目的:优化分心木总黄酮的乙醇回流提取工艺.方法:以总黄酮提取量为指标,在单因素试验基础上,通过响应面法考察乙醇体积分数、液料比、回流时间对总黄酮提取量的影响,优化总黄酮提取工艺.结果:最佳提取工艺为加13倍量59％乙醇回流提取2次,每次77 min,总黄酮提取量为64.12 mg·g-1,与理论预测值65.08 mg·g-1偏差较小.结论:所优选的提取工艺简便、稳定,适用于分心木总黄酮的提取.

目的:研究分心木正丁醇部位的化学成分.方法:采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱、ODS柱色谱、制备高效液相等色谱方法对分心木正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过波谱数据分析对化合物进行结构鉴定.结果:从分心木正丁醇部位分离得到9个化合物,分别鉴定为:lyoniside(1)、nudiposide(2)、5’-methoxyisolariciresinol-9’-O-β-D-xylopyranoside(3)、4,5-二羟基-α-萘酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、4,5,8-三羟基-α-萘酮-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、4-羟基-α-萘酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、leonuriside A (7)、儿茶素(8)、胡萝卜苷(9).结论:其中,化合物1～7为首次从该植物中分离得到.

目的:研究分心木总黄酮体外抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用, 并对其酶动力学进行分析.方法:采用FRAP法、清除1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼 (DPPH) 自由基和羟基 (OH-) 自由基的方法, 对分心木总黄酮的抗氧化活性进行评价;采用体外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制模型, 测定分心木总黄酮对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制作用, 通过酶促动力学与Lineweaver-Burk曲线推断分心木总黄酮对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制类型.结果:分心木总黄酮总抗氧化的FRAP值为37.52 mg-1, 清除自由基的能力随着质量浓度的增大而增强, 对DPPH和OH-自由基的半数抑制浓度 (IC50) 分别为29.47和20.89 ug·m L-1, 对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的IC50分别为817.60和1109.00μg·m L-1, 对二者的抑制作用表现为可逆抑制, 其作用为竞争性抑制.结论:分心木总黄酮具有较好的抗氧化活性和较强的α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制活性, 具有开发成治疗糖尿病药物的价值.

目的 研究分心木Diaphragma Juglandis Fructus中的木脂素类化学成分及其抗人免疫缺陷病毒(HIV)活性.方法 运用柱色谱方法对分心木的95％甲醇提取物进行分离纯化,结合波谱技术与理化常数鉴定结构,通过LEDGF/p75-IN蛋白复合体ELISA筛选模型对化合物进行抗HIV活性筛选.结果 从分心木95％甲醇提取物中分离得到16个木脂素类化合物,分别鉴定为(-)-丁香脂素(1)、(+)-松脂素(2)、(+)-(7R,7'R,7"S,7"'S,8S,8'S,8"S,8"')-4",4"'-dihydroxy-3,3',3",3"',5,5'-hexamethoxy-7,9';7',9-diepoxy-4,8";4',8"'-bisoxy-8,'-dineolignan-7",7"',9",9"'-tetraol (3)、2,3-二羟基-1-(4'-羟基-3'-甲氧基苯基)-丙-1-酮(4)、3-羟基-1-(4'-羟基-3'-甲氧基苯基)-丙-1-酮(5)、3',4'-二甲氧基苯丙二醇(6)、(2S)-3,3-二-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-丙-1,2-二醇(7)、3-羟基-1-(4'-羟基-3',5'-二甲氧基苯基)-丙-1-酮(8)、(1R,5R,6R)-6-{4'-O-[8"-(7"-(4"-hydroxy-3"-methoxyphenyl)) glyceol]-3',5'-dimethoxyphenyl}-3,7-dioxabicyclo [3.3.0] octan-2-one (9)、curcasinlignanB (10)、evofolin-B(11)、(7S,8R)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol (12)、pinnatifdanin C Ⅰ(13)、(+)-(7S,8S)-4,1'-dihydroxy-3,3',5'-trimethoxy-7,8,9-trinor-8,4'-oxyneolignan-7,9-diol (14)、八角莲醇(15)、1-(4'-羟基-3'-甲氧基苯基)-2-[4"-(3-羟丙基)-2",6"-二甲氧基苯基]-丙-1,3-二醇(16).结论 所有化合物均为首次从分心木中分离得到,其中化合物13具有潜在的抑制HIV-1的活性.

