目的 探讨鱼腥草素钠对高血压大鼠模型血压的影响及其作用机制.方法 选择8周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为对照组(n=11)、高血压组(n=13)和鱼腥草素钠组(n=13).对照组采用普通饲料喂养,高血压组和鱼腥草素钠组均采用高脂饲料喂养,建立高血压模型.测量大鼠基线血压,每周监测1次大鼠体重,从第5周起监测大鼠尾动脉血压,第9周起鱼腥草素钠组大鼠采用鱼腥草素钠灌胃,对照组及高血压组大鼠采用等量生理盐水灌胃.第13周后检测3组大鼠血浆炎症因子[白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平及血脂、血糖、胰岛素浓度.结果 对照组收缩压和鱼腥草素钠组相比,差异无统计学意义(P>0.05),但均低于高血压组(P<0.05);鱼腥草素钠组和高血压组血浆总胆固醇水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);鱼腥草素钠组IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显低于高血压组,差异有统计学意义(P<0.05),而与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 鱼腥草素钠干预后,可明显缓解炎症,降低高脂喂食大鼠导致的高血压.

目的:分析比较Nd∶YAP激光与三联抗生素糊剂在年轻恒牙牙髓血运重建术中的消毒效果.方法:选取2018年2月-2020年2月收治的112例年轻恒牙牙髓坏死或根尖周炎患者,随机分成对照组和观察组各56例,对照组采用三联抗生素糊剂方式封药消毒,观察组采用Nd∶YAP激光照射消毒,消毒完毕后均行牙髓血运重建术,随访2年.比较两组患者治疗后2年临床疗效、不良反应发生率、牙骨质样组织沉积率,分析两组患者治疗前及治疗后2年牙根长度、牙冠根比和牙根管壁厚度,并对比两组患者治疗前和治疗后6个月龈沟液中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)和基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)水平.结果:治疗后2年,两组治疗总有效率比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后2年,两组不良反应发生率差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后2年,两组上述指标较治疗前均有上升(P＜0.05),但组间差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后2年,对照组患者牙骨质样组织沉积率为(64.80±8.11)%,观察组患者牙骨质样组织沉积率为(65.64±7.42)%,组间比较差异无统计学意义(t=0.572,P=0.569).治疗后6个月,两组龈沟液中VEGF、bFGF、MMP-2水平较治疗前均有上升(P＜0.05),但组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:相较于三联抗生素糊剂封药消毒,年轻恒牙标准牙髓血运重建术中采用Nd∶YAP激光照射消毒可达到同样的临床疗效,可能通过影响牙组织中VEGF、bFGF和MMP-2表达,诱导牙根继续发育,值得临床验证.

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHE Ⅱ)支气管肺泡灌洗液(BALF)体重指数(BMI)血尿素氮(BUN)美国临床和实验室标准化协会(CLSI)碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)脑脊液(CSF)弥散性血管内凝血(DIC)酶联免疫吸附测定(ELISA)红细胞沉降率(ESR)医院获得性肺炎(HAP)乙型肝炎病毒(HBV)人类免疫缺陷病毒(HIV)美国感染病学会(IDSA)基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)最低抑菌浓度(MIC)甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)甲氧西林耐药表皮葡萄球菌(MRSE)甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)聚合酶链反应(PCR)药效学(PD)青霉素中介肺炎链球菌(PISP)血小板(PLT)结核菌素试验(PPD)青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)受试者工作特征(ROC)总胆红素(TB)呼吸机相关性肺炎(VAP)白细胞(WBC)

目的 构建稳定表达Cas9蛋白的工具细胞,并利用短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)编辑技术改造1型单纯疱疹病毒(HSV-1),获得ICP34.5基因敲除的oHSV-1/Ecfp重组病毒.方法 利用慢病毒包装体系,将包装Cas9表达质粒的病毒感染HEK293T细胞,然后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达Cas9蛋白的293T-Cas9细胞株,通过聚合酶链式反应(PCR)及蛋白质免疫印迹技术检测Cas9基因及蛋白表达情况;利用分子克隆技术构建HSV-1病毒ICP34.5基因敲除的基因编辑质粒(pU6-Ecfp);pU6-Ecfp转染293T-Cas9细胞后感染野生型HSV-1病毒,在胞内通过CRISPR/Cas9技术敲除HSV-1病毒中ICP34.5基因,再利用增强型青色荧光(Ecfp)示踪及极限稀释法进行病毒富集纯化,通过PCR法进行oHSV-1/Ecfp病毒鉴定.结果 PCR扩增、核酸电泳及蛋白质免疫印迹技术结果显示,细胞株293T-Cas9高转录Cas9基因及高表达Cas9蛋白;通过PCR鉴定及荧光示踪结果显示,基因编辑质粒pU6-Ecfp构建成功;Ecfp荧光示踪、PCR扩增及核酸电泳结果显示,Ecfp成功插入ICP34.5基因敲除位点,获得oHSV-1/Ecfp重组病毒.结论 稳定表达Cas9蛋白的293T-Cas9细胞可作为CRISPR/Cas9基因编辑的工具细胞,构建的HSV-1/Ecfp病毒实现了ICP34.5基因敲除及Ecfp示踪蛋白的敲入.

