目的:研究生理及尿毒症状态下剪切力对静脉内皮细胞中，KLF2和eNOS表达的影响，探讨导致静脉内皮细胞功能紊乱的机制。方法:分别在生理状态和尿毒症状态下，在平行板流动腔内模拟不同剪切力，用剪切力作用各组静脉内皮细胞4、12、24 h。采用免疫组化荧光染色技术和实时荧光定量PCR技术检测KLF2及eNOS的表达情况。结果:在生理状态下，KLF2明显受剪切力作用调节，高强度剪切力和生理强度剪切力会上调KLF2的表达，而低强度剪切力和振荡剪切力会下调KLF2的表达，但随作用时间的延长，KLF2的表达也会有所上调。在尿毒症状态下，KLF2表达明显被抑制，即使再给予高剪切力作用，KLF2水平也不及正常生理状态；在低剪切力及振荡剪切力作用下，KLF2表达更明显地被抑制。KLF2主要在细胞核内表达，随着剪切力的作用，KLF2也在细胞质中表达，而eNOS主要在细胞质和细胞核内呈颗粒样表达。结论:动静脉内瘘术后在尿毒症环境及振荡剪切力的多重因素作用下，KLF2和eNOS的表达受到抑制，可能是导致静脉内皮细胞功能紊乱、内膜增生、自体动静脉内瘘失功发生和发展的主要机制。

目的:探讨序列相似性家族134成员B（FAM134B）介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖（LPS）诱导的小鼠树突状细胞（DC）凋亡的影响，为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法:采用实验研究方法。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进行实验。将DC分为LPS刺激0 h（不刺激）组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组，采用1 μg/mL LPS（浓度下同）培养相应时间后，采用蛋白质印迹法检测FAM134B、微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）以及转运蛋白SEC61B蛋白表达，并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值（样本数为3）。将DC分为进行相应处理的磷酸盐缓冲液（PBS）组与LPS组，培养24 h，采用免疫荧光法检测FAM134B表达情况及其分别与溶酶体探针、LC3B共定位情况，通过透射电子显微镜观察细胞内自噬溶酶体数量。将DC分为转染含 FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的敲减FAM134B组与转染空载慢病毒的空载体组，转染后72 h，于倒置荧光相差显微镜下观察细胞荧光表达情况，另将仅常规培养的DC设为空白对照组并于相应时间点行相同观察。将DC分为单纯PBS组、单纯LPS组，将成功转染含 FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的DC分为敲减FAM134B+PBS组、敲减FAM134B+LPS组，将成功转染空载慢病毒的DC分为空载体+PBS组、空载体+LPS组，给予相应刺激并培养24 h，采用蛋白质印迹法检测FAM134B蛋白表达（样本数为3），通过流式细胞术检测细胞凋亡率（样本数为3），行Hoechst染色观测细胞凋亡情况并计算凋亡率（样本数为5），采用蛋白质印迹法检测剪切型胱天蛋白酶3（caspase-3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达并计算Bax/Bcl-2比值（样本数为5）。对数据行单因素方差分析、LSD检验、析因设计方差分析。 结果:与LPS刺激0 h组相比，LPS刺激12 h组和LPS刺激24 h组细胞中FAM134B蛋白表达均明显升高（ P<0.05），LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组细胞中SEC61B蛋白表达均明显降低（ P<0.05），LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值均明显升高（ P<0.05），其中LPS刺激24 h组细胞中3个蛋白的变化最显著，将24 h作为后续LPS刺激时长。培养24 h，与PBS组相比，LPS组细胞中FAM134B的表达及其与LC3B及溶酶体探针的共定位均显著增强，自噬溶酶体数量明显增多。空载体组与敲减FAM134B组细胞转染后72 h均表现出高强度荧光，而空白对照组细胞在相应时间点无荧光表现。培养24 h，敲减FAM134B+PBS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组和空载体+PBS组明显降低（ P值均<0.05），敲减FAM134B+LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯LPS组和空载体+LPS组显著降低（ P值均<0.05），单纯LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组明显升高（ P<0.05），空载体+LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较空载体+PBS组明显升高（ P<0.05）。培养24 h，流式细胞术检测显示，单纯PBS组、单纯LPS组、空载体+PBS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+PBS组与敲减FAM134B+LPS组细胞凋亡率分别为（13.3±0.8）%、（32.6±4.3）%、（17.0±1.5）%、（51.7±3.3）%、（52.4±3.1）%与（62.3±2.6）%。培养24 h，与单纯LPS组和空载体+LPS组相比，敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（ P<0.05）；与对应的PBS处理组即单纯PBS组、空载体+PBS组、敲减FAM134B+PBS组相比，单纯LPS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（ P<0.05）。 结论:小鼠DC中FAM134B介导的内质网自噬在LPS刺激下活化增强并于24 h达活化高峰，且活化的内质网自噬对细胞凋亡具有显著抑制效应。

