人类生殖细胞低温冷冻作为生育力保存的一种方式，在辅助生殖技术（assisted reproductive technology，ART）发展中起着重要作用，目前该技术已成为生殖医学领域的研究热点之一，并在辅助生殖实践中得到越来越广泛的应用。为提高ART的成功率，冷冻保存技术在发展中不断改进，尤其是冷冻策略的选择和冷冻保护剂的改良与优化。冷冻保存技术适用于行ART治疗或是因疾病导致的生育力下降而进行的卵母细胞、精子、胚胎冷冻保存的群体，也适用于癌症患者为保存生育力而进行的卵巢及睾丸组织冷冻保存。然而，不同的冷冻方法对于不同生殖细胞类型的冷冻效果并不一致，且目前不同生殖细胞冷冻效果的评价尚缺乏合理有效的标准。本文综述了人类生殖细胞低温冷冻保存技术的发展现状及应用，并探讨了低温保存未来的发展方向。

目的:探索使用新型冻存剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性。方法:标本来源于2022年1至3月在北京大学第三医院成形外科进行吸脂术的健康成年女性，将获得的脂肪组织离心后随机分为9组，分别采用不同的冻存液[A组、B组、二甲基亚砜(DMSO)组]及冻存时长(1、2、3个月组)于液氮中冻存。A组冻存液组分为右旋糖苷40(DEX)＋氨基酸＋维生素＋无机盐，B组冻存液组分为DMSO＋DEX，DMSO组采用传统冻存液，组分及配比为10% DMSO＋20%胎牛血清(FBS)＋70% DMEM-12。采用5 ml冻存管，脂肪∶冻存液＝3∶2，每组冻存6管。脂肪组织复温后，采用HE染色观察组织学形态，采用免疫组化染色进行脂滴包被蛋白(Perilipin)定量分析，通过阳性细胞数量与总细胞数量的比值计算Perilipin阳性率；采用CCK-8法测定脂肪细胞活性。选择健康无特定病原体级裸鼠38只，根据移植脂肪使用不同的冻存保护剂(A组、B组、DMSO组)分为3组，每组各12只，另外2只作为day 0对照组，各组脂肪冻存时间均为3个月。裸鼠腹腔麻醉后，每侧背部注射复温后的冻存脂肪各0.9 ml，分别于移植后1、2、3个月通过MRI扫描及三维软件计算脂肪组织存留率并进行组间比较；小鼠处死后取移植的脂肪组织，采用HE染色和免疫组化染色进行组织形态学观察及Perilipin定量分析。采用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析，符合正态分布的计量资料以 ± s表示，整体多组间比较采用重复测量资料的方差分析，同一时间点组间数据比较采用Tukey多重检验。 结果:在液氮中冻存1～3个月后不同冻存液组的脂肪组织形态接近正常新鲜脂肪组织，各组Perilipin阳性率差异无统计学意义( P>0.05)；CCK-8法提示冻存1个月和3个月时DMSO组脂肪细胞活性优于A组和B组( P<0.01)，冻存2个月时DMSO组和B组脂肪细胞活性优于A组( P<0.01)。动物实验中冻存脂肪移植后1～3个月体积存留率各组之间差异无统计学意义( P>0.05)，移植1～3个月后各组脂肪组织出现不同程度局部坏死伴炎症反应，Perilipin阳性率各组之间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:使用新型冻存液冻存脂肪组织的效果与传统冻存液相比未见显著差异，且避免了使用DMSO或FBS作为冻存剂对人体潜在的不良作用，理论上更加安全。

冷冻保存技术已成为细胞治疗、辅助生殖、组织工程和疫苗储存等生物医学应用的必要方法。冰晶的形成是冷冻保存的主要限制因素，并会对生物样本造成致命性损伤。二甲基亚砜(DMSO)是传统上常用的冷冻保护剂，然而考虑到DMSO自身细胞毒性和给药后对机体产生的潜在不良反应，因此寻找具有安全性和有效性的替代DMSO方法的需求逐渐增长。本文拟概述多种治疗性细胞的无DMSO保存的研究进展及面临的问题和挑战，以期推动新型细胞冷冻保存技术更好地开展。

