目的 研究核因子E2 相关因子2(nuclear E2-related factor 2,Nrf2)靶点及线粒体质量控制系统调控姜三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用机制.方法 用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导HUVECs建立细胞损伤模型,siRNA转染沉默Nrf2 因子的表达,将培养好的细胞分为对照组、模型组、EOSIR组、转染组、转染阴性对照组,利用蛋白质印迹法(Western-blot)及定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Nrf2 及其下游因子的蛋白及mRNA的表达;Griess法检测一氧化氮含量;酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析人内皮素(endothelin 1,ET-1)、人前列环素(prostacyclin,PGI2)的含量;线粒体质量检测实验中将细胞分为空白组、ox-LDL诱导组、低剂量EOSIR组、中剂量EOSIR组、高剂量EOSIR组、阿司匹林阳性对照组,透射电镜观察HUVECs线粒体形态;Western-blot检测线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 1,Mfn2)、线粒体动力相关蛋白(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体内膜融合蛋白(optic atro-phy 1,Opa1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferatoractivated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)及轻链3A/B蛋白(LC3A/B)、泛素结合蛋白(p62)表达.结果 EOSIR组的Nrf2 及其下游因子的表达水平、NO、PGI2 的含量较模型组均显著升高,ET-1 水平较模型组相比显著降低,转染沉默Nrf2 后,EOSIR对上述指标的改善作用被抑制;透射电镜观察线粒体形态,EOSIR干预组自噬小体数量较模型组明显减少,线粒体形态恢复正常,同时,EOSIR组显著改善了ox-LDL引起的线粒体相关蛋白表达的变化(P<0.05).结论 EOSIR可能通过激活Nrf2 靶点及调控线粒体质量控制系统发挥对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的保护作用,延缓动脉粥样硬化的进程.

目的 利用蛋白质组学寻找抑制冠心病血瘀证的关键蛋白,并基于核因子(nuclear factoer,NF)-κB炎性信号通路和内皮细胞活化模型验证关键蛋白纤维连接蛋白(fibronectin 1,Fn)对冠心病血瘀证的作用.方法 将冠心病血瘀证组患者和健康组受试者的血清进行相对定量和绝对定量的等比标记(isobaic tag for relative and absolute quantitation,ITRAQ)蛋白质组学分析,将差异蛋白进行GO和KEGG功能富集,从与冠心病密切相关的富集通路中筛选出关键蛋白Fn.利用 60 μg/mL的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)构建内皮细胞活化模型,在内皮细胞活化模型中加入 5 μg/cm2、10 μg/cm2、20 μg/cm23个浓度的血浆Fn或敲减内皮细胞来源Fn的方法进行干预.分组为空白组、模型组、对照组、FnEC-KD 组、Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组.细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测各组 NF-κB 核位移和 NF-κB 蛋白表达水平,ELISA 检测培养上清的细胞间黏附分子(intercellular cell adhesion molecule,ICAM)-1、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、前列环素 I-2(Proataglandin-I-2,PGI2)、内皮素的蛋白含量.结果 血清蛋白质组学结果显示健康组和冠心病血瘀证组存在 121 种差异蛋白,51 种血瘀证组下调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞外基质-受体相互作用途径,70 种血瘀证组上调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、血小板活化、吞噬体途径.Fn与冠心病密切相关且在血瘀证患者中下调.细胞实验发现各组NF-κB总蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较模型组NF-κB 核位移增强,ICAM-1、VCAM-1、内皮素表达上调,PGI2 分泌下调(P<0.05);与模型组比较,Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素分泌下调(P<0.05),PGI2 分泌显著上调(P<0.05);与模型组比较,FnEC-KD 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素表达含量明显降低(P<0.05),PGI2 表达明显增加(P<0.05).结论 血浆Fn抑制内皮细胞活化和功能障碍,内皮细胞来源的Fn促进内皮细胞活化和功能障碍.