传统正畸托槽及附件粘结前的牙釉质表面处理方法为磷酸酸蚀法，其缺点是会造成牙釉质表面脱矿而使牙釉质表面抗酸性及硬度下降，患龋率增加。近年来铒(Erbium，Er)激光因其独特的物理性质而被越来越多的应用于正畸托槽粘结前的牙釉质表面蚀刻。已有研究证明适宜参数下，Er激光蚀刻牙釉质可以获得与磷酸酸蚀接近的托槽抗剪切强度。同时，大量研究表明Er激光蚀刻可以增强牙釉质表面抗酸性，降低托槽周围患龋率。然而也有研究显示了相反的结果，关于Er激光蚀刻对牙釉质抗酸性作用的研究结论尚存争议。本文系统综述了Er激光蚀刻对正畸粘结后牙釉质抗酸性作用及作用机制的研究进展。

目的:观察超声造影（CEUS）联合声触诊组织定量技术（VTQ）在小肾肿瘤诊断中的应用价值。方法:回顾性分析东阳市人民医院2019年7月至2021年6月收治的小肾肿瘤患者79例的临床资料，以病理组织学检测结果为金标准，CEUS动态图像绘制肿瘤时间-强度曲线（TIC），并获取造影剂到达肿瘤病灶的起始时间、达峰时间、增强速率、消退时间，绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线），分析CEUS鉴别诊断小肾肿瘤良恶性的准确性，VTQ检查获得肿瘤及周围背景肾组织剪切波速度（SWV），绘制ROC曲线，分析VTQ鉴别诊断小肾肿瘤良恶性的准确性，分析CEUS联合VTQ鉴别诊断小肾肿瘤良恶性的准确性。结果:79例小肾肿瘤患者中，良性肿瘤27例，其中肾血管平滑肌脂肪瘤18例、肾嗜酸性细胞瘤9例；恶性肿瘤52例，其中肾透明细胞癌31例、肾乳头型细胞癌14例、肾嫌色细胞癌7例；CEUS联合VTQ诊断小肾肿瘤良恶性的敏感度为76.90%，特异度为100.00%，ROC曲线下面积为0.934，95% CI为0.855~0.977。 结论:CEUS联合VTQ能应用于小肾肿瘤的临床诊断中，具有较高的价值。