近年来,随着各种抗病毒药物的使用及乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)疫苗和母婴阻断的广泛普及,慢性乙型肝炎(CHB)的防治取得了显著进步.但数据显示,2019年全球一般人群乙肝病毒表面抗原(HBsAg)流行率为3.8％,约有150万新发HBV感染者,2.96亿慢性感染者,82万人死于HBV感染相关疾病[1],HBV感染仍然是全球范围内威胁人类健康的重大公共卫生问题.

目的 探讨艾滋病(AIDS)合并结核病(TB)对CD8+T淋巴细胞的影响.方法 将单纯人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者、单纯TB患者、HIV感染合并TB者各200例分别作为HIV组、TB组、HIV/TB组,分析各组血清CD8+T细胞及CD4+T细胞变化.结果 三组CD8+T细胞水平比较呈现HIV组＞HIV/TB组＞TB组,且组间差异有统计学意义(x2=128.779,P＜0.001).HIV/TB 组、HIV 组 CD8+T 细胞水平较正常水平升高(ZHIV/TB=8.343,PHIV/TB＜0.001;ZHIV=7.988,PHIV＜0.001),而TB组CD8+T细胞较正常水平明显下降(ZTB=8.682,PTB＜0.001).三组CD4+T细胞水平均较正常下降(ZHIV=11.088,PHIV＜0.001;ZTB=5.562,PTB＜0.001;ZHIV/TB=12.077,PHIV/TB＜0.001).按照 CD4+T 细胞计数进行分层分析发现,当 CD4+T 细胞计数≤100 cells/μL时,三组CD8+T细胞水平比较:HIV组＞TB组,HIV组＞HIV/TB组,且HIV/TB组CD8+T细胞水平较正常显著下降(Z0-100=1.604,P0-100=0.109);当CD4+T细胞≥101cells/μL时,CD8+T细胞三组比较:HIV/TB组＞TB组,HIV组＞TB组;当CD4+T细胞＞500 cells/μL,三组CD8+T细胞水平均在正常范围内.三组CD8+T细胞与CD4+T细胞变化趋势的差异分析结果提示,以HIV组为参照,随着CD4+T细胞计数的下降,TB组、HIV/TB组的CD8+T细胞均比HIV组下降趋势更明显,差异有统计学意义(斜率分别为0.344和0.216,P＜0.001).结论 随着CD4+T细胞的下降,HIV感染合并TB和TB均可导致CD8+T细胞下降,且TB的CD8+T细胞下降更加显著.

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘的效应物质及作用机制.使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分;借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及基因本体论(GO)功能分析.同时将靶点蛋白及代谢物-靶点-通路等信息导入STRING数据库,构建蛋白互作网络,明确五虎汤核心成分及关键通路.体内实验部分使用RSV联合鸡卵清蛋白(OVA)建立哮喘模型,通过肺功能、苏木精-伊红(HE)染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)法、蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法验证五虎汤对RSV诱导哮喘小鼠的干预作用.结果显示,五虎汤入血成分以黄酮类、苯丙素类、木脂素类、萜类等化合物为主,作用于儿童哮喘的核心成分有(-)-表没食子儿茶素、山柰素、异甘草素、香叶木素、桦木酸、熊果酸、瑞香素、七叶素等,钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、NOD样受体信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等是其靶点主要作用通路.体内实验结果表明,五虎汤能够改善肺功能指标,下调白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17((IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并且能够降低肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、核因子-κB亚基1(NFKB1)等蛋白的表达,减轻中性粒细胞炎症浸润及肺淤血.结果表明,五虎汤通过多组分、多靶点、多途径的协同作用干预病毒诱发哮喘,体内实验证明其能抑制NOD样受体信号通路的激活,减轻哮喘小鼠气道炎症与气道损伤.

