目的 筛选中药黄芩中血管紧张素转换酶2(ACE2)和二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂.方法 以ACE2和DPP-4作为靶蛋白,利用受体配体亲和超滤和液质联用技术,对黄芩中与ACE2和DPP-4亲和的化合物进行筛选和分析,以筛选具有同时抑制ACE2和DPP-4的化合物.结果 从黄芩中筛选出了 5,7,2',6'-4羟基黄酮、5,7,2',5'-4羟基.8,6'-二甲氧基黄酮、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素-6-O-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、白杨素、千层纸素A,可以同时亲和抑制ACE2和DPP-4,具有潜在的抗新型冠状病毒的作用.结论 从黄芩中筛选出与新型冠状病毒肺炎有关的靶蛋白抑制剂,具备潜在开发价值.

目的:探讨千层纸素A (oroxylin A，OrA)对结核分枝杆菌感染诱导的巨噬细胞焦亡的作用及分子机制。方法:构建结核分枝杆菌感染J774A.1细胞体外模型；MTT法检测OrA对J774A.1细胞活力的影响；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)检测试剂盒检测细胞LDH释放水平；Western blot检测细胞焦亡相关蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3)、GSDMD-N、caspase1-p20、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC)、α7烟碱乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7nAChR)蛋白质表达水平及NF-κB p65的磷酸化。ELISA检测各组细胞IL-1β表达水平；免疫荧光检测α7nAChR蛋白及定位。结果:MTT结果表明OrA在80 μmol/L浓度范围内对J774A.1细胞无细胞毒性；OrA抑制J774A.1细胞LDH的释放，降低细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD-N、caspase1-p20的蛋白质表达水平以及ASC寡聚化，促进α7nAChR蛋白表达，并抑制NF-κB p65磷酸化和IL-1β的释放；加入α7nAChR激动剂PNU282987可降低GSDMD-N并抑制NF-κB p65磷酸化。结论:OrA可能通过调控胆碱能抗炎通路抑制结核分枝杆菌感染诱导的巨噬细胞焦亡。

三物黄芩汤(Sanwu Huangqin Decoction,SHD)始载于《金匮要略》,由黄芩、苦参、地黄3味药组成,为滋阴清热之经典方剂.主要含有黄酮类、生物碱类、环烯醚萜苷类及苯乙醇苷类等化合物,具有抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗过敏、抗白塞病等药理作用,临床多用于发热性疾病、红斑性肢痛症、自身免疫性肝病、皮肤性疾病等.通过对SHD的处方考证与历史沿革、化学成分、药理作用及现代临床应用等进行系统分析,并在此基础之上,依据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的五原则对SHD的Q-Marker进行预测,黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A,苦参中苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐果碱、槐定碱、三叶豆紫檀苷、苦参酮,地黄中梓醇、地黄苷D可初步确定为SHD的Q-Marker,为完善SHD的制剂过程中质量溯源体系及其质量评价与控制体系奠定一定的基础.

目的 建立一测多评法同时测定十一味定喘口服液中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸铵的含量.方法 分析采用Welch Ultimate XB C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm.以黄芩苷为内标,计算其他4 种成分的相对校正因子,测定其含量.结果 5 种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 3),平均加样回收率 97.27%～104.89%,RSD 0.16%～1.70%.一测多评法所得结果与外标法接近.结论 该方法专属性强,准确度高,稳定可靠,可用于十一味定喘口服液的质量控制.

黄芩提取物是舒肝宁注射液中重要的组分之一.该研究建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定舒肝宁注射液及方中黄芩提取物的5种成分在大鼠胆汁、尿液和粪便中含量的方法,揭示舒肝宁注射液与单味黄芩提取物在大鼠体内的排泄过程差异,探讨黄苓配伍前后5种成分的体内排泄过程规律.大鼠分别尾静脉注射4.2 mL·kg-1的舒肝宁注射液和黄芩提取物,观察48 h内大鼠胆汁、尿液和粪便中黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和野黄芩苷的动态排泄情况.结果显示,大鼠静脉注射舒肝宁注射液和黄芩提取物后,除黄芩苷外,其余4种指标成分均以较高的比例以原型成分排泄.各成分在尿液中排泄量较大,在粪便和胆汁中的排泄量较少.黄芩提取物经配伍后,5种指标成分在大鼠体内的累积排泄量均降低.其中,黄苓素在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了26.67％、48.11％、31.01％;黄芩苷在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了70.69％、19.43％、31.22％.研究表明,黄芩提取物中的5种指标成分主要经肾脏排泄,且注射液中其他组分可能会延缓其排泄过程,延长在体内的滞留时间.该研究对阐明舒肝宁注射液配伍合理性具有重要的意义.

目的 建立银花抗病毒口服液的UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱,对其主要化学成分进行分析鉴定,并测定6个化学成分的含量.方法 采用UPLC-Q-TOF-MS技术,正、负离子模式,Agilent ZORBAX Eclipse Plus C1 8(3.0 mm×100 mm,1.8 μm)色谱柱,以水相(A,含0.1％甲酸)和有机相乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.4mL·min-1,进样量为1μL.建立12批银花抗病毒口服液的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析,通过一级、二级质谱及对照品比对鉴别共有峰的化学成分.结果 在正、负离子模式下共鉴定了 12批银花抗病毒口服液的指纹图谱,确定共有峰32个,指纹图谱相似度均≥0.978,通过聚类分析将样品各分为4类、3类,与主成分分析一致,筛选出汉黄芩苷、千层纸素A苷、连翘酯苷Ⅰ、异绿原酸B等8个成分是导致不同批次样品差异的标志性化合物.结论 所建立的指纹图谱结合多指标含量测定方法稳定、重复性好、特征性强,可为银花抗病毒口服液的质量评价和临床应用提供有效参考.