目的:探讨两面神激酶2-信号传导及转录激活蛋白3(JAK2-STAT3)信号转导通路在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎发病中的作用。方法:2019年2月至11月选择21 d龄内皮素受体B(Ednrb)基因敲除小鼠(先天性巨结肠模型鼠)作为实验组(12只)，相应日龄野生型小鼠作为对照组(12只)。基因敲除小鼠(背景B6：129)由美国俄亥俄州立大学全国儿童医院捐赠，并在华中科技大学同济医学院动物实验中心培育、繁殖。收集结肠标本，依据形态将实验组小鼠结肠分为狭窄段及扩张段，对照组小鼠肠管相应分为结肠远、近段。苏木精-伊红(HE)染色法判断肠管炎症程度；酶联免疫吸附法(ELISA)进行定量分析各组结肠标本中白细胞介素(IL)-10的表达量；蛋白质印迹法(Western blot)检测各组结肠标本磷酸化两面神激酶2(p-JAK2)、JAK2、磷酸化信号传导及转录激活蛋白3(p-STAT3)、STAT3的蛋白表达水平；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测JAK2、STAT3的mRNA水平。组间比较采用 t检验。 结果:Western blot结果发现先天性巨结肠模型鼠(Ednrb －/－小鼠)狭窄段肠管JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达水平较扩张段明显升高，差异有统计学意义(狭窄段：0.791±0.108、0.438±0.059、0.327±0.028、0.858±0.091，扩张段：0.479±0.109、0.206±0.024、0.297±0.013、0.579±0.102， t＝7.074、12.679、3.428、7.096， P值均<0.05)。RT-qPCR检测显示Ednrb －/－小鼠结肠狭窄段JAK2、STAT3的mRNA表达水平高于扩张段，差异有统计学意义(狭窄段：0.427±0.042、0.272±0.044，扩张段：0.234±0.031、0.127±0.014， t＝12.820、10.836， P值均<0.05)。ELISA显示Ednrb －/－小鼠扩张段肠管的IL-10的表达量下降，而狭窄段肠管升高，差异有统计学意义(狭窄段：2.540±0.710，扩张段：1.330±0.350， t＝5.284， P<0.05)。 结论:先天性巨结肠小鼠模型扩张段炎症重，而狭窄段炎症较轻，其机制与JAK2-STAT3信号转导通路被抑制和激活有关。

目的:探讨DMSO提取的香烟尘雾颗粒(DSP)暴露对小鼠气道反应性的影响和分子机制。方法:实验性研究。将32只8周龄SPF级Balb/c小鼠随机分为对照组、低剂量DSP (0.75 ml/L)组、中剂量DSP (1.5 ml/L)组、高剂量DSP(3 ml/L)组。每组小鼠自鼻腔滴入含0.3% DMSO无菌生理盐水或含不同浓度的DSP溶液(每只20 μl)，连续处理7 d。Myograph测定ET A受体激动剂ET-1和ET B受体激动剂蝰蛇毒素对气管环收缩的作用。Western blot检测气管中ET A、ET B、ERK 1/2、p-ERK 1/2、p65、p-p65的表达。 结果:与对照组相比，DSP滴鼻浓度依赖性增强蝰蛇毒素和ET-1对气管环的收缩效应，气管环浓度-收缩曲线左移。DSP滴鼻浓度依赖性增加小鼠气管ET A、ET B蛋白水平。高剂量DSP滴鼻显著升高小鼠气管p-ERK 1/2和p-p65水平。 结论:香烟尘雾颗粒可能通过激活ERK 1/2/NF-κB和上调内皮素受体表达引起气道高反应性改变。

目的:研究子痫前期胎盘中第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologue-deleted chromosome ten gene，PTEN)、Syncytin-1与母体内皮损伤、滋养细胞损伤的相关性。方法:选择2015年2月至2017年12月在南方医科大学附属小榄医院诊断为子痫前期并分娩的46例患者及同期正常分娩的的80名孕妇，分娩前留取母体外周血并测定内皮损伤标志物的含量，分娩后留取胎盘并测定PTEN、Syncytin-1、细胞凋亡基因的表达量以及氧化应激标志物的含量。结果:子痫前期胎盘组织中PTEN的mRNA表达量显著高于正常胎盘组织( t＝32.797、 P<0.000)，Syncytin-1的mRNA表达量显著低于正常胎盘组织( t＝28.506、 P<0.000)；子痫前期患者母体血液循环中内皮素-1(endothelin-1，ET-1)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble fms-like tyrosine kinase receptor 1，sFlt-1)的含量显著高于正常妊娠孕妇( t值分别为39.884、40.243、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.674、0.596， P分别为0.004、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.615、－0.637， P分别为0.009、0.008)，一氧化氮(nitric oxide ，NO)、前列腺素I 2(prostaglandin I2，PGI2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)、胎盘生长因子(Placental growth factor ，PLGF)的含量显著低于正常妊娠孕妇( t值分别为30.944、27.404、32.827、26.644、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.648、－0.592、－0.537、－0.613， P分别为0.006、0.009、0.013、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.632、0.572、0.537、0.654， P值分别为0.010、0.013、0.015、0.009)；子痫前期胎盘组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-reduced oxidase 4，NOX4)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-hydroxydeoxyguanosine，8-OHdG)的含量以及自杀相关因子(factors associated suicide ，Fas)、Fas配体(fas ligand，FasL)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 ，GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein ，CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteine-containing aspartic acid proteolytic enzymes-3，Caspase-3)的mRNA表达量显著高于正常胎盘组织( t值分别为27.714、27.704、26.786、22.622、27.964、25.496、25.893、30.837、28.975、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.703、0.651、0.593、0.628、0.449、0.552、0.612、0.569、0.502， P值分别为0.003、0.007、0.004、0.006、0.016、0.010、0.006、0.012、0.018)，gn Syncytin-1的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.615、－0.714、－0.577、－0.548、－0.512、－0.585、－0.619、－0.495、－0.662， P值分别为0.009、0.001、0.013、0.015、0.018、0.011、0.009、0.023、0.003)，Peroxiredoxin-Ⅱ蛋白(PrxⅡ)、PrxⅢ、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)的含量以及B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)的mRNA表达量显著低于正常胎盘组织( t值分别为26.115、23.502、21.439、17.194、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.713、－0.657、－0.591、－0.642， P值分别为<0.001、0.006、0.009、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.562、0.711、0.682、0.608， P值分别为0.013、<0.001、0.002、0.008)。 结论:子痫前期胎盘中PTEN的高表达以及Syncytin-1的低表达能够加重母体内皮损伤以及胎盘滋养细胞损伤。

