目的:探讨细胞黏附分子CHL1在高糖高脂诱导的胰岛素抵抗细胞和小鼠模型中的作用及其机制。方法:将前脂肪细胞系3T3-L1通过完全随机法分为对照组和CHL1过表达组，分别转染空载体和CHL1过表达载体，随后通过胰岛素诱导分化为成熟脂肪细胞，再通过高糖高脂诱导胰岛素抵抗。葡萄糖消耗实验检测成熟脂肪细胞胰岛素抵抗效应。Western blot法检测两组细胞CHL1和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的表达水平以及丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）磷酸化水平，实时定量PCR（RT-PCR）法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-6的 mRNA表达水平。然后，选取6~8周龄的C57BL/6雄性小鼠24只，体重20~25 g，通过完全随机法分为常规饲料组（常规组）、高脂饲料组（高脂组）、过表达对照+高脂组和CHL1过表达+高脂组，每组6只。通过高脂饲料饲喂小鼠构建胰岛素抵抗小鼠模型，通过尾静脉注射慢病毒过表达CHL1。各组小鼠饲养4个月后称重，然后处死收集附睾白色脂肪并称重，苏木素-伊红染色观察小鼠附睾白色脂肪病理情况，免疫组织化学染色观察其CHL1表达情况，RT-PCR法检测小鼠附睾白色脂肪组织中CHL1、TNF-α、IL-6 mRNA的表达水平。结果:（1）细胞实验结果：Western blot结果示CHL1过表达组细胞中CHL1蛋白表达高于对照组（ P<0.01）；葡萄糖消耗实验结果示，CHL1过表达组细胞葡萄糖剩余量低于对照组（ P<0.05）；RT-qPCR结果示，CHL1过表达组细胞TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均低于对照组（ P均<0.01）；Western blot结果示，CHL1过表达组细胞GLUT4和p-AKT/AKT蛋白表达均高于对照组（ P均<0.01）。（2）动物实验结果：饲养4个月后高脂组和过表达对照+高脂组小鼠体重和附睾白色脂肪质量均高于常规组（ P均<0.01），CHL1过表达+高脂组则均低于过表达对照+高脂组（ P均<0.01）；苏木素-伊红染色结果示，高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪细胞体积大于常规组，CHL1过表达+高脂组则小于过表达对照+高脂组（ P均<0.01）；RT-qPCR结果示，高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪组织中IL-6和TNF-α mRNA表达水平均高于常规组（ P均<0.01），CHL1过表达+高脂组则均低于过表达对照+高脂组（ P均<0.05）；免疫组织化学染色半定量结果示，高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪组织中CHL1蛋白表达水平均低于常规组（以常规组的表达量为1，高脂组、过表达对照+高脂组的表达量分别为0.344、0.427），CHL1过表达+高脂组（表达量1.465）则高于过表达对照+高脂组；RT-qPCR结果示，高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪组织中CHL1 mRNA表达水平均低于常规组（ P均<0.01），CHL1过表达+高脂组则高于过表达对照+高脂组（ P<0.01）。 结论:CHL1可改善高糖高脂诱导的细胞和小鼠模型的胰岛素抵抗，其机制可能与抑制AKT激活和相关炎症反应有关。

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节及其机制。方法:体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化，同时给予不同浓度的MBL(0、1、10、20 μg/ml)干预。CCK-8法检测细胞增殖能力变化，油红O染色和细胞内甘油三酯含量测定法分析脂质积累情况。Western blot及qRT-PCR检测脂肪细胞成脂分化相关因子PPARγ及C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平。Western blot分析脂肪合成调控信号分子Akt的表达及磷酸化。结果:实验组各浓度MBL(0、1、10、20 μg/ml)对3T3-L1前脂肪细胞增殖都无影响。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化3 d，甘油三酯检测发现MBL处理组细胞内甘油三酯水平下降，并呈剂量依赖关系；油红O染色结果进一步显示，MBL处理组的脂滴数量显著减少，吸光度值也显著降低，同样呈现浓度依赖关系。Western blot及qRT-PCR检测结果证实，MBL处理组PPARγ和C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平均显著下降，呈剂量依赖性。在MBL干预下，Akt的磷酸化水平也明显下调。结论:MBL通过Akt信号通路调控3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化。