目的:研究中性粒细胞外陷阱（NETs）在程序性细胞死亡受体-1（PD-1）抑制剂相关心肌炎中的作用，探索靶向NETs的免疫检查点抑制剂相关心肌炎（ICIAM）治疗靶点。方法:选6周龄健康雄性BALB/c小鼠30只，分别编号并随机分为对照组（ n=10）、模型组（ n=10）和治疗组（ n=10）。除对照组外，分别于第1和7天给小鼠皮下注射100 μl含有250 μg小鼠心肌肌钙蛋白I（TnI）肽段的弗氏完全佐剂（CFA）。第8天起每2天腹腔注射一次PD-1抑制剂（15 μg/只），共5次。PF-1355治疗组从造模开始前1天起连续16 d腹腔注射PF-1355（50 mg·kg -1·d -1）。观察各组小鼠一般状态，实时荧光定量聚合酶链式反应（RTFQ-PCR）评估中性粒细胞相关趋化因子、NETs和焦亡相关因子、促炎细胞因子的转录水平调控，免疫组化、免疫荧光检测和蛋白质印迹法反映焦亡相关分子的蛋白水平变化，超声心动图展示主要心功能指标改变，心肌病理对比炎性浸润程度。 结果:模型组小鼠较对照组小鼠心肌NETs免疫荧光强度明显增加（2.49±0.08和0.99±0.26， P<0.001）。模型组心肌组织焦亡相关NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cleaved-Caspase 1）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase 1）、剪切的Gasdermin-D（cleaved-GSDMD）、Gasdermin-D（GSDMD）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）的蛋白表达水平较对照组上调（均 P<0.05）。PF-1355治疗后，相比于模型组，治疗组小鼠左心室射血分数（LVEF）（73.58%±5.31%和58.12%±3.19%， P<0.001）、左室缩短分数（LVFS）（39.78%±4.31%和33.89%±2.19%， P<0.001）升高；苏木精-伊红染色结果显示与模型组相比，治疗组炎性浸润面积百分比减少（30.12%±3.57%和14.92%±2.46%， P<0.001）；治疗组免疫荧光NETs生成较模型组减少（2.52±0.04和1.03±0.05， P<0.001）；治疗组NLRP3等焦亡相关分子水平较模型组下调（均 P<0.05）。 结论:在PD-1抑制剂相关的心肌炎中，NETs通过激活NLRP3炎症小体导致心肌细胞焦亡。特异性髓过氧化物酶抑制剂PF-1355通过调控NETs来下调NLRP3炎症小体激活，可能进一步挽救和逆转NETs介导的心肌焦亡损伤。

目的:采用不同的流感病毒骨架构建表达分泌荧光素酶(Gaussia luciferase，Gluc)的重组流感病毒，同时研究其生长特性、遗传稳定性、Gluc表达水平、体外抗流感药物活性。方法:在PR8NA的C端插入猪捷申病毒2A肽(porcine teschovirus-2A autocleavage peptide, P2A)自剪切位点及Gluc编码基因，其余7个质粒分别来源于A/Puerto Rico/8/34(PR8) (H1N1)和A/WSN/1933(WSN) (H1N1)，通过流感病毒反向遗传学8质粒系统拯救重组病毒，分别命名为PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN。检测重组病毒遗传稳定性；对比PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN的荧光强度；检测重组病毒的生长动力学；同时测定PR8NAGluc/WSN荧光强度与半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose，TCID 50)的相关性及对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟的体外抗流感药物活性。 结果:通过反向遗传学成功拯救出以PR8和WSN为骨架表达Gluc的重组病毒。相对于PR8骨架，以WSN为骨架明显提高了Gluc的表达且遗传稳定，复制动力学比野生型稍低。PR8NAGluc/WSN荧光强度与TCID 50有较好的相关性，其对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟具有良好的敏感性。 结论:以WSN为骨架的重组病毒荧光表达强度比PR8骨架高，为高通量筛选抗流感病毒药物及研发流感病毒载体疫苗提供参考。

