碳青霉烯类药物是目前治疗肺炎克雷伯菌的最后屏障药物，但是近年来肺炎克雷伯菌碳青霉烯类药物耐药现象愈演愈烈，若无有效的应对措施，肺炎克雷伯菌感染的治疗将会迈向后抗生素时代。尽管目前对肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究较为广泛和深入，但解决其耐药难题的成效仍不容乐观。因而有必要将研究拓展至一些非常规环境，如太空环境。太空环境具有微重力、强辐射、超低温、高真空和弱磁场等特点，可使微生物的变异速率加大，变异类型也会更加多样化。一些在地面难以发生的现象，在空间特殊环境因素的诱导下可以出现放大效应。多项研究表明太空环境可影响细菌的耐药性，甚至可引起细菌耐药性逆转。当前我国的航天事业方兴未艾，为微生物研究提供了难得的实验平台，也为肺炎克雷伯菌碳青霉烯类药物耐药难题的解决提供了一条独特的道路。

肝移植是目前治疗终末期肝病唯一有效的方法。移植前供肝的保存至关重要，传统的静态冷藏和机械灌注均受保存时间的限制，以至于供肝的分配空间有限，不可避免地造成部分供肝的废弃。在保证供肝质量的同时，寻找更长的有效保存供肝的技术，是所有肝移植科医师共同努力的方向。最近报道的一种超低温肝脏保存技术可以增加肝脏保存时间，利用冷冻保护剂将肝脏在-6 ℃下保存3~4 d，之后经过亚常温机械灌注复苏供肝后进行肝移植。该技术在供肝保存方面取得了革命性突破，可能为供肝保存研究开拓出新的领域。但超低温肝脏保存技术目前仅处于实验阶段，将其应用于临床实践还有待进一步深入探究。

目的:观察超低温环境下长期保存后人角膜基质透镜的透明度及结构变化，探讨简单可行且有效的角膜基质透镜长期保存方案。方法:收集2013—2020年于中山大学中山眼科中心海南眼科医院行飞秒激光小切口角膜透镜取出术(SMILE)200眼，手术中获取完整人角膜基质透镜标本200份。将人角膜基质透镜标本置于-80 ℃超低温冰箱中保存，按照保存时间的不同将标本分为1个月组、24个月组、60个月组和84个月组，每组50份。采用超微量分光光度计测量各组在300~800 nm波长范围内角膜基质透镜的透光率，每个透镜共连续检测10次，每次间隔50 nm；分别采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察各组角膜基质透镜的组织学形态变化和胶原纤维结构改变；采用透射电子显微镜观察各组角膜基质透镜中胶原纤维排列方式及角膜基质细胞的超微结构变化；采用TUNEL染色法检测各组人角膜基质透镜中角膜基质细胞凋亡情况。结果:各组450~800 nm波长范围内角膜基质透镜透光率比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。Masson染色结果显示，1个月组角膜基质透镜胶原纤维排列整齐、紧密，24个月组部分胶原纤维间出现空泡，60个月组胶原纤维排列疏松，空泡增多，84个月组部分胶原纤维脱落，角膜基质透镜变薄；苏木精-伊红染色显示角膜基质透镜形态改变与胶原纤维变化相对应。透射电子显微镜下可见1个月组角膜基质透镜胶原纤维排列规则，角膜基质细胞呈长梭形，核膜完整，胞质丰富；24个月组胶原纤维排列稍疏松，角膜基质细胞变形，核膜不完整；60个月组胶原纤维排列疏松、不整齐，细胞核萎缩变形；84个月组胶原纤维排列紊乱，角膜基质细胞皱缩，核膜不连续，核质裂解。TUNEL染色结果显示，1个月组、24个月组、60个月组和84个月组透镜中基质细胞凋亡率分别为(87.80±1.17)%、(89.50±1.05)%、(89.30±1.51)%和(90.20±1.47)%，总体比较差异无统计学意义( F＝4.525， P＝0.053)。 结论:人角膜基质透镜超低温环境下保存84个月可见胶原纤维排列紊乱及角膜基质细胞凋亡，但其透明度和完整性仍较好。超低温保存技术长期保存角膜基质透镜有效且简单可行。

