目的:观察5-脂氧合酶(5-LOX)对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)极化的影响。方法:2020年1月从人外周血分离单核细胞，经佛波酯、脂多糖和γ-干扰素诱导，通过流式细胞术对诱导后的巨噬细胞鉴定；构建包装5-LOX过表达慢病毒和对照慢病毒，分为过表达组和对照组感染巨噬细胞。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测过表达效果；通过流式细胞术检测巨噬细胞极化相关表面蛋白CD68、CD163表达水平；通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测巨噬细胞极化相关蛋白白细胞介素(IL)-12、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-10表达水平；通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测巨噬细胞相关细胞因子干扰素调节因子4(IRF4)、干扰素调节因子5(IRF5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg1)的mRNA表达水平。实验数据采用配对样本 t检验。 结果:5-LOX过表达组CD163[(1.73±0.35)%比(0.72±0.07)%， t＝4.831， P<0.05]，IL-10[(72.91±0.14) pg/ml比(20.75±0.90) pg/ml， t＝71.396， P<0.01]、TGF-β1[(27.88±3.11) pg/ml比(10.06±0.70) pg/ml， t＝10.284， P<0.01]分泌和Arg1(2.98±0.05， t＝21.193， P<0.01)、IRF4(1.91±0.06， t＝20.294， P<0.01)的mRNA表达高于对照组；同时CD68[(0.85±0.03)%比(2.13±0.16)%， t＝11.523， P<0.01]，iNOS[(12.80±1.99) pg/ml比28.40±2.16) pg/ml， t＝5.745， P<0.05]、IL-12[(122.37±7.49) pg/ml比(379.44±2.70) pg/ml， t＝70.493， P<0.01]分泌和TNF-α(0.34±0.02， t＝21.843， P<0.01)、IRF5(0.42±0.01， t＝46.868， P<0.01)的mRNA表达低于对照组。 结论:5-LOX表达的上调促进了M1型TAMs向促瘤性的M2表型极化。

目的:研究CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞促进肝癌肿瘤血管生成的作用。 方法:磁珠分选法分离得到人脾脏CD68 ＋M0巨噬细胞，体外采用IL-4和IL-13诱导为CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别与CD68 ＋M0和CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞体外共培养。CCK-8法检测HUVEC的细胞活力，划痕试验检测细胞的迁移能力，体外成管试验检测血管形成的能力，Western blot检测HUVEC中血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Notch1、Dll4的表达水平，酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养基中血管内皮生长因子(VEGF)和IL-8的表达水平。采用BALB/c裸鼠构建HepG2移植瘤肝癌模型，分别注射CD68 ＋M0和CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞，免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD105的表达，Western blot检测VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4的表达水平。 结果:(1)IL-4和IL-13可以诱导CD68 ＋M0巨噬细胞向CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞分化。(2)细胞实验中，CD68 ＋M0型巨噬细胞对HUVEC的成管能力无明显促进作用，细胞中VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4、IL-8水平的变化无统计学意义。CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以促进HUVEC的体外成管，其作用与VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号激活有关。(3)动物实验中，CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以促进CD105的表达和肿瘤血管的生成，同时可以提高VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号的表达。 结论:CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以通过分泌VEGF等促血管生成因子，激活VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进肝癌中肿瘤血管的生成。

目的:探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞对M0型巨噬细胞极化、炎症因子表达的影响及可能机制，为瘢痕疙瘩治疗的新靶点提供理论依据。方法:2020年11月至2021年9月，中山大学附属第一医院整形外科手术患者瘢痕疙瘩5例或正常皮肤组织3例石蜡标本分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞，并与佛波酯诱导人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)后形成的M0细胞共培养，检测巨噬细胞极化标记物及细胞因子表达情况。外源性加入肿瘤坏死因子(TNF-α)检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与细胞外基质表达情况。结果:瘢痕疙瘩组织中存在以CD163 +(M2)为主的巨噬细胞聚集，相比正常皮肤成纤维细胞，与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养的M0细胞表达更多TNF-α；流式细胞内染色阳性率分别为19.32%和29.52%。外源性TNF-α刺激下，瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胞外基质(Ⅲ型胶原α3，COL3A1；纤维连接蛋白，fibronectin1，FN1)，波形蛋白表达增加，瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞对巨噬细胞极化表面标志CD86和CD163表达变化差异无统计学意义。 结论:瘢痕疙瘩成纤维细胞促进巨噬细胞TNF-α表达，反过来促进自身细胞增殖、细胞外基质分泌。