目的:探讨负压对多晶颗粒表面改性氧化锆陶瓷与树脂粘接强度的影响。方法:制备120个预烧结氧化锆圆片，用随机数字表法随机分成对照组和喷砂组以及30、50、70 s酸蚀组（每组24个）。对照组、喷砂组试件致密烧结前无额外处理；30、50、70 s酸蚀组分别浸入氢氟酸溶液30、50、70 s，再置于CaCl 2溶液中90 s，80 ℃ NaOH溶液中浸泡2 h。5组试件致密烧结后，喷砂组喷砂，用扫描电镜观察5组试件表面形态，测试表面粗糙度。根据涂布粘接剂后是否施加负压，每组用随机数字表法随机分成两个亚组，负压亚组和常压亚组（每亚组12个）。将预制树脂柱粘接至氧化锆试件上，扫描电镜观察粘接试件纵断面（每亚组1个试件），测试剪切强度（每亚组11个试件），即粘接强度，并分析其破坏模式。 结果:对照组试件表面光滑，粗糙度为（0.24±0.11） μm，喷砂组试件喷砂处理后形成粗糙表面，粗糙度为（0.95±0.12） μm，30、50、70 s酸蚀组试件氧化锆表面产生多晶颗粒，随着酸蚀时间延长，试件表面多晶颗粒增加，粗糙度分别为（0.60±0.15）、（1.04±0.11）和（1.57±0.16） μm，各组粗糙度差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组、喷砂组、30、50、70 s酸蚀组各负压亚组粘接强度分别为（13.56±1.19）、（20.98±2.11）、（17.37±2.44）、（24.19±2.97）和（21.36±2.16） MPa，分别比相应常压亚组［分别为（10.74±0.93）、（18.47±2.14）、（14.81±1.54）、（20.74±2.56）、（17.75±2.54） MPa］显著增加（ P<0.05）。负压亚组粘接剂界面未见明显裂隙与气泡。各负压亚组粘接试件混合断裂模式比例比相应常压亚组显著提高（ P<0.05）。 结论:负压可有效增强树脂与多晶颗粒改性的氧化锆陶瓷之间的粘接强度，改善粘接效果。

目的:通过多喷头3D生物打印机制作软骨支架，按压配方式将支架植入关节软骨缺损区，修复动物模型的关节软骨缺损并观察效果。方法:在软骨细胞外基质（extracellular matrix，ECM）中加入适量的丝素蛋白（silk fibrion，SF），并加入交联剂聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）和骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）来配制生物墨水；用流变仪评估生物墨水的流变性能；使用傅立叶红外变换光谱鉴定生物墨水的蛋白质二级结构；利用装载有软骨生物墨水的加压喷头，打印厚2 mm，直径6 mm的组织工程支架；使用拉力机测量了组织工程支架的压缩模量；通过干失重法评估各个支架降解速率；CCK8及活死细胞染色评价支架上细胞的活力及增殖情况；实时荧光定量PCR评估体外培养28 d后支架上细胞软骨分化情况；按照自体软骨移植术的方式通过压配原理将支架嵌入动物关节软骨缺损区修复关节软骨缺损；用组织学染色及生化检测鉴定3个月后软骨修复效果。结果:生物墨水均表现出剪切稀化的流动特性。含有丝素蛋白的生物墨水酰胺Ⅰ区吸收峰移至1 623~1 627 cm -1处。随着丝素蛋白含量增加，生物墨水的机械强度和降解性能提高，10%和15%打印支架等压缩模量分别达到（19.96±5.66）kpa和（26.87±10.68）kpa。各个生物墨水均无细胞明显细胞毒性。实时定量PCR表明，当丝素蛋白的含量达到10%~15%时，组织块中的骨髓间充质干细胞成软骨分化能力更强。体内研究：3个月后10%和15%的丝素蛋白生物支架sGAG/DNA含量分别为（0.25±0.01）μg/ng和（0.24±0.02）μg/ng，胶原/DNA含量分别为（17.71±0.83）ng/ng和（16.69±2.39）ng/ng，高浓度丝素蛋白打印的组织工程软骨能更好地修复关节软骨缺损。 结论:在含有10%和15%丝素蛋白生物墨水的3D生物打印支架中，骨髓间充质干细胞的软骨分化和细胞外基质（胶原蛋白和糖胺聚糖）的分泌均优于其他两种支架。不同支架的干细胞成软骨分化能力和细胞外基质分泌的变化，以及对关节软骨缺损的修复效果是由于支架力学性能的差异所致，并可以通过改变丝素蛋白的浓度优化。