血管内皮细胞分泌的内皮素-1(endothelin-1,ET-1)因具有强缩血管效应,最初被认为是高血压致病因子;而后发现在肾内合成和分泌的ET-1具有利尿和利钠作用,也被认为是抗高血压因子.ET-1通过刺激两种G蛋白偶联受体—内皮素受体A、内皮素受体B调控电解质平衡.本文就ET-1对肾脏NaCl重吸收的调节及其机制的研究进展作一综述,以阐述其在血压调节过程中的重要性.

目的 基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究尼可地尔在急性心肌梗死(AMI)患者急诊经皮冠脉介入术(PCI)中的应用效果.方法 选择2020年4月至2022年12月胜利油田中心医院急诊科收治的106例AMI患者,均接受急诊PCI治疗,根据组间基线资料匹配的原则,采用随机数字表法分为联合组和对照组,各53例.对照组接受抗凝调脂治疗,联合组接受抗凝调脂及尼可地尔治疗,两组均治疗1个月,并随访6个月.比较两组治疗前、治疗后6个月心肌损伤相关指标、血管内皮功能、心功能、TLR4/NF-κB信号通路,治疗后6个月主要不良心血管事件(MACE).结果 较治疗前,治疗后6个月两组血清心肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶及N-末端脑钠肽前体、内皮素-1水平,左心室舒张末期容积及左心室收缩末期容积,TLR4、NF-κB mRNA,TLR4蛋白、NF-κB蛋白水平均明显降低,但联合组各项指标水平均低于对照组(P＜0.05).较治疗前,治疗后6个月两组左心室射血分数、血清一氧化氮、肱动脉血流介导的舒张功能水平均显著升高,但联合组各项指标水平均高于对照组(P＜0.05).治疗后6个月联合组患者左心室重塑低于对照组(P＜0.05);两组患者的MACE发生率比较接近,组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 尼可地尔在AMI患者急诊PCI中应用,可提高心功能,减轻心肌损伤,改善血管内皮功能,可调节TLR4/NF-κB信号通路,安全性良好.

目的 观察宽胸祛痹汤辅助治疗对经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)后心绞痛患者血管内皮功能及血清血管性血友病因子裂解酶(von willebrand factor-cleaving protease,ADAMTS-13)、血浆鸢尾素(Iri-sin)水平的影响.方法 选取常州市中医医院2020年1月—2022年3月收治的80例PCI后心绞痛患者为对象,采用奇偶数分组法分为两组.对照组39例给予常规西药治疗,观察组41例给予宽胸祛痹汤联合常规西医治疗.检测两组ADAMTS-13、Irisin、P选择素(P selectin,CD62p)、肌钙蛋白1(cardiac troponin,cTnl)等相关因子的水平,评估两组中医症状积分、西雅图心绞痛量表(Seattle Angina Questionnaiire,SAQ)的差异,统计两组硝酸甘油减停率、总有效率.结果 两组治疗前中医症状积分、SAQ评分比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与治疗前比,两组治疗后中医症状积分下降,且观察组更低(P＜0.05);两组治疗后SAQ评分升高,且观察组更高(P＜0.05).两组治疗前相关因子比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与治疗前比,两组治疗后高敏-C反应蛋白(High sensitivity-C reactive protein,hs-CRP)、CD62p、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、cTnl、糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(Glycoprotein Ⅱ b/Ⅲ a,GP Ⅱ b/Ⅲ a)受体复合物下降,且观察组更低(P＜0.05),两组治疗后一氧化氮(Nitric oxide,NO)、ADAMTS-13、Irisin升高,且观察组更高(P＜0.05).观察组硝酸甘油减停率和总有效率分别为92.68％(38/41)和90.24％(37/41),高于对照组的76.92％(30/39)和71.79％(28/39),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 宽胸祛痹汤联合西医可改善PCI后心绞痛患者血管内皮功能,增加ADAMTS-13、Irisin的表达,提高疗效.