器官移植是目前治疗终末期脏器功能衰竭最为有效的手段。器官短缺是制约器官移植工作开展的全球性问题 ［1］。供者器官获取、保存及移植后缺血再灌注损伤（ischemic reperfusion injury，IRI）是影响移植预后的重要因素。自20世纪器官移植技术开展以来，器官保护技术一直是该领域的研究热点。器官保存液如Collins液、威斯康星大学保存液（the University of Wisconsin solution，UW液）、组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（histidine-tryptophan-ketoglutarate solution，HTK液）等相继问世，促进了器官静态冷保存（static cold storage，SCS）技术的迅速发展 ［2］。随着对移植器官IRI认识的不断深入，对器官保存质量、保存时限要求的不断提高，为适应不断增长的供者器官需求和接受扩大标准供者器官，针对不同器官的专用保存液如：HTK-N液 ［3］，肺脏保存液（如Steen液） ［4］，肾脏灌注液（如KPS1液） ［5］等被相继研发应用。目前，SCS仍然是器官移植的标准保存技术 ［2］，但SCS会导致器官冷缺血损伤，且无法在冷保存过程中有效地评估器官功能。机械灌注（machine perfusion，MP）器官保存技术包括常温机械灌注（normothermic machine perfusion，NMP，32℃~37℃）、亚常温机械灌注（subnormothermic machine perfusion，SNMP，20℃~32℃）、低温携氧机械灌注（hypothermic oxygenated perfusion，HOPE，0℃~12℃）和低温机械灌注（hypothermic machine perfusion，HMP，0℃~12℃）。此外，如超低温保存（supercooling preservation，-4℃~6℃） ［6］等新型保存技术也相继出现。离体灌注系统能够在不同温控条件下，实现在器官保存过程中清除代谢废物、提供满足器官代谢需求的基本物质，不仅能延长器官保存时间，同时也能评估离体器官功能、改善器官质量，减少术后相关并发症的发生，提高边缘器官的利用率。多项发表在多个高质量期刊上的的临床随机对照试验（randomized controlled trial，RCT）研究结果 ［7-11］也证实MP能显著修复供者器官质量及减少移植后相关并发症的发生率，未来有望强力推动器官移植事业进步。

目前临床上应用最广泛的肝脏保存方式为静态低温保存技术，理论上仅可保存肝脏12 h。随着静态低温保存时间的延长，肝脏的活性会逐步下降。这限制了器官的运输和匹配。超低温(不结冰)保存联合亚常温机械灌注技术可以显著延长大鼠肝脏的有效保存时间长达3～4 d。这对保证肝脏的公平分配，降低肝脏的废弃率，具有极大的现实意义和临床价值。本文综述了超低温联合亚常温机械灌注保存肝脏实验技术研究进展。

目的 探讨超低温冷冻消融保肛术对于低位直肠癌治疗的临床治疗效果.方法 采用超低温冷冻消融保肛术治疗低位直肠癌的患者36例,在治疗后3个月和治疗后6个月,对其主要症状、肿瘤标志物的变化、存活率、复发率、转移率、生命质量评分、肛门直肠功能评分等方面分别进行观察和记录.结果 治疗后6个月患者梗阻症状、黏液血便、排便习惯改变、里急后重及腹胀腹痛症状均有所改善(P＜0.05);治疗后6个月患者外周血癌胚抗原显著降低(P＜0.05);治疗后3个月、治疗后6个月患者的肛门功能与治疗前的比较差异具有统计学意义(P＜0.05);生命质量方面,与治疗前比较,患者治疗6个月后躯体形象、未来期望、胃肠症状、排便问题明显改善(P＜0.05).治疗后6个月随访发现生存率为100％,有2例出现复发,没有1例发生新的转移灶.结论 超低温冷冻消融保肛术治疗低位直肠癌具备"消瘤、减瘤、抑瘤"的三大特点,能使人体原有的消化道直肠肛门保持通畅,避免了既往腹会阴联合切除造成的直肠肛门被切除、腹壁造瘘、排便方式改变的痛苦.

[背景]六价铬[Cr(Ⅵ)]暴露能引起肠道菌群结构紊乱,造成功能损伤.维生素C(VC)是人体必需的微量营养素之一,在促进肠道益生菌生长,改善肠道屏障,维持肠道菌群稳态中起重要作用.而VC对Cr(Ⅵ)暴露致肠道菌群紊乱的调节作用还有待研究.[目的]探讨VC对Cr(Ⅵ)暴露导致小鼠肠道菌群紊乱的影响.[方法]32只SPF级C57BL/6小鼠适应性喂养 3 d后,随机分为正常对照组(Con组)、VC组、重铬酸钾(K2Cr2O7)组[Cr(Ⅵ)组]和VC+K2Cr2O7 组[VC+Cr(Ⅵ)组].于第 4天早 8:00,Con组小鼠灌胃给予双蒸水,腹腔注射双蒸水;VC组小鼠灌胃给予VC,腹腔注射双蒸水;Cr(Ⅵ)组小鼠灌胃给予双蒸水,腹腔注射K2Cr2O7 溶液;VC+Cr(Ⅵ)组小鼠灌胃给予VC,腹腔注射K2Cr2O7溶液.VC给药量为 200 mg·kg-1,K2Cr2O7 给药量为 1.25 mg·kg-1,连续处理 45 d后处死小鼠,取结肠内容物于无菌冻存管中,每组收集3个重复样本.标记好后立即投入液氮中迅速冷冻.待所有样本收集完成后,转移至-80℃超低温冰箱中保存.结肠内容物样本通过高通量测序及生物信息学软件分析肠道菌群结构.[结果]与Con组相比,Cr(Ⅵ)暴露导致小鼠体重增加值减少.小鼠回肠组织发生病理改变,Cr(Ⅵ)组有明显炎症细胞浸润,VC+Cr(Ⅵ)组炎症细胞浸润减少.Cr(Ⅵ)组小鼠肠道菌群分类操作单元(OTU)数目改变.α多样性分析中,Cr(Ⅵ)暴露组Sobs指数平均为 240.333±67.796,Chao指数为 258.173±64.813,Ace指数为 259.481±66.891,较Con组降低(P＜0.05),PD whole tree指数为 27.863±2.399,较Con组升高(P＜0.05),VC干预可改善Cr(Ⅵ)暴露导致上述指标的变化(P＜0.05).β多样性分析中,主坐标分析结果表明Cr(Ⅵ)组和Con组之间有明显分离,VC干预后,分离趋势有回调,差异减小.多样本相似性树状图结果显示正常对照组和VC组最先聚类在一起,然后与VC+Cr(Ⅵ)组聚成一类,最后再与Cr(Ⅵ)组聚成一类.Cr(Ⅵ)组小鼠肠道中的拟杆菌门、单糖菌门和软壁菌门丰度降低,厚壁菌门丰度升高;乳杆菌属、另枝菌属、拟杆菌属和瘤胃梭菌属丰度升高,其中拟杆菌属与Con组小鼠相比,丰度升高有统计学意义(P＜0.05);而经VC干预后,上述肠道微生物中菌门及菌属的丰度变化均有所改善.[结论]Cr(Ⅵ)暴露可导致小鼠肠道损伤及菌群结构紊乱,而VC干预可在一定程度上改善上述变化,使肠道菌群结构趋向正常.