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin, MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制，为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性。方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化。油红O染色分析细胞分化成熟及脂滴积累情况，CCK-8法检测不同浓度MBL(0、1、5、10 μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖能力的影响，Western blot分析MBL(10 μg/ml)对不同分化阶段细胞自噬关键因子LC3B、Beclin1和p62蛋白的表达，油红O染色观察MBL干预下脂滴蓄积的改变，Western blot、qRT-PCR检测不同浓度MBL干预下自噬关键因子蛋白质及mRNA表达水平，基于自噬性降解的自噬流分析来进一步说明自噬活性，Western blot分析单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号分子的表达及磷酸化。结果:油红O染色结果显示经过10 d诱导的3T3-L1前脂肪细胞可达到完全分化状态；CCK-8结果表明实验组各浓度MBL(1～10 μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖无影响；Western blot及qRT-PCR检测发现在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中，MBL处理组自噬相关蛋白及mRNA表达水平增强，并呈一定浓度依赖关系；油红O染色显示不同分化阶段脂肪细胞内脂滴在MBL干预下呈不同程度的减少；荧光显微镜检测结果进一步证实MBL通过增加自噬体的合成增强脂肪细胞自噬活性；并且在MBL干预下，AMPK的磷酸化水平明显上调，mTOR的磷酸化水平明显下调，同样呈现浓度依赖关系。结论:MBL通过AMPK/mTOR信号通路加快3T3-L1脂肪细胞分化过程中的自噬进程，降低脂质积累，为治疗肥胖及其相关代谢疾病提供了一种潜在的功能途径。

目的:探讨前脂肪细胞对前列腺癌细胞侵袭力的影响及其调控机制。方法:建立前脂肪细胞及前列腺癌细胞的共培养体系，通过Transwell侵袭实验检测前脂肪细胞对前列腺癌细胞的侵袭能力影响。qRT-PCR检测前脂肪细胞及前列腺癌细胞的共培养后前列腺癌DU145和22RV1细胞中钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(CAMKK2)的表达情况。并且Transwell实验检测抑制CAMKK2后前脂肪细胞对前列腺癌细胞的侵袭力的影响。结果:前脂肪细胞3T3-L1可以促进前列腺癌细胞DU145及22RV1的侵袭( P<0.01)，且可以提高前列腺癌细胞中CAMKK2的表达水平( P<0.01)。抑制CAMKK2后，前脂肪细胞对前列腺癌细胞侵袭力的增强作用受到抑制。 结论:前脂肪细胞可能通过上调CAMKK2的表达来促进前列腺癌细胞的侵袭力。

目的:基于血糖漂移、脂肪细胞炎症反应、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路,探讨利拉鲁肽+双歧杆菌三联活菌胶囊用于胰岛素+口服药疗效不佳的肥胖 2 型糖尿病(T2DM)患者的效果与机制.方法:前瞻性选取 2022 年 6 月至 2023 年6 月该院收治的胰岛素+口服药疗效不佳的肥胖T2DM患者980例,采用单盲法,以随机数字表法分为利拉鲁肽组、联合组,各490例.两组患者均给予胰岛素+口服药;在此基础上,利拉鲁肽组患者给予利拉鲁肽,联合组患者给予利拉鲁肽+双歧杆菌三联活菌胶囊.比较两组患者的空腹血糖、餐后 2 h血糖(2 hBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、体重指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、C肽、血糖漂移、平均血糖波动幅度(MAGE)、血糖曲线下面积(AUCPG)、脂肪细胞炎症反应指标[分泌型卷曲相关蛋白 5(sfrp5)、内脂素(Visfatin)、趋化素(Chemerin)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素 6(IL-6)]、PI3K/Akt通路[磷酸化PI3K(P-PI3K)、磷酸化Akt(P-Akt)和核因子κB(NF-κB)]及安全性.结果:治疗 4、12 周后,联合组患者空腹血糖、2 hBG和HbA1 c水平低于利拉鲁肽组,BMI、HOMA-IR低于利拉鲁肽组,C肽水平高于利拉鲁肽组,血糖漂移系数、血糖漂移最大幅度、MAGE和AUCPG>7.8 mmol/L 低于利拉鲁肽组,sfrp5 水平高于利拉鲁肽组,Visfatin、Chemerin、TNF-α和IL-6水平低于利拉鲁肽组,P-PI3K、P-Akt水平高于利拉鲁肽组,NF-κB水平低于利拉鲁肽组,上述差异均有统计学意义(P<0.05).利拉鲁肽组患者的不良反应发生率为 1.22%(6/490),与联合组的 0.61%(3/490)相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论:利拉鲁肽+双歧杆菌三联活菌胶囊用于胰岛素+口服药疗效不佳的肥胖T2DM患者,能发挥降糖和减重双重作用,改善患者血糖漂移、胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能,抑制脂肪细胞炎症反应,调控PI3K/Akt通路,安全可靠,或可作为胰岛素+口服药疗效不佳的肥胖T2DM患者的一个治疗选择.