目的:探讨不同配比硅锆涂层对氧化锆陶瓷与树脂水门汀粘接强度的影响，以期为氧化锆的临床应用提供参考。方法:将140个预烧结氧化锆瓷片根据伪随机数字表随机分为空白组、喷砂组和5个涂层组（每组20个），并进行相应处理。空白组无涂层直接烧结，喷砂组无涂层烧结后喷砂，涂层2∶1组、1∶1组、1∶2组、1∶3组和1∶4组分别按硅锆摩尔比为2∶1、1∶1、1∶2、1∶3和1∶4涂布涂层后烧结。氧化锆瓷片表面经氢氟酸酸蚀和硅烷偶联剂处理后，使用树脂水门汀粘接瓷片与预成复合树脂柱，制作粘接试件。粘接试件分为两个亚组，一亚组试件置于37 ℃水浴24 h（冷热循环前），另一亚组试件经5和55 ℃冷热循环5 000次；测试各组试件剪切强度，即粘接强度，观察并记录各组试件破坏模式，另按上述方法各涂层组制作1个瓷片用于扫描电镜观察酸蚀后表面形貌并测量涂层厚度。结果:冷热循环前，涂层1∶1组粘接强度最大［（41.69±6.28）MPa］，显著大于其余各组（ P<0.05）；涂层1∶2组粘接强度其次，除与涂层2∶1组差异无统计学意义外（ P>0.05），与其他组差异均有统计学意义（ P<0.05）；喷砂组、涂层2∶1组和1∶3组粘接强度差异均无统计学意义（ P>0.05），均显著大于空白组和涂层1∶4组（ P<0.05）；空白组粘接强度显著大于涂层1∶4组（ P<0.05）。冷热循环后，涂层2∶1组、1∶1组、1∶2组粘接强度［分别为（24.13±5.50）、（22.28±4.40）和（23.11±4.80）MPa］差异均无统计学意义（ P>0.05），均显著大于其余各组（ P<0.05）；喷砂组和涂层1∶3组粘接强度差异无统计学意义（ P>0.05），均显著大于空白组和涂层1∶4组（ P<0.05）；空白组与涂层1∶4组粘接强度下降至几乎为0 MPa，两组差异无统计学意义（ P>0.05）。扫描电镜示各涂层组表面酸蚀后形成程度不一的粗糙表面，涂层厚度在30 μm以内。 结论:硅锆浆料涂层可影响氧化锆与树脂水门汀的粘接强度，其中硅锆配比为1∶1的浆料可使氧化锆获得较高且稳定的粘接强度。

目的:探讨大脑中动脉(middle cerebral artery, MCA)粥样硬化性狭窄处血流动力学与血管重构之间的关系。方法:前瞻性纳入2018年1月至2020年1月期间南京市第一医院神经内科收治的有症状单侧中至重度MCA狭窄患者。所有患者均进行常规MRI及MCA血管壁成像，测量MCA最狭窄处局部血管壁剪应力(wall shear stress, WSS)、跨狭窄处剪应力比值(translesional WSS ratio, WSSR)、跨狭窄处压力比值以及各项斑块参数。根据MCA狭窄处血管重构模式，将患者分为正性重构组和负性重构组，比较两组临床资料以及血管壁和血流动力学参数。应用Pearson相关分析计算血管壁参数与血流动力学参数之间的相关性。结果:共纳入40例有症状单侧MCA中至重度狭窄患者，其中16例存在正性重构，19例存在负性重构。正性重构组急性缺血性卒中患者构成比显著高于负性重构组(68.8%对21.1%； χ2＝8.069， P＝0.005)，而其他人口统计学和临床资料均差异无统计学意义。正性重构组MCA狭窄处管腔面积显著小于NR组( P＝0.004)，斑块面积( P<0.001)、标准管壁指数( P＝0.004)、WSSR( P＝0.004)和WSS( P＝0.023)显著大于或高于负性重构组。Pearson相关分析显示，狭窄处血管重构指数( r＝0.376， P＝0.026)以及斑块面积( r＝0.407， P＝0.015)均与WSSR呈显著正相关。 结论:MCA狭窄处血流动力学与血管重构模式有关，狭窄处斑块面积、WSS和WSSR增大更易引起正性重构。