目的:基于生物信息学分析结直肠癌(CRC)中肿瘤相关巨噬细胞(TAM)促进趋化因子C-C基序趋化因子配体3(CCL3)的分泌引导免疫负调节的机制。方法:获取人CRC和正常组织(CON)中的scRNA-seq(单细胞转录组测序)数据进行降维、聚类、细胞注释，分析不同表型TAM、调节T细胞(Tregs)UMAP分布；分析CRC-TAM基因差异表达和富集通路情况。String分析免疫负调控基因的蛋白-蛋白互作(PPI)。分析免疫负调控相关基因之间pearson相关性，基于celltalker和cellphoneDB工具评估TAM分泌CCL3与Tregs之间的相互作用。卡方检验和Wilcoxon检验用于组间差异显著性分析。结果:CRC-TAM中CCL3表达量显著高于CON组(2.566±1.877比0.000±0.000 log 2TPM， P<0.01)，且是免疫负调节途径( P<0.01)的核心基因；与免疫负调控基因包括IRF1(2.550±1.882比0.605±0.802 log 2TPM， t＝13.221， r＝0.82， P<0.05)、TNFAIP3(2.550±1.882比1.037±1.039 log 2TPM， t＝22.419， r＝0.90， P<0.01)、IFI16(0.451±0.671比0.605±0.802 log 2TPM， t＝5.914， r＝0.80， P<0.05)等的表达呈中强正相关。CCL3主要在Mf1(100%，CD14 hiHLA-DR loCD209 loCD163 lo)和Mf2(93%，CD14 hi/loHLA-DR hiCD209 loCD163 lo)表达。CCL3阳性Mf2(CCL3 +Mf2)与Treg表面配体-受体对IL1B-IL1R2/ICAM1-IL2RA/FN1-CD79A/CD14-ITGB1/CD14-ITGA4(R>3， P<0.01)有强相互作用。 结论:CRC中CD14 hi/loHLA-DR hiCD209 loCD163 lo型TAM可能分泌CCL3募集Tregs，诱导免疫负调控。