目的 评估-80 ℃超低温冷冻保存后冻融的富血小板血浆(PRP)对伤口愈合相关细胞的影响,揭示超低温冻融的PRP在创伤修复中的机制,明确低温冷冻保存PRP对促进伤口愈合应用的可行性和有效性.方法 使用未激活的新鲜PRP、钙离子激活的新鲜PRP和冻融后PRP分别与巨噬细胞、成纤维细胞和血管形成细胞共培养,测定比较巨噬细胞极化与炎症反应相关因子的表达及细胞迁移率和增殖率等多项指标,分析PRP对巨噬细胞极化、炎症及细胞增殖的影响.结果 与对照组比较,超低温冻融后的PRP使巨噬细胞M1样极化基因iNOS表达降低(P＜0.000 1),NO分泌减少(P＜0.001),尿素含量增加(P＜0.000 1),M1相关炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)降低(P＜0.001),白细胞介素(IL)-1分泌降低(P＜0.001),M2相关抗炎因子IL-10、IL-12分泌水平增加(P＜0.01,P＜0.05).此外,冻融PRP共培养明显促进细胞迁移,提高了血管形成效率,高于新鲜PRP组(P＜0.01),与激活PRP组效果相当.细胞活死染色和CCK-8增殖实验也显示与冻融PRP共培养的L929和HU-VEC细胞增殖率均显著增加(P＜0.01).结论-80 ℃超低温冷冻保存后的PRP能够显著增强细胞的迁移、分化和增殖能力,同时抑制炎症因子产生,促进巨噬细胞的M2样极化.低温冷冻保存可被视为一种有效的PRP保存方法.

目的 观察分析使用改良后的超低温保存箱,对制备新鲜冰冻血浆(FFP)的质量影响.方法 选取 2023年7-11 月采集的 400 mL的合格全血标本 80 例(去除O型),实验分为 4 组,每组标本 20 例.A组:使用传统低温冰箱速冻 1h后,放入-30℃冷库储存;B组:使用平板速冻机速冻 1h后,放入-30℃冷库储存;C组:使用改良超低温保存箱速冻 1h后,放入-30℃冷库储存;D组:使用新改良超低温保存箱速冻 1h并储存 12h后,放入-30℃冷库储存.检测4 组标本凝血因子FⅧ和纤维蛋白原(Fg)的含量.结果 B、C、D3 组的FⅧ含量均显著高于A组,有统计学差异(P＜0.05),B、C、D3 组之间FⅧ含量差异无统计学意义(P＞0.05),4 组之间的Fg含量差异均没有统计学意义(P＞0.05).结论 新改良的超低温保存箱在制备FFP的质量上优于低温冰箱的传统制备工艺,与平板速冻机制备效果差异无统计学意义,但改良式的超低温保存箱兼顾储存功能,可以使FFP的制备流程更加灵活,可以提高成分制备工作的效率.

卵巢组织冻存与移植技术不仅保护女性生育力,还可保存卵巢内分泌功能,有效防治医源性早发性卵巢功能不全,尤其适用于青春期前女童与亟需原发病治疗的女性.卵巢组织冻存的有效性与安全性已得到了广泛验证,目前的临床金标准为慢速冻存,而玻璃化冻存仅适用于研究.尽管该技术近年来发展迅速,但仍面临超低温冻存损伤、冷冻保护剂毒性、卵泡储备量的评估、冻存与移植的安全性等问题.本文针对以上问题的研究进展进行综述.