目的 探讨千层纸素A抑制宫颈癌的作用及潜在机制.方法 在GEO和TCGA数据集中分析SHC SH2 结构域结合蛋白 1(SHCBP1)在宫颈癌患者与健康人之间的表达的差异;通过MTT实验验证千层纸素A对HeLa细胞的抑制作用.采用Western blotting实验对千层纸素A与SHCBP1 之间关系进行研究,运用分子模拟对接评估千层纸素A与SHCBP1 蛋白的对接效果;Linkedomics分析宫颈癌患者中SHCBP1 的共表达基因;基因本体(GO)和京都基因组百科全书(KEGG)分析相关共表达基因的潜在机制;CIBERSORT法分析SHCBP1 与宫颈癌免疫细胞浸润的相关性;TISIDB数据库分析SHCBP1与免疫检查点的关系.结果 GEO数据库及TCGA数据库的分析结果得出,SHCBP1 在宫颈癌患者中显著高表达;MTT和Western blotting分析结果显示,千层纸素A在 10 μmol/L即对HeLa细胞增殖和SHCBP1 的表达具有显著的抑制效果(P＜0.05).分子对接结果显示,千层纸素A与SHCBP1 具有较好的结合势能;TISIDB数据库的研究及CIBERSORT法对GEO数据集的分析结果得出,SHCBP1 参与了宫颈癌细胞的免疫浸润;SHCBP1 及其共表达基因主要富集于炎症相关途径中.结论 千层纸素A通过抑制SHCBP1 介导的免疫浸润来抑制宫颈癌的生长,这可能在宫颈癌的治疗中有重要意义.

目的 优化香芩解热颗粒的水提工艺.方法 以加水倍数、提取时间、提取次数为考察因素,以连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量和出膏率为评价指标,设计3因素3水平的正交实验,并利用G1-熵权法对上述指标进行综合评分,得正交实验优化的水提工艺.以9组正交实验结果为测试和训练数据,以加水倍数、提取时间、提取次数为输入节点,以综合评分为输出节点,利用BP神经网络建模进行网络模型优化和水提工艺寻优.验证并比较两种方法所得水提工艺参数,确定香芩解热颗粒的最佳水提工艺.结果 香芩解热颗粒经正交实验优化后的水提工艺为加水倍数8倍、提取次数3次、提取时间1 h,综合评分为96.84分(RSD为0.90%).BP神经网络建模优化后的水提工艺为加水倍数12倍、提取次数4次、提取时间0.5 h,综合评分为92.72分(RSD为0.77%),略低于正交实验所得工艺.结论 本研究成功优化了香芩解热颗粒的最佳水提工艺,具体为加水倍数8倍、提取次数3次、提取时间1 h.

目的 构建APOC3表达抑制剂筛选模型,并从中药单体化合物中筛选APOC3表达抑制剂.方法 利用PCR方法扩增APOC3基因启动子,利用基因重组技术构建启动子驱动的荧光素酶报告载体;通过荧光素酶活性检测筛选APOC3表达抑制剂;利用RT-qPCR方法检测APOC3的mRNA表达水平,利用Western blot方法检测APOC3的蛋白表达水平;利用oxLDL诱导肝细胞中的脂质沉积,之后利用油红O染色法检测细胞内的脂质沉积情况.结果 APOC3表达抑制剂筛选模型构建成功,用该筛选模型筛选中药单体化合物,发现千层纸素A可抑制APOC3基因启动子活性,并进而抑制APOC3 mRNA和蛋白的表达水平.进一步的研究显示,千层纸素A可抑制oxLDL诱导的肝细胞中的脂质沉积.结论 本研究构建的筛选模型可用于APOC3表达抑制剂的筛选,且筛选到的化合物千层纸素A可抑制脂质沉积.

目的 研究柴胡桂枝汤(CGD)治疗流感继发细菌性肺炎的作用机制.方法 建立流感继发细菌性肺炎模型,采用CGD进行干预,采用UPLC-Q-Exactive/MS技术对CGD成分进行定性分析.采用网络药理学方法挖掘CGD中成分的潜在作用靶点及流感继发细菌性肺炎相关靶点,构建"成分-靶点-疾病"网络.采用KEGG分析和GO分析富集核心作用通路.采用分子对接验证核心成分与关键靶点间的相互作用,RT-qPCR对核心靶点进行验证.结果 CGD能显著改善共感染引起的体重、胸腺指数(P<0.05)的下降;降低肺指数(P<0.05)、MmRNA的相对表达量(P<0.05)和细菌载量(P<0.05),提高生存率.从CGD中鉴定得到51个化学成分;网络药理学分析挖掘CGD治疗流感继发细菌性肺炎所对应的相关靶点107个,其中TNF、AKT1、ALB、VEGFA、MAPK3、PTGS2、STAT3、EGFR等靶点关联性较强,主要涉及Fc epsilon RI信号通路、GnRH信号通路、NF-κB信号通路等;通过分子对接研究显示CGD主要活性成分千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、汉黄芩素与TNF、PTGS2、EGFR靶点有强亲和活性.与共感染模型组相比,CGD组TNF-α显著降低,EGFR、PTGS2显著升高(P<0.05).结论 CGD的主要活性成分千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、汉黄芩素作用于TNF-α、PTGS2、EGFR等靶点,来发挥治疗流感-金黄色的葡萄球菌共感染的作用.