目的:探讨胃癌微环境中肿瘤来源间充质干细胞对巨噬细胞M2亚型极化的调节作用及机制。方法:胃癌及癌旁正常组织来源于2018年于连云港市第一人民医院行胃癌切除的患者(4例)。将THP-1诱导分化来源的巨噬细胞与胃癌来源间充质干细胞(GC-MSCs)进行体外共培养，细胞分为对照组(Mac组)、细胞上清处理组(Mac+GC-MSC-CM组)、Mac+GC-MSC-TW组、Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM组、Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组和Mac+IL-6/IL-8-blocked-GC-MSC-CM组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术和Luminex液态芯片技术，分别评价巨噬细胞中M2亚型相关基因、细胞表面标记蛋白以及细胞因子谱的表达情况。利用Luminex液态芯片技术检测并筛选GC-MSCs中可能发挥诱导巨噬细胞向M2亚型极化作用的关键细胞因子，并采用中和抗体试验进行验证。Western blot法检测GC-MSCs不同处理条件下，巨噬细胞中M2亚型极化相关信号通路蛋白表达情况。结果:Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞中M2亚型相关基因Ym-1和Fizz-1表达水平分别为1.53±0.32和13.22±1.05，均高于Mac组(分别为1.00±0.05和1.21±0.38，均 P<0.05)，iNOS基因表达水平(0.60±0.41)低于Mac组(1.06±0.38, P＝0.023)。Mac+GC-MSC-TW组巨噬细胞中Ym-1和Fizz-1基因表达水平分别为1.47±0.09和13.16±2.77，均高于Mac组(分别为1.00±0.05和1.21±0.38，均 P<0.05)，iNOS基因表达水平(0.56±0.03)低于Mac组(1.06±0.38， P＝0.026)。Mac+GC-MSC-CM组和Mac+GC-MSC-TW组巨噬细胞中CD163 +和CD204 +细胞比例分别为3.80%和4.40%，均高于Mac组(0.60%)。Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞中白细胞介素10(IL-10)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子的表达水平分别为(592.60±87.52)pg/ml、(1 346.80±64.70)pg/ml、(11 256.00±29.03)pg/ml和(1 463.90±66.67)pg/ml，均高于Mac组[分别为(41.03±2.59)pg/ml、(17.35±1.79)pg/ml、(5 213.30±523.71)pg/ml和(267.12±12.06)pg/ml，均 P<0.05]，肿瘤坏死因子α、IP-10、RANTES和巨噬细胞炎症蛋白1α的表达水平分别为(95.57±9.34)pg/ml、(410.48±40.68)pg/ml、(6 967.30±1.29)pg/ml和(1 538.70±283.04)pg/ml，均低于Mac组[分别为(138.01±24.31)pg/ml、(1 298.60±310.50)pg/ml、(14 631.00±4.21)pg/ml和(6 633.20±1.47)pg/ml，均 P<0.05]。IL-6、IL-8在GC-MSCs中的表达水平分别为(11 185.02±2.82)pg/ml和(12 718.03±370.17)pg/ml，均高于胃癌癌旁间充质干细胞[分别为(270.71±59.38)pg/ml和(106.04±32.84)pg/ml，均 P<0.05]。Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM和Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组巨噬细胞中CD86 +细胞的比例(分别为28.80%和31.40%)均高于Mac+GC-MSC-CM组(24.70%)。Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM和Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组中CD204 +细胞比例(分别为9.90%和8.70%)均低于Mac+GC-MSC-CM组(13.70%)。Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞M2亚型极化相关信号通路蛋白p-JAK2和p-STAT3表达水平分别为0.86±0.01和1.08±0.01，均高于Mac组(分别为0.50±0.01和0.82±0.01，均 P<0.05)，Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM组巨噬细胞中p-JAK2蛋白表达水平(0.47±0.02)低于Mac+GC-MSC-CM组(0.86±0.01， P<0.05)。Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组巨噬细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平分别为0.50±0.01和0.85±0.01，均低于Mac+GC-MSC-CM组(分别为0.86±0.01和1.08±0.01，均 P<0.05)。Mac+IL-6/IL-8-blocked-GC-MSC-CM组细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平分别为0.37±0.01和0.65±0.01，均低于Mac+GC-MSC-CM组(均 P<0.05)。 结论:GC-MSCs通过分泌高水平IL-6和IL-8因子促进巨噬细胞中JAK2/STAT3信号通路活化，从而有效诱导胃癌微环境中巨噬细胞向具有促肿瘤作用的M2亚型发生极化。

目的 研究老年特发性间质性肺炎(IIP)病人血清S100钙结合蛋白A9(S100A9)、分泌型CD163(sCD163)表达水平及其临床意义.方法 选取自2019年5月至2022年5月于本院诊治的96例老年IIP病人,根据IIP病情分为急性加重期组(n=62)和稳定期组(n=34).根据急性加重期组病人随访3个月生存情况,分为生存亚组(n=40)和死亡亚组(n=22).以同期体检的60例健康人为对照组.采用ELISA法检测血清S100A9、sCD163水平.采用多因素Logistic回归分析急性加重期IIP病人死亡的影响因素,采用ROC曲线分析血清S100A9、sCD163对急性加重期IIP病人死亡的预测价值.结果 急性加重期组血清S100A9、sCD163水平明显高于稳定期组和对照组,差异具有统计学意义(均P＜0.01).急性加重期老年IIP病人血清S100A9、sCD163水平均与红细胞沉降率、肺部高分辨率计算机断层扫描成像(HRCT)评分呈正相关(均P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示,HRCT评分、S100A9、sCD163是急性加重期老年IIP病人死亡的独立影响因素.ROC曲线分析显示,HRCT评分、血清S100A9、sCD163联合检测预测急性加重期老年IIP病人死亡的AUC为0.907,大于上述单一指标(AUC=0.850,0.809,0.792),差异具有统计学意义(Z=5.183,4.349,5.127,均P＜0.05).结论 老年 IIP 病人血清S100A9和sCD163联合检测对急性加重期老年IIP病人死亡具有较高的预测价值.