目的:利用网络药理学和实验验证探究三七总皂苷活性成分调控铁死亡干预口腔黏膜下纤维化的药效物质基础、潜在靶标及作用机制.方法:结合前期研究,通过文献检索确定网络药理学分析的三七总皂苷中的候选有效成分,并通过PubChem(有机小分子生物活性数据库,http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)检索有效成分,使用GeneCards数据库获得三七总皂苷活性成分的对应靶基因.在GeneCards、OMIM数据库中搜集口腔黏膜下纤维化的相关靶点.将三七总皂苷活性成分与口腔黏膜下纤维化的交集靶点通过Cytoscape 3.7.0软件绘制相应"活性成分-作用靶点"网络,并借助CytoHubba插件获得三七总皂苷活性成分的度值(Degree)排名,并对关键核心靶点进行分析.基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析通过DA-VID数据库进行.将三七总皂苷活性成分干预口腔黏膜下纤维化的靶基因与通过FerrDb数据库获取得到的铁死亡过程中的标记基因及调控因子取交集,获得通过调控铁死亡过程干预口腔黏膜下纤维化的三七总皂苷靶基因.利用AutoDockTool1.5.7软件进行化合物和核心靶点的分子对接.人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞系)体外培养后分为空白对照组、模型对照组、三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组;各组在相应不含药或含药的完全培养液中培养24 h后收集细胞;采用Western blot法检测各组细胞I型胶原(COL-Ⅰ)、低氧诱导因子-1(HIF-1α)、轻链溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达;透射电镜观察细胞线粒体形态学变化.结果:共筛选出三七总皂苷中5个活性成分,包括人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、三七皂苷R1和人参皂苷Re,以及前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、一氧化氮合酶2(NOS2)等20个作用靶标.三七总皂苷中的5个活性成分与RNA聚合酶Ⅱ启动子对pri-miRNA转录的正向调控、细胞对缺氧的反应及转化生长因子受体信号通路等生物过程,核浆、胞质和胞核等细胞组成,酶结合、相同的蛋白质结合和RNA聚合酶ii序列特异性DNA结合转录因子结合等分子功能密切相关;KEGG发现其可通过介导PI3K-AKT信号通路、癌症途径、脂肪细胞因子信号通路、肿瘤中PD-L1表达和PD-1检查点等信号通路调控铁死亡,从而发挥干预口腔黏膜下纤维化的作用.细胞实验结果表明,模型对照组较空白对照组COL-Ⅰ、HIF-1α蛋白表达显著上调,SLC7A11、GPX4蛋白表达显著下调(P＜0.01);与模型对照组比较,三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组COL-Ⅰ、HIF-1α蛋白表达明显下调(P＜0.05),SLC7A11、GPX4蛋白表达明显上调(P＜0.05).空白对照组细胞线粒体形态结构正常;模型对照组细胞线粒体形态结构萎缩,线粒体变小,嵴明显减少,呈典型的铁死亡表现;三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组细胞线粒体形态结构逐渐恢复正常.结论:三七总皂苷具有多成分、多靶点、多通路干预口腔黏膜下纤维化的作用特点,下调HIF-1α信号通路抑制铁死亡可能是其抗纤维化重要机制之一.