肝移植是目前治疗终末期肝病唯一有效的方法。移植前供肝的保存至关重要，传统的静态冷藏和机械灌注均受保存时间的限制，以至于供肝的分配空间有限，不可避免地造成部分供肝的废弃。在保证供肝质量的同时，寻找更长的有效保存供肝的技术，是所有肝移植科医师共同努力的方向。最近报道的一种超低温肝脏保存技术可以增加肝脏保存时间，利用冷冻保护剂将肝脏在-6 ℃下保存3~4 d，之后经过亚常温机械灌注复苏供肝后进行肝移植。该技术在供肝保存方面取得了革命性突破，可能为供肝保存研究开拓出新的领域。但超低温肝脏保存技术目前仅处于实验阶段，将其应用于临床实践还有待进一步深入探究。

在卵母细胞低温保存过程中，冷冻保护剂的高毒性及其高渗透性，常造成卵母细胞内的氧化-抗氧化系统失衡，特别是细胞内活性氧含量的增加。褪黑素作为一种有效的抗氧化剂及自由基清除剂，能通过影响能量代谢和细胞信号转导，显著降低卵细胞内活性氧水平，保护线粒体功能，同时也发挥清除细胞内自由基的作用，实现冻融过程中抑制细胞内氧化应激水平，进而减轻卵母细胞在冷冻保存过程中的低温损伤，最终提高冷冻卵子的囊胚形成率及胚胎移植后的临床妊娠率。褪黑素应用于卵母细胞冷冻对于女性生育力保存研究具有积极意义。本文就褪黑素在卵母细胞冷冻过程中的进展进行综述。

细胞冷冻保存应用广泛，但冷冻会损伤细胞导致代谢紊乱，而冷冻保护剂可缓解该过程。脯氨酸是一种渗透性冷冻保护剂，可快速透过细胞膜进入细胞内，与细胞内水氢键结合抑制低温下冰晶形成，同时可与细胞内水结合减少细胞内水流失，保护细胞内蛋白质的结构和功能，保护细胞膜。脯氨酸可提高植物、动物及人类体细胞冷冻复苏后存活率。在生殖细胞冷冻中，研究表明脯氨酸可用于卵母细胞冷冻，可提高小鼠卵母细胞冷冻后存活率及保护线粒体功能，但其对于精子的冷冻效果报道尚不一致。脯氨酸冷冻保护剂涉及多种细胞类型且冷冻效果较强，其未来可能更广泛应用于低温生物学领域。本文总结了脯氨酸作为天然小分子冷冻保护剂的应用研究进展，希望能够帮助人们更好地了解生殖细胞冻存的低温生物学机制，为改良生育力冷冻保存技术提供参考。

目的:制备地佐辛聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)微球并进行鉴定。方法:地佐辛PLGA微球制备：地佐辛120 mg、PLGA 0.1 g与其助溶添加剂泊洛沙姆0.1 g分散于四氢呋喃溶剂中，配置成有机相溶液；氯化钠、聚乙二醇溶解于注射用水中，形成内水相溶液和外水相溶液；机相溶液20 ml与内水相溶液20 ml混合，形成水相/油相初乳后，加入外水相溶液中，形成水相/油相/水相复乳，与冻干粉保护剂充分混合冷冻干燥，制成地佐辛PLGA微球。鉴定：清洁级健康雄性SD大鼠18只，10～12周龄，体质量220～260 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：对照组(C组)、地佐辛普通制剂组(D 1组)和地佐辛PLGA微球组(D 2组)，分别肌肉注射生理盐水、地佐辛注射液(药物剂量1 mg)及地佐辛PLGA微球注射液(药物剂量0.2 μg)0.2 ml。于给药后30 min(T 1)、1 h(T 2)、2 h(T 3)、3 h(T 4)、4 h(T 5)、5 h(T 6)、6 h(T 7)、7 h(T 8)和8 h(T 9)时测定血浆地佐辛浓度，于T 1～T 3、T 5和T 9时测定热缩足潜伏期；肌肉注射后第7天，取注射部位组织，HE染色后观察炎症反应情况。 结果:与C组比较，D 1组T 1～T 3时及D 2组T 1～T 3、T 5和T 9时热缩足潜伏期延长( P<0.05)；与D 1组比较，D 2组T 5、T 9时热缩足潜伏期延长，T 6～T 9时血浆地佐辛浓度升高( P<0.05)。与T 2时比较，D 1组T 4～T 9时血浆地佐辛浓度降低( P<0.05)，D 2组T 3～T 9时血浆地佐辛浓度差异无统计学意义( P>0.05)。肌肉注射后第7天，各组局部组织均未见炎症产生，病理学结果未见明显差异。 结论:本研究成功制备了地佐辛PLGA微球缓释剂型，对大鼠可维持平稳的血药浓度，有效延长药物作用时间，具有显著缓释作用。