目的 研究急性化脓性脑膜炎(PM)患儿脑脊液分泌型CD163(sCD163)、α2巨球蛋白(A2M)的水平及两者与患儿不良预后的关系.方法 收集2020年1月-2022年1月海南医学院附属海南医院/海南省人民医院儿科诊治PM患儿114例为PM组,根据中枢神经系统功能障碍的程度,分为重症亚组(n=38)和普通亚组(n=76),依据出院6个月时格拉斯哥(Glasgow)预后评分,分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=30).以同期诊治的病毒性脑膜炎(VM)患儿60例为VM组,中枢神经系统非感染疾病患儿60例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测脑脊液sCD163、A2M水平;Logistic回归分析PM预后影响因素;受试者工作特征曲线分析脑脊液sCD163、A2M对PM预后的评估价值.结果 脑脊液sCD163、A2M水平比较,PM组＞VM组＞对照组(F/P=1 522.470/＜0.001,1 487.801/＜0.001);重症亚组 PM 患儿脑脊液 sCD163、A2M 水平高于普通亚组(t/P=17.900/＜0.001,14.896/＜0.001);预后不良亚组PM患儿休克比例及脑脊液WBC、CRP、sCD163、A2M均明显高于预后良好亚组(x2/t/P=4.878/0.027,7.612/＜0.001,16.100/＜0.001,9.522/＜0.001,20.939/＜0.001);休克和脑脊液 WBC、CRP、sCD163、A2M 升高是PM 患儿预后不良的危险因素[OR((95％CI)=1.237(1.054～1.453),1.172(1.104～1.355),1.202(1.208～1.406),1.210(1.057～1.386),1.156(1.040～1.285)];脑脊液 sCD163、A2M 二者联合诊断 PM 的曲线下面积(AUC)为0.929,大于脑脊液sCD163、A2M各自单项的0.880、0.841(Z=4.572、5.358,P均＜0.001).结论 PM患儿脑脊液中sCD163、A2M水平异常升高,两者与患儿病情程度有关,两者联合对评估PM患儿不良预后具有较高的预测价值.

目的 探讨肺神经内分泌细胞(PNEC)和γ-氨基丁酸(GABA)在肺神经内分泌肿瘤(PNET)患者中的作用.方法 收集2018年10月-2022年1月解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部胸外科收治的29例PNET患者的病理标本,采用HE染色观察形态学特征,免疫组织化学染色观察突触素(Syn)、嗜铬粒蛋白A(CgA)、CD56、Ki-67、CD86和CD163的表达水平,双抗体免疫荧光共染检测不同类型PNET中降钙素基因相关肽(CGRP)和谷氨酸脱羧酶(GAD)65/67的表达情况,并分析GAD65/67阳性PNEC与巨噬细胞极化的相关性.结果 HE染色结果显示,4种类型的PNET组织均具有神经内分泌特征——玫瑰花样结构和器官嵌套或栅栏状图案,但各有差异;有丝分裂细胞占比由低到高为典型类癌(TC)、不典型类癌(AC)、大细胞神经内分泌癌(LCNEC)、小细胞肺癌(SCLC).免疫组织化学染色结果显示,类癌(TC和AC)的Syn、CgA阳性表达率及Syn、CgA、CD56阳性程度均明显高于LCNEC和SCLC(P＜0.05).4类PNET的Ki-67指数分别为:TC＜5%,AC 5%～20%,LCNEC和SCLC均＞75%.类癌的PNEC数量明显高于LCNEC、SCLC和瘤旁组织(P＜0.05);LCNEC和SCLC的PNEC数量与瘤旁组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).免疫荧光染色结果显示,95%的PNEC共表达GAD65/67;类癌GAD65/67阳性细胞数明显增多于LCNEC、SCLC和瘤旁组织(P＜0.05);LCNEC和SCLC的GAD65/67阳性细胞数与瘤旁组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学染色结果还显示,瘤旁组织中CD86阳性 M1巨噬细胞明显多于CD163阳性 M2巨噬细胞(P＜0.05);而在AC、LCNEC和SCLC中,M2巨噬细胞均明显多于M1巨噬细胞(P＜0.01).相关性分析显示,PNET中GAD65/67阳性PNEC细胞数与肿瘤间质中CD163阳性M2巨噬细胞数呈负相关(r=-0.6336,P=0.0174).结论 PNEC是肺组织中GABA的主要来源,在肺中发挥免疫调节作用,可能参与PNET的进展.

