目的:探究剪切因子3B亚基1（subunit 1 of splicing factor 3b，SF3B1）、泛素结合酶E2变体2（ubiquitin conjugating enzyme E2 V2，UBE2V2）和组蛋白甲基转移酶（SET domain-containing protein 2，SETD2）的表达与老年骨质疏松性椎体骨折（osteoporotic vertebral fracture，OVF）的相关性。方法:收集2020年8月至2021年8月烟台市烟台山医院31例骨质疏松性椎体骨折（vertebral fracture，VF）（VF组）和16例骨质疏松非椎体骨折（non vertebral fracture，NVF）（NVF组）的老年患者（年龄>60岁）的外周血样本，提取RNA进行转录组测序筛选差异表达基因。通过基因本体论（gene ontology，GO）分析、蛋白相互作用（protein protein interaction，PPI）网络分析、ROC曲线分析筛选VF相关基因。采用qRT-PCR检测基因的表达水平。结果:相对于NVF组，VF中有822个差异表达基因，691个上调，131个下调。qRT-PCR结果显示，相对于NVF患者（1.55±0.33）（1.70±0.33）（1.64±0.33），VF患者外周血中SF3B1（1.83±0.23）（ t=2.84， P=0.008）、UBE2V2（2.24±0.43）（ t=3.91， P<0.001）的表达增强，SETD2（1.18±0.46）（ t=3.25， P=0.003）表达降低。ROC曲线分析显示，SF3B1、UBE2V2和SETD2在VF中的AUC分别为0.803 4（ P=0.007）、0.814 5（ P=0.005）和0.786 3（ P=0.001 4）。 结论:SF3B1、UBE2V2和SETD2与老年OVF高度相关，对OVF的诊断和预测具有重要价值。

目的 探讨EIF2B3突变的少突胶质细胞是否存在对内质网应激(ERS)的不耐受,检测未折叠蛋白反应(UPR)通路的变化,为了解白质消融性白质脑病(VWM)的发病机制提供线索.方法 本研究利用转染EIF2B3野生型或突变型c.1037T＞C全长cDNA慢病毒载体的人类少突胶质细胞系,Thapsigargin对其进行ERS诱导后,通过细胞增殖-毒性检测试剂盒实验反映细胞增殖活力,检测凋亡相关分子Caspase-3剪切体的表达反映细胞凋亡水平,来验证野生与突变细胞对ERS的耐受性,并比较二者在基础状态及ERS诱导后不同时间点UPR激酶样内质网激酶(UPR-PERK)通路各分子指标的变化.结果 1.EIF2B3突变型少突胶质细胞对ERS不耐受,表现为ERS刺激后凋亡的增加和活力的显著下降.2.EIF2B3突变型少突胶质细胞存在UPR通路的过度激活.3.基础状态下UPR-PERK通路分子磷酸化α亚基的真核翻译起始因子2(P-eIF2α)、激活转录因子4、CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)和生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)的水平不同程度高于野生组.4.ERS刺激24h后,凋亡相关的UPR分子(CHOP和GADD34)和抑制蛋白翻译的P-eIF2α在野生型细胞中表达下降,而在突变细胞中持续高表达.结论 EIF2B3突变的人少突胶质细胞对ERS不耐受,这种不耐受与突变细胞存在UPR-PERK通路的过度持续激活,引起凋亡性的细胞死亡相关.减轻突变细胞的内质网负荷或稳定UPR的过度激活有望对疾病进展起到干预作用.