为研究核桃分心木的化学成分,明确其药效物质基础,采用高速逆流色谱、反相C18柱色谱、制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化,通过质谱、核磁共振波谱等多种谱学数据分析鉴定其化学结构.从核桃分心木的乙酸乙酯萃取部位分离纯化得到10个化合物,分别鉴定为:2,3-dihydro-3-hydroxy-2-oxo-1H-indole-3-acetic acid (1)、核桃素D(2)、2-hydroxycinchoninic acid(3)、C-藜芦酰乙二醇(4)、槲皮素-3-O-(6"-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(5)、槲皮素-3-0-(6″-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(6)、金丝桃苷(7)、异槲皮苷(8)、4,8-二羟基-1-四氢萘醌(9)、槲皮素(10).化合物3,7和8是首次从核桃分心木中分离得到,化合物1、4和6为首次从该种属植物中分离得到.运用Griess法检测LPS诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮(NO)水平,对各单体化合物的抗炎活性进行初步研究,结果显示化合物10具有较好的抗炎作用.

目的 通过网络药理学研究预测分心木总黄酮(TFDJF)的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的抗2型糖尿病(T2DM)的作用机制;并选取AKT/FoxO1信号通路进行细胞实验验证.方法 基于文献检索构建分心木黄酮类成分的化学成分数据库,并以“类药五原则”筛选潜在的活性成分,采用PharmMapper服务器反向药效团匹配方法预测活性成分可能的作用靶标,并根据TTD、OMIM数据库中与T2DM相关的靶点,筛选分心木黄酮类成分抗T2DM的作用靶标,通过对靶标的基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路分析,构建活性成分-抗T2DM作用靶点-代谢通路网络图,探讨TFDJF抗T2DM的作用机制.采用系统对接网站进行GSK3B和AKT1对山柰酚的分子对接.并进一步采用细胞实验进行验证:选取HepG2细胞,运用高浓度胰岛素诱导胰岛素抵抗(IR)模型,150 μg/mL TFDJF处理细胞36h,氧化酶法检测各组细胞的葡萄糖消耗量,Western blotting法检测AKT-FoxO信号通路相关蛋白的表达.结果 共获得分心木潜在的黄酮类活性成分10个,预测成分作用靶标共104个,筛选出与抗T2DM相关的关键靶点15个,KEGG通路富集分析发现TFDJF抗T2DM的作用机制可能与胰岛素、FoxO、AMPK和PI3K-AKT等信号通路有关.山柰酚与GSK3B有强烈的结合活性,与AKT1有较好的结合活性.进一步通过细胞实验验证,TFDJF可显著提高HepG2细胞IR模型葡萄糖消耗量(P＜0.01),显著升高AKT蛋白磷酸化水平(P＜0.01),显著降低FoxO1蛋白表达水平(P＜0.01),验证了网络药理学的部分预测结果.结论 TFDJF抗T2DM的作用机制可能与胰岛素、FoxO、AMPK和PI3K-AKT等信号通路有关.

为研究分心木对人结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡和迁移的影响,该研究以75％乙醇作为溶剂提取分心木中的活性成分,利用MTT法检测分心木乙醇提取物对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术、AO/EB双染、TUNEL法和Western blot检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;体外建立肿瘤3D细胞模型(3D培养)检测分心木乙醇提取物对HCT116 3D肿瘤细胞球增殖的影响.结果 显示,分心木乙醇提取物以剂量依赖的方式抑制HCT116细胞活性,促进细胞凋亡,同时促进凋亡因子Bax的表达,降低抗凋亡因子Bcl2的表达,并促进凋亡的关键执行蛋白PARP的裂解;划痕愈合实验和3D肿瘤细胞培养表明,分心木乙醇提取物抑制细胞迁移和3D肿瘤细胞的增殖.该研究表明,分心木乙醇提取物抑制肿瘤细胞的增殖和迁移,并通过促进cleaved PARP、Bax蛋白表达和抑制Bcl2蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡.此外,分心木乙醇提取物抑制肿瘤3D细胞球的增殖,这提示结肠癌对分心木乙醇提取物的药物敏感性在体内体外没有显著差异.