目的 对免疫检查点抑制剂(ICIs)治疗恶性肿瘤所致免疫相关不良反应(irAEs)的预测标志物研究进行综述,进一步提升对irAEs早期识别和治疗的能力,优化ICIs的治疗效能.方法 以"immune checkpoint inhibitor,immunother-apy,tumor/cancer/oncology/neoplasm/carcinoma,adverse event/toxicity,biomarker"为英文关键词,以"免疫检查点抑制剂,免疫治疗,癌症/恶性肿瘤,不良反应/毒性,标志物"为中文关键词,检索PubMed、万方和中国知网数据库2018-01-01-2023-10-31相关文献.共检索到184篇相关文献.纳入标准:聚焦于ICIs所致irAEs预测的生物标志物相关文献.排除标准:综述文献和会议论文.根据纳入和排除标准最终纳入62篇文献.结果 irAEs涉及全身多个器官,常见的包括皮肤相关疾病和结肠炎,少见的包括肝炎、肺炎、心肌炎、内分泌系统、神经系统和风湿免疫系统疾病等.目前常用预测标志物各具优缺点,大部分预测标志物的特异性并不高,抗结核抗体和抗线粒体抗体可能有助于预测ICIs诱导的肝损伤,血清游离型CD163、C-X-C模体趋化因子配体5(CXCL5)和大疱性类天疱疮(BP)180 IgG水平可以较为有效的预测皮肤相关irAE的发生.白细胞介素17(IL-17)、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和白细胞水平升高等,能够预测ICIs引发的结肠炎发生.嗜酸性细胞计数＞240/μL和相对嗜酸性细胞计数＞3.2％与内分泌irAE的发病显著相关.外周血标志物、肠道菌群及新兴标志物,如免疫细胞、细胞因子和自身抗体等,目前临床相关证据罕见报道,但发展前景乐观,期待能与其他标志物共同预测irAEs的发生.结论 依靠单一的标志物很难精确预测特定irAEs的发生,未来应加强多学科间的交叉协作,开展更大规模、更深层次的研究,同时在临床实践中联合使用多项标志物可能会更有效地预测irAEs的发生,从而提高临床医师对ICIs相关严重不良反应早期识别和及时治疗的能力.

目的:探讨三百棒醇提物(TAAE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向以及其对炎症反应的影响.方法:用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型.CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的水平;Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的分泌情况;荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态;免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达;Transwell检测TAAE对RAW264.7细胞迁移和趋化性的影响;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1、NF-κB和TLR4的mRNA水平;Western blot检测iNOS、COX-2、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白水平.使用TLR4通路抑制剂TAK-242进一步验证TAAE对TLR4/NF-κB信号通路的影响.结果:与模型组相比较,TAAE降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中M1型促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)及NO水平,促使M2型抑炎因子(IL-10和Arg-1)分泌增加和CD163+/CD68+比值升高,降低iNOS、COX-2、p-NF-κB、TLR4和p-IκBα蛋白水平,抑制NF-κB的核易位,同时降低TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB和TLR4的mRNA水平,升高IL-10和Arg-1的mRNA水平;重要的是,TAAE促进LPS诱导的巨噬细胞向M2型极化,并抑制其迁移和趋化.结论:TAAE能促进巨噬细胞从M1型向M2型转化,并对减轻巨噬细胞炎症反应具有很强的药理活性,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、促进巨噬细胞极化平衡有关.