Agrin是一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan ,HSPG) ,作为一种重要的细胞外基质(extracellular matrix ,ECM )成分 ,在骨骼肌发育[1 ] 、神经-肌接头形成[2 ] 、造血[3 ] 、炎症[4 ]等过程中发挥重要作用.人 A g rin由位于1 号染色体的AGRN基因编码 ,含有9个卵泡抑制素样结构域、4个表皮细胞生长因子(epidermal grow th factor , EG F )样结构域、1个层粘连蛋白B样结构域和3个层粘连蛋白G样结构域 ,还含有2个富含丝苏氨酸的区域[2] .AGRN基因通过不同的剪切模式,可产生长与短2种具有组织表达特异性的不同亚型.2种亚型氨基端起始长度不同 ,稍短的亚型有氨基端跨膜区域 ,为膜蛋白,主要表达于大脑中 ;稍长的亚型无氨基端跨膜区域 ,为存在于细胞外基质的分泌蛋白 ,广泛表达于大脑以外的多种组织中 ,如神经-肌接头、心脏等[2 ] .

目的 探讨丁酸钠对RAW264.7细胞活性及破骨细胞分化的影响. 方法 应用0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mmol/L丁酸钠处理RAW264.7细胞,每种浓度设置3个复孔,细胞计数试剂盒-8检测其对RAW264.7细胞的毒性.活细胞染色液检测0、0.25、0.50、1.00mmol/L丁酸钠对RAW264.7细胞凋亡的影响.应用破骨细胞分化因子将RAW264.7细胞诱导成破骨细胞,实验分为两组(n=3):诱导成熟后实验组加入1.00 mmol/L丁酸钠处理,对照组培养基中加入等体积溶剂,观察并比较两组破骨细胞的数量和骨再吸收区域面积.蛋白质免疫印迹法检测0、0.25、0.50、1.00 mmol/L丁酸钠对RAW264.7细胞中核因子活化B细胞κ-轻链增强子(NF-κB)相关信号通路的作用. 结果 与0 mmol/L丁酸钠比较,1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mmol/L丁酸钠均可显著降低RAW264.7细胞的活性,差异均有统计学意义(P＜0.05).1.00 mmol/L丁酸钠处理RAW264.7细胞24 h后可以诱导细胞凋亡.对照组与实验组破骨细胞数量分别为9.33±2.08、4.67±1.16,差异有统计学意义(t=3.395,P=0.027);破骨细胞骨再吸收区域面积百分比分别为52.43％±5.38％、14.28％±2.72％,差异有统计学意义(t=10.970,P＜0.001).与其他浓度丁酸钠相比,1.00 mmol/L丁酸钠可使NF-κB激酶的α/β亚基磷酸化水平降低,细胞质中亚基p65含量增多,B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白、被剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达量及组蛋白H3的乙酰化均升高. 结论 随着丁酸钠浓度的升高,NF-κB的活性随之受到抑制,RAW264.7细胞凋亡增多.1.00 mmol/L丁酸钠可减少破骨细胞的生成和骨再吸收区域面积.

目的:探讨有氧运动对APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织神经细胞凋亡的影响,以及是否通过PI3K/Akt信号通路发挥作用,为阐明有氧运动防治阿尔茨海默症提供一定的理论依据.方法:40只雄性APP/PS1小鼠随机分为安静组(T-SE,n=10)、运动组(T-EX,n=10)、GNE-317处理安静组(T-SEG,n=10)和GNE-317处理运动组(T-EXG,n=10).T-EX和T-EXG组小鼠进行为期8周的跑台训练,T-SEG和T-EXG组小鼠给予GNE-317处理8周.最后一次训练结束后48小时,分离所有小鼠大脑皮质和海马组织.通过TUNEL染色观察各组小鼠大脑皮质和海马组织细胞凋亡情况;通过Western blot检测各组小鼠大脑皮质和海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关促凋亡蛋白(Bad)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切形式含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-7、Caspase-9、线粒体细胞色素C(Cytochrome C)蛋白含量及磷酸化水平.结果:(1)8周跑台训练后,T-EX组大脑皮质和海马组织中PI3K p110和p85亚基的蛋白含量及Akt Thr308和Ser473位点的磷酸化水平均高于T-SE组(P<0.01);T-EX组TUNEL染色阳性细胞数量低于T-SE组(P<0.05);T-EX组抗凋亡因子Bcl-2的含量高于T-SE组(P<0.05),而促凋亡因子Bad、Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-7和Cleaved Caspase-3的含量均低于T-SE组(P<0.05).(2)经GNE-317处理后,T-SEG和T-EXG组Akt Thr308和Ser473位点的磷酸化水平分别低于T-SE和T-EX组(P<0.05);T-SEG和T-EXG组TUNEL染色阳性细胞数量分别高于T-SE和T-EX组(P<0.05);T-SEG和T-EXG组抗凋亡因子Bcl-2的含量分别低于T-SE和T-EX组(P<0.05),而促凋亡因子Bad、Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-7和Cleaved Caspase-3的含量分别高于T-SE和T-EX组(P<0.05).结论:有氧运动通过激活APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织中PI3K/Akt信号通路活性,提高了抗凋亡因子Bcl-2的含量,同时降低促凋亡因子Bad、Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-7和Cleaved Caspase-3的含量,从而有效抑制神经细胞凋亡.