目的:基于网络药理学探讨决明子治疗高脂血症的作用机制,并通过斑马鱼实验进行验证.方法:在中药分子机制生物信息学注释数据库(BATMAN-TCM)和中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索并筛选决明子活性成分及相关靶点,通过GeneCards、DisGeNET、在线人类孟德尔遗传数据系统(OMIM)检索得到与高脂血症有关的靶点,利用Venny 2.1.0平台获得药物与疾病的共同靶点.使用Cytoscape3.8.2绘制决明子-活性成分-作用靶点网络图,采用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,将决明子-高脂血症共同靶点通过注释、可视化和集成发现数据库(DAVID)进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.根据网络药理学研究结果,推测橙黄决明素(AO)为决明子降血脂的有效作用成分,在此基础上进行斑马鱼实验验证.以蛋黄液高脂饮食诱导斑马鱼高脂血症模型,造模后给予AO干预,验证AO治疗高脂血症的效果及作用机制.首先进行AO对高脂血症斑马鱼的毒性实验,确定AO最大给药浓度;后续观察AO对高脂血症斑马鱼总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量及肝脏组织形态学的影响;采用实时荧光定量PCR检测核心靶点mRNA在高脂血症斑马鱼中的表达.结果:共获得包括AO在内的13个决明子活性成分,决明子作用于高脂血症的潜在靶点109个,包括核心靶点肿瘤坏死因子(TNF)、白介素(IL)-1β、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)等,主要涉及IL-17信号通路、TNF信号通路、脂质和动脉粥样硬化相关作用通路等.斑马鱼验证实验结果显示:造模后斑马鱼出现明显的脂质聚积,AO可显著降低高脂血症斑马鱼组织中的TG、TC含量(P＜0.05,P＜0.01),减少肝脏组织内脂肪空泡和脂滴形成,并可显著下调核心靶点TNF-α、IL-1βmRNA表达(P＜0.01).结论:基于网络药理学获得了决明子治疗高脂血症的核心通路与靶点,并通过斑马鱼实验初步揭示AO对高脂血症的改善效果,其机制可能是通过TNF-α、IL-1β等核心靶点发挥治疗作用,旨在为后期研究AO在高脂血症中的临床应用提供参考依据.

传统腹腔镜手术通过向腹腔注入气体以创造手术视野、建立手术平台,CO2因其无色无味、无毒性、不可燃、刺激性小、导热性差、热稳定性高、方便获取、可溶于水、弥散性好等特性成为气腹首选气体,但CO2气腹可引起腹腔内压力增高、血流动力学波动、高碳酸血症、心律失常、静脉血栓、气体栓塞、肺内分流甚至肺不张等问题[1].

目的 探讨免疫细胞分化对脓毒性ARDS肺泡-毛细血管屏障损伤的影响.方法 基于转录组数据构建脓毒性ARDS的WGCNA网络,并筛选ARDS相关基因(ARDS-related genes,ARGs).基于单细胞测序数据构建脓毒性ARDS分化轨迹和细胞通讯,并筛选免疫分化相关基因(immunodifferentiation-related genes,IDRGs).Lasso 回归分析构建 ARDS 的免疫相关风险评分(risk Score,RS).ESTIMATE、CIBERSORT 和 ssGSEA 评估免疫微环境.Metascape、GSVA 和 GO 富集分析展示信号通路和生物学过程.结果 免疫细胞、成纤维细胞和内皮细胞通过24条信号通路进行细胞通讯.由DSTN、SNRPA和FGL2组成的RS在正常、单纯脓毒症和脓毒性ARDS的患者中差异表达,涉及免疫细胞、内皮细胞和成纤维细胞的分化,影响脓毒性ARDS的免疫浸润和免疫功能.脓毒性ARDS相关免疫细胞包含记忆B细胞、浆细胞、CD8+T和M0.DSTN与M0负相关(r=-0.29,P＜0.05),SNRPA 与 CD8+T 正相关(r=0.28,P＜0.05),FGL2 与记忆 B 细胞正相关(r=0.32,P＜0.05).RS组间差异表达的免疫细胞包括CD4幼稚型T细胞、CD4记忆激活T细胞、调节T细胞、γ-δ T细胞、M0、激活的树突状细胞.富集分析提示DSTN、SNRPA和FGL2的差异表达影响了免疫细胞的分化、免疫功能的激活、抗原的呈递,以及肌动蛋白丝的解聚/切断.结论 DSTN、SNRPA和FGL2通过调控免疫细胞、成纤维细胞和内皮细胞的分化,影响脓毒性ARDS的免疫性肺泡-毛细血管屏障损伤,是预测脓毒性ARDS进展的潜在标志物.