目的 评价添加益生菌的肠内营养支持治疗颈动脉狭窄致脑卒中患者的临床效果.方法 选取2022年1月至2023年7月于河南省第二人民医院就诊的86例脑卒中患者作为研究对象,按随机数表法分为观察组和对照组各43例,对照组患者给予常规肠内营养支持,观察组患者在上述基础上添加益生菌,共治疗14 d.比较两组患者治疗前后的病情恢复情况[美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)、简化巴氏指数量表(BI)]、营养指标[转铁蛋白(TF)、血红蛋白(Hb)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)]、肠道屏障功能[内皮素(ET)、二胺氧化酶(DAO)、血乳酸、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)]、免疫功能[免疫球蛋白A(IgA)、IgG、成熟T淋巴细胞(CD3+)、诱导性T细胞(CD4+)]和Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路,同时比较两组患者治疗期间的并发症发生情况.结果 治疗后,观察组患者的NIHSS评分为(10.14±2.03)分,明显低于对照组的(13.38±2.28)分,BI评分为(67.55±7.33)分,明显高于对照组的(53.80±6.76)分,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的TLR4、NF-κB、DAO、ET、血乳酸、I-FABP分别为(2.31±0.54)ng/mL、(104.12±8.76)ng/mL、(13.21±2.14)U/L、(70.55±15.11)ng/L、(1.74±0.56)mg/L、(1.41±0.37)μg/L,明显低于对照组的(3.76±0.67)ng/mL、(128.96±10.19)ng/mL、(16.88±3.37)U/L、(94.36±17.96)ng/L、(2.68±0.73)mg/L、(1.72±0.42)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的Hb、Alb、TP、TF、CD3+、CD4+、IgA、IgG分别为(132.87±15.88)g/L、(37.65±3.66)g/L、(69.77±6.52)g/L、(62.38±6.22)g/L、(70.14±5.11)%、(37.86±4.32)%、(1.82±0.38)g/L、(1.58±0.42)g/L,明显高于对照组的(120.74±12.28)g/L、(32.89±3.05)g/L、(61.75±5.86)g/L、(54.88±5.19)g/L、(65.73±4.78)%、(33.28±3.83)%、(1.45±0.30)g/L、(1.26±0.37)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者的并发症总发生率为6.98%,明显低于对照组的23.26%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 添加益生菌的肠内营养支持可改善颈动脉狭窄致脑卒中患者神经功能、营养状态,提升患者生活自理能力、免疫力,促进肠道屏障功能恢复,调节TLR4/NF-κB信号通路,降低并发症发生风险.

目的 研究基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)小鼠心肌保护作用.方法 50只6周的雄性SD小鼠中取10只作正常对照组,其余小鼠给予高脂饮食建立CHD模型.采用随机数字表法将40只模型小鼠分为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组各10只.黄连解毒汤低、中、高剂量组每日分别以10、20、40 g/kg剂量进行灌胃,每日1次,持续6周;正常组、模型组每日给予等量蒸馏水灌胃.干预后采用生化法检测各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平,酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、内皮素水平;采用苏木精-伊红染色法观察小鼠心肌细胞病理形态,蛋白质印迹法检测心肌组织中TLR4、NF-κB、NLRP3的表达.比较各组小鼠血脂、心肌组织中抗氧化相关指标和TLR4、NF-κB、NLRP3的表达.结果 模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组血脂水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);黄连解毒汤低剂量组与模型组血脂水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);黄连解毒汤中、高剂量组总胆固醇、甘油三酯、LDL水平均低于模型组,HDL水平高于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组心肌组织中SOD水平均低于对照组,丙二醛、内皮素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组SOD水平均高于模型组,丙二醛、内皮素水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组心肌纤维排列整齐,横纹清晰且细胞完整,无细胞肿胀、炎症浸润等;模型组心肌纤维排列紊乱,结构发生异常,有严重细胞肿胀、炎症浸润;黄连解毒汤低、中、高剂量组未见心肌纤维断裂,黄连解毒汤中、高剂量组细胞肿胀和炎症浸润情况优于黄连解毒汤低剂量组,黄连解毒汤高剂量组优于黄连解毒汤中剂量组.模型组、黄连解毒汤中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).且黄连解毒汤各剂量组中以上指标变化呈剂量依赖性.结论 黄连解毒汤能降低CHD小鼠血脂水平,保护心肌细胞,其能够通过下调组织TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达以调节血脂水平并改善心肌功能,且黄连解毒汤的效果随着剂量的增加而增强.