目的 观察人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞基因表达的影响,筛查人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞中差异表达的基因.方法 对乳腺癌SKBR3细胞进行样本准备,获得去rRNA链特异性转录组;测序获得原始图像文件经碱基识别后转化为原始序列文件;通过质量分析评估测序数据是否适合进行生物信息学分析,应用剪切转录产物比对软件(STAR)对测序数据与参考基因组进行比对;基于美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库,对人参皂苷Rh1干预下乳腺癌SKBR3细胞基因的表达及差异基因的表达进行分析.结果 高通量测序共筛查出基因26978个,其中根据NCBI数据库注释为mRNA的基因19229个,注释为lncRNA的基因4385个,高通量测序结果表明差异表达基因6580个,以Fold change>1为上调,<-1为下调,上调差异基因3403个,其中差异表达显著基因为小整合膜蛋白11A(SMIM11A)、嘌呤能受体P2X1(P2RX1)、碳酸酐酶9(CA9)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基 δ 核糖核酸2(PIK3CD-AS2)、血管活性肠肽受体2(VIPR2)、非特征LOC100506314(LOC100506314)、长基因间非蛋白编码核糖核酸1389(LINC01389)、表皮生长因子受体激酶底物8-样蛋白3(EPS8L3)、视网膜筋膜基因2(FSCN2)、肠壁碱性磷酸酶(ALPI);下调差异表达基因3177个,其中差异表达显著基因为溶质载体家族1成员3(SLC1A3)、羟基类固醇17-β 脱氢酶1(HSD17B1)、碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)、溶质载体家族25成员51(SLC25A51)、β-1,3-半乳糖基转移酶6(B3GALT6)、非特征LOC101929882(LOC101929882)、δ 连环蛋白家族成员(ARVCF)、蛋白磷酸酶2A催化亚基 α(PPP2CA)、星形胶质细胞上调基因-1(AEG1)、磷脂酰肌醇-4-激酶B(PI4KB).结论 应用高通量测序技术可筛查出人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞增殖相关的差异性表达基因,并对筛选出的重要基因进行总结和分类.

目的 构建SF3B1突变等位基因敲除的人葡萄膜黑色素瘤细胞模型,筛选靶向抑制SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物.方法 通过主成分分析法对来自TCGA数据库的葡萄膜黑色素瘤患者分成SF3B1野生型和突变型两组进行转录组可变剪接分析,研究SF3B1突变对可变剪接的影响.通过CRISPR-Cas9技术敲除Mel202细胞株的SF3B1突变等位基因,Sanger测序明确基因编辑的序列.MTT法和克隆形成实验检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的增殖,RT-PCR琼脂糖电泳结合Sanger测序检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的可变剪接事件.MTT法从上市药物库和生物活性化合物库筛选对SF3B1突变细胞具有选择性抑制活性的药物.结果 选择性敲除Mel202细胞SF3B1突变等位基因促进了细胞的增殖(5.47±0.32 vs 10.17±0.27),改变了ZDHHC16和DYNLL1转录本的可变剪接.化合物库筛选结果显示13个化合物对SF3B1突变的Mel202细胞具有选择性的抑制活性(Fold change≥2),其中上市药物tetrandrine和lapatinib显示了较好的量效曲线.结论 本研究为SF3B1突变的葡萄膜黑色素瘤患者提供了细胞筛选模型和潜在的个体化治疗药物.