目前临床上应用最广泛的肝脏保存方式为静态低温保存技术，理论上仅可保存肝脏12 h。随着静态低温保存时间的延长，肝脏的活性会逐步下降。这限制了器官的运输和匹配。超低温(不结冰)保存联合亚常温机械灌注技术可以显著延长大鼠肝脏的有效保存时间长达3～4 d。这对保证肝脏的公平分配，降低肝脏的废弃率，具有极大的现实意义和临床价值。本文综述了超低温联合亚常温机械灌注保存肝脏实验技术研究进展。

目的 制备白藜芦醇(RES)纳米混悬剂,并进行体外评价.方法 采用沉淀法制备RES纳米混悬剂.以平均粒径及多分散系数(PDI)为评价指标,正交试验优化制剂工艺.冷冻干燥法制备纳米混悬剂冻干粉末并进行表征.使用透析袋法研究制剂的体外释放情况.建立高糖刺激的ARPE-19细胞损伤模型,CCK-8法评估RES纳米混悬剂对细胞活力的影响.结果 RES最优处方工艺为:RES浓度6 mg/mL,两种稳定剂(PVP K17∶HPMC)质量比2∶1,RES与稳定剂质量比1∶2,5％甘露醇做冻干保护剂.RES纳米混悬剂为相对规则的颗粒状,载药量为28.04％,36 h内累计释放量达91.27％.与RES相比,RES纳米混悬剂预处理后ARPE-19细胞活力显著提高(P＜0.05).结论 RES纳米混悬剂可提高RES的体外释放率,并且能够减轻高糖对ARPE-19细胞的损伤,提高细胞存活率.

目的 筛选出适用于甲流病毒环介导等温扩增技术(LAMP)的最佳冻干保护剂组合,建立起可在室温下长时间储存的甲流病毒核酸检测体系,为甲流现场快速检测和分级诊疗提供技术支持.方法 以LAMP核酸扩增活性为评价指标,在单因素试验的基础上利用三因素三水平的响应面法,探究冻干保护剂(海藻糖、牛血清白蛋白和甘露醇)对LAMP试剂的保护效果并优化冻干保护剂的组合.结果 采用Box-Behnken试验结果进行回归模型拟合,LAMP试剂的保护剂最佳配方组合为7.64 wt%海藻糖、0.43 wt%牛血清白蛋白和0.85 wt%甘露醇.经真空冷冻干燥且加入保护剂后的LAMP试剂将以脱水形式贮存,可在常温下长期保持活性,使用时加水复溶即可.为了检验保护剂的稳定性,真空冷冻干燥后的LAMP试剂分别置于25℃和37℃下贮存,第0天、4天、8天、12天、16天、20天取出分别进行LAMP扩增活性检测.添加最优保护剂组合的LAMP冻干试剂其核酸扩增活性远大于添加单一保护剂或未添加冻干保护剂组.结论 添加最优保护剂组合能够延长LAMP试剂的贮存时间和保持试剂的稳定性.