目的 (1)探究锂基生物玻璃水凝胶,赋予介孔生物玻璃材料促成骨、促血管生成和抑制脂肪生成等多重生物医学功能.(2)利用3D打印技术制作导航模板,精确定位股骨头坏死病灶区域和清除病灶,将锂基生物玻璃水凝胶精确注入,观察其修复股骨头坏死的作用.方法 利用明胶和甲基丙烯酸酐制备了甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)及锂基生物玻璃水凝胶(GelMA and Li-mesoporous bioglass,GM/M-Li).扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)对材料进行表征分析;同时,通过细胞活/死染色、细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCK-8)及细胞形态观察评估材料的生物相容性;另外,使用免疫荧光染色、碱性磷酸酯酶染色、茜素红染色、成血管实验、油红O染色评估材料的成骨分化能力、成血管能力和抑制脂肪生成的能力.体内成功建立了兔股骨头坏死模型,利用3D导航模板联合髓芯减压术将坏死骨去除后填充GM/M-Li水凝胶.通过苏木素伊红(hematoxylin eosin,HE)染色、油红O染色、免疫组化染色验证其成骨、成血管和抑制脂肪生成能力.结果 SEM结果显示GM/M-Li水凝胶材料为三维多孔的结构;TEM结果表明,M-Li材料为纳米级别;离子释放实验证明了 GM/M-Li水凝胶中的锂元素,同时具有缓释作用;细胞活/死染色、CCK-8证明了 GM/M-Li水凝胶材料具有良好的生物相容性;体外成骨、成血管、抑制脂肪生成实验证实,材料中锂离子的释放有利于骨髓间充质干细胞的成骨分化、人脐静脉血管内皮细胞的小管形成,抑制了脂肪前体细胞的脂肪形成.体内HE染色和免疫荧光验证了 GM/M-Li水凝胶有效促进了骨组织、血管再生;通过油红O染色验证了 GM/M-Li水凝胶的抑制脂肪能力.结论 利用3D打印技术制作导航模板,将GM/M-Li精确注入股骨头坏死病灶区域和清除病灶.因GM/M-Li水凝胶具有良好的生物相容性,其可通过调节骨髓间充质干细胞成骨方向分化,促进股骨头坏死中骨缺损的重建,同时促进了血管的生成,减少脂肪细胞的浸润.

目的 研究雷公藤红素(celastrol,Cela)对前体脂肪细胞(3T3-L1)成脂分化的抑制作用及其具体机制.方法 采用CCK-8法确定雷公藤红素处理3T3-L1细胞的最佳浓度;油红O染色及免疫荧光法(脂肪细胞标志蛋白Perilipin1,Adiponectin)检测雷公藤红素对 3T3-L1成脂分化不同时期的抑制作用;Western Blot(WB)检测不同浓度雷公藤红素处理后3T3-L1细胞中调控脂代谢以及分化相关蛋白的表达;对未分化(Con)、分化第1天(MDI)、分化第1天同时给药250 nmol·L-1 雷公藤红素(MCT)的3T3-L1细胞进行WB检测以及microRNA(miRNA)测序,qPCR验证筛选得到的miRNA,进行KEGG与GO富集分析;过表达mmu-miR-5121 mimics和inhibitor,WB检测相关蛋白的变化,油红O 染色检测分化结果.结果 Cela处理3T3-L1细胞的最佳浓度为250 nmol·L-1 和500 nmol·L-1;油红O染色及免疫荧光结果表明250 nmol·L-1 与500 nmol·L-1Cela对3T3-L1成脂分化均有显著抑制作用,250 nmol·L-1 在3T3-L1成脂分化早期(第1天)便能显著抑制3T3-L1成脂分化;250 nmol·L-1Cela处理3T3-L1 24 h后,能显著抑制3T3-L1中DFCP1、FAS、ACC、PPARγ等蛋白的表达;分化第1天FAS与ACC表达升高,采用250 nmol·L-1 Cela处理后,ACC、FAS蛋白表达显著降低;miRNA测序筛选后qPCR验证结果表明mmu-miR-5121在分化第1天减少,但Cela处理后含量增加.转染5121 inhibitor提高了FAS与ACC的含量,5121 mimics则呈现相反作用.单独转染5121 inhibitor可使得3T3-L1分化成熟,而分化同时添加5121 mimics可以有效抑制分化.并且 250 nmol·L-1 Cela可以抑制5121 inhibitor引起的分化.结论 250 nmol·L-1 雷公藤红素作用于3T3-L1成脂分化早期可显著抑制3T3-L1分化,其可能通过上调mmu-miR-5121的含量,抑制FAS与ACC的表达发挥作用.