目的 探讨剪切因子3B亚基1(SF3 B1)基因在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤分期、病理程度相关性.方法 回顾性分析2017年9月至2019年8月空军军医大学第一附属医院行根治术治疗的48例胰腺癌患者临床资料,对术中切除的癌组织及癌旁组织行免疫组化染色,比较SF3B1基因在胰腺癌、癌旁组织中的阳性率;根据TNM分期将胰腺癌分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期,根据细胞分化程度分为高分化、中分化、低分化及未分化组,比较胰腺癌不同TNM分期、不同分化程度的SF3B1阳性率;采用Pearson相关分析SF3B1基因阳性率与胰腺癌分化程度、TNM分期的关系.结果 癌旁组织中的SF3B1基因阳性率(77.08％)高于癌灶组织(16.67％),差异有统计学意义(P＜0.05).TNM分期为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期的患者SF3B1阳性率分别为100.00％、36.36％、6.25％、0.00％,高分化、中分化、低分化、未分化的患者SF3B1阳性率分别为31.25％、13.33％、8.33％、0.00％.Pearson分析显示,SF3B1基因阳性率与胰腺癌分化程度、TNM分期的相关系数分别为0.368、-0.548(P均＜0.001).结论 胰腺癌患者癌旁组织中的SF3B1基因阳性率高于癌灶组织,SF3B1基因阳性率与胰腺癌分化程度呈正相关,SF3B1基因阳性率与胰腺癌TNM分期呈负相关.

目的 观察miR-210-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的调控作用并分析其分子机制.方法 将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、脓毒症组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组、脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,每组10只.除对照组外均采用盲肠结扎穿孔术建立小鼠脓毒症模型,对照组小鼠采用不结扎、不穿刺的剖腹手术进行对照.脓毒症+miR-210-5p激动剂组、脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组小鼠在建模前1 d及建模术后即刻分别经尾静脉注射miR-210-5p激动剂agomir及miR-210-5p拮抗剂antagomir,对照组和脓毒症组在相同时间经尾静脉注射等体积生理盐水.比较各组心功能指标左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS),心肌组织病理改变,血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI),细胞凋亡率,凋亡蛋白剪切半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)表达,髓过氧化物酶(MPO)活性,炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达,抗氧化物超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物丙二醛(MDA)表达及超氧化物阴离子荧光探针(DHE)荧光强度,沉默调节蛋白1(SIRT1)通路相关蛋白SIRT1、叉头框蛋白O1(FOXO1)、乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)、核因子κB亚基p65(NF-κB p65)、乙酰化NF-κB p65(Ac-NF-κB p65),计算Ac-FOXO1/FOXO1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65.结果 小鼠LVEF、LVFS对照组>脓毒症+miR-210-5p激动剂组>脓毒症组>脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.01).HE染色显示,小鼠心肌组织病理损伤对照组<脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组.小鼠血清CK-MB、cTnI水平对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05).小鼠心肌细胞凋亡率对照组<脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,cleaved Caspase-3蛋白表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05).小鼠心肌组织MPO活性及TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05).小鼠心肌组织SOD、GSH、GSH-Px表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组>脓毒症组>脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,心肌组织MDA、DHE荧光强度对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05).小鼠心肌组织SIRT1蛋白表达对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组>脓毒症组>脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组,Ac-FOXO1/FOXO1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65对照组、脓毒症+miR-210-5p激动剂组<脓毒症组<脓毒症+miR-210-5p拮抗剂组(P均<0.05).结论 miR-210-5p可通过抑制心肌组织炎症反应和氧化应激减轻脓毒症诱导的小鼠心肌损伤,其分子机制可能与激活SIRT1信号通路、减轻SIRT1下游分子NF-κB p65及FOXO1乙酰化程度有关.