶液中稳定性实验考察药物稳定性,摇瓶法测定平衡溶解度和表观油水分配系数等.结果建立了该药HPLC含量和有关物质测定方法,2～20μg/ml浓度范围内线性关系良好(A=87354c-1878.4,r=0.9999);药物在碱、高温和光照条件下稳定,对酸和氧化条件较为敏感,48 h内在pH值6.5～ 9.0 NaH2PO4水溶液中可稳定存在;平衡溶解度和油水分配系数结果显示该药是水溶性药物.结论油水分配系数和平衡溶解度提示可采用逆相蒸发法或主动载药法等制备雷替曲塞脂质体,以获得较高包封率.