目的 探讨分心木提取物对横纹肌溶解所致急性肾损伤大鼠的防治作用及其可能机制.方法 将大鼠随机分成正常对照组、模型组、分心木水和醇提取物180和360 mg/kg各2组,共6组,以设计剂量每日1次灌胃30 d后,采用大鼠双侧后腿注射甘油建立横纹肌溶解急性肾损伤动物模型,于造模后的第24 h和48 h分别观察各组动物的肾功能和肾组织病理变化,并检测血清中抗氧化指标及肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)水平.结果 造模成功后,模型组较正常对照组动物24 h尿量显著减少,血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、TNF-ɑ和丙二醛(MDA)水平显著增高,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化歧化酶(T-SOD)活性显著下降,肾小管出现各种病变,大量蛋白管型形成,管腔完全消失,以上指标随时间推移加剧(P<0.05或P<0.01).应用分心木醇提取物干预后,与模型组比较,180 mg/kg干预仅能有效增加24 h尿量和降低第48 h的TNF-ɑ和MDA水平,肾脏病变没有随时间而加剧;而360 mg/kg干预则可显著增加24 h尿量并提高GSH-Px和T-SOD活性,同时降低各时点Cr、BUN和MDA水平以及第48 h的TNF-ɑ水平,肾脏病变少于模型组,部分动物肾小管恢复可见狭窄的管腔,以上差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).应用分心木水提取物干预后,与模型组比较,180 mg/kg干预各项指标均无明显改善,差异无统计学意义(P>0.05);而360 mg/kg干预可显著增加24 h尿量,提高第48 h的T-SOD活性,并有效降低第48 h的Cr、BUN、TNF-ɑ和MDA水平,同时肾脏病变得到有效改善,但作用强度不及相同剂量醇提取物,以上差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 分心木提取物360 mg/kg能有效改善横纹肌溶解导致的急性肾功能损伤,保护累及的肾组织,且醇提取物效果优于水提取物.其作用机制可能与抑制炎症反应,发挥抗氧化作用有关.

探究核桃分心木镇静催眠功效成分,为分心木应用于镇静催眠类保健食品或者药品提供理论依据.采用乙醇和水提取,多种层析分离,通过小鼠镇静催眠行为学实验,筛选分心木镇静催眠活性成分,利用核磁共振鉴定化学结构.结果表明,分心木提取物经大孔树脂分离得的水洗脱物具有显著的镇静催眠作用,再经MCI、ODS等柱分离,从该部分得到4个单体化合物,分别是2-羟甲基-四氢吡喃-3,4,5-三醇(1)、3-羟基-4-亚氨基丁酸(2)、(1'-甲基-2'-羟基)丙烷-O-α-D-吡喃葡萄糖苷(3)、6-羟基萘基-1,2-(2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)(4).其中化合物1仅能显著延长小鼠睡眠时间,而化合物2则可显著降低小鼠运动速度和时间,增加在中央区域停留的时间,且可缩短潜伏期,延长睡眠时长.分心木是潜在镇静催眠的天然活性产物,在保健食品药品领域的研究与应用具有重要研究意义和开发价值.

目的 建立同时测定分心木中芦丁、槲皮素、金丝桃苷含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Kromasil 100-5 C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4％磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为360 nm,柱温为25℃,进样量为10μL.结果 芦丁、槲皮素、金丝桃苷线性范围分别为36.60～366.00μg/mL、48.10～481.00μg/mL、4.80～48.00μg/mL(r=0.999,n=5);平均加样回收率分别为100.10％,99.72％,100.02％,RSD分别为0.71％,0.18％,0.26％(n=9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2％.结论 该方法简便快捷,结果准确可靠,重复性和稳定性均较好,可用于同时测定分心木中芦丁、槲皮素、金丝桃苷的含量.