目的 探讨柚皮苷(Nar)对棕榈酸(PA)处理后成熟脂肪细胞炎症反应的影响及机制.方法 3T3-L1 前脂肪细胞经成脂化诱导为成熟脂肪细胞后采用不同浓度(0、25、50、100、200 μmol·L-1)PA处理细胞 48 h,CCK-8 检测细胞活力,ELISA检测细胞上清 IL-6 水平,确定后续实验最佳 PA 浓度.不同浓度(0、12.5、25、50、100 μmol·L-1)Nar处理成熟脂肪细胞,CCK-8 检测细胞活力,确定后续实验最佳 Nar 浓度.单独 PA 处理实验分为 2 组:Ctrl组、PA组;联合 Nar 处理实验分为 4 组:Ctrl 组、PA 组、Nar 组、PA+Nar 组;western blotting 法检测各组p-ERK1/2和DRP1 蛋白表达水平.联合线粒体裂变抑制剂 Mdivi-1 处理实验分为 7 组:Ctrl 组、PA 组、Nar 组、Mdivi-1 组、PA+Nar组、PA+Mdivi-1 组、PA+Nar+Mdivi-1 组,ELISA和 western blotting 法分别检测 7 组细胞上清IL-6 水平和p-ERK1/2、DRP1 蛋白表达水平.结果 后续实验PA和Nar分别选择 50 和 25 μmol·L-1.与Ctrl组比较,PA组 p-ERK1/2 和DRP1 表达水平均升高(P＜0.001).与 PA 组比较,PA+Nar 组、PA+Mdivi-1组、PA+Nar+Mdivi-1 组 IL-6 水平、p-ERK1/2 和DRP1 表达均更低(P＜0.05);与 PA+Nar 组比较,PA+Nar+Mdivi-1 组IL-6 水平差异无统计学意义(P＞0.05),但p-ERK1/2 和DRP1 表达水平均降低(P＜0.05).结论 Nar可减轻PA处理后成熟脂肪细胞的炎症反应,其机制是通过抑制 ERK1/2 激活和DRP1 表达实现的.

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对脂多糖的诱导3T3-L1脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的调节作用及机制.方法:诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色分析细胞分化程度,使用CCK-8检测分化过程中MBL(1、10、20 μg/ml)及LPS对细胞增殖能力的影响;ELISA检测细胞炎症因子IL-6、TNF-α含量,Western blot检测TNF-α、IL-6及TLR4/NF-κB信号通路中蛋白表达,并分析Akt、IRS-1 try蛋白磷酸化及GLUT4表达情况;流式细胞术检测MBL对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的调节作用.结果:油红O染色显示,12 d时,3T3-L1前体脂肪细胞已诱导为完全成熟的脂肪细胞;CCK-8结果证实,在细胞分化全过程,不同浓度的MBL(1、10、20 μg/ml)及LPS对其增殖能力无明显影响;ELISA及Western blot结果显示在脂肪细胞分化至成熟过程中,MBL处理均可抑制LPS诱导的炎症因子分泌,且其抑制作用呈浓度依赖性;Western blot结果显示MBL以浓度依赖的方式抑制LPS诱导的IκB、IKK磷酸化和TLR4以及核NF-κB表达,且MBL可增强Akt和IRS-1磷酸化,增加GLUT4表达;流式细胞术结果显示MBL可以在一定程度上解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的抑制,并呈一定的浓度依赖性.结论:在脂肪细胞中,MBL通过TLR4/NF-κB信号通路抑制细胞炎症因子分泌,发挥抑炎作用;MBL通过抑制炎症因子分泌,解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖和IRS-1/Akt信号的抑制,减轻胰岛素抵抗.