目的:探讨自体骨髓有核细胞移植对卵巢功能减退相关疾病的临床疗效。方法:基于2020年9月至2021年8月期间在上海计生所医院和上海新虹桥国际医学中心就诊的早发性卵巢功能不全、围绝经期综合征和反复辅助生殖失败的28例患者资料，开展自身前后对照研究。对患者进行超声引导下自体骨髓有核细胞注入卵巢，比较治疗前后患者自觉症状报告情况、子宫内膜厚度、双侧卵巢体积和、双侧卵巢卵泡个数及双侧卵巢卵泡最大径和的变化，同时比较雌二醇、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、孕酮、泌乳素及睾酮水平的变化。结果:自体骨髓有核细胞移植治疗后，患者双侧卵巢卵泡数、双侧卵巢卵泡最大径和分别增加（1.26±2.12）个和（5.40±8.92）mm，差异均具有统计学意义（ P=0.005， P=0.006）。治疗后子宫内膜厚度、双侧卵巢体积和有增加趋势，但差异均无统计学意义（ P均>0.05）。但在治疗前后单侧变化幅度更大的卵巢体积、卵泡个数和卵泡最大径的分析显示，治疗后卵巢体积、卵泡数量及卵泡最大径均增加，差异均具有统计学意义（ P=0.007， P<0.001， P=0.002）。治疗后FSH、LH、孕酮和泌乳素水平降低，但差异均无统计学意义（ P均>0.05）。疾病类型分层分析显示，治疗后子宫内膜、双侧卵巢卵泡数和及卵泡最大径和呈增加趋势，但仅在围绝经期综合征患者中双侧卵泡个数和以及卵泡最大径和的差异具有统计学意义（ P=0.008， P=0.047）。 结论:本研究提示自体骨髓有核细胞治疗可能在一定程度上改善卵巢功能，有望成为早发性卵巢功能不全、围绝经期综合征、反复辅助生殖失败患者的新治疗方法，但尚需扩大样本量进行深入研究。

卵泡膜细胞不仅为卵泡的完整性提供支持，还在卵泡发育、闭锁及优势卵泡选择和排卵中发挥至关重要的作用。尽管卵泡膜细胞在女性生殖过程中起到重要作用，但目前针对该类细胞发育、起源及其干细胞的相关研究非常稀少。卵泡膜干细胞的研究不仅能让我们深入了解卵泡膜细胞的募集、生长和分化过程，也能使我们尝试通过卵泡膜干细胞制备高活性的卵泡膜细胞，这对人类卵巢疾病的诊断、预防和治疗以及再生医学都具有重要的临床意义。本文就卵泡膜细胞功能、来源以及卵泡膜干细胞研究进展作一综述，同时也简单介绍单细胞测序技术在卵巢干细胞研究领域中的应用，为进一步探索卵巢卵泡发育机制、病理改变和疾病治疗等方面提供参考。

目的:探索人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells，hAMSCs）对自身免疫性早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency，POI）小鼠卵巢功能和子宫内膜容受性的影响。方法:使用透明带3多肽-弗氏免疫佐剂诱导小鼠自身免疫性POI，一次性尾静脉注射移植hAMSCs 1×10 6细胞/只，将动物分为正常组（ n=10）、模型组（ n=15）、hAMSCs组（ n=15），阴道涂片监测动情周期，酶联免疫法检测血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hornome，FSH）、雌二醇与抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）含量，HE染色观察卵巢和子宫病理组织学变化，免疫组织化学检测子宫同源框A10（homeobox A10，HOXA10）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和FSH受体（FSH receptor，FSHR）蛋白表达，综合评价子宫内膜容受性。 结果:hAMSCs移植6周，hAMSCs组动情周期异常率［40.00%（6/15）］低于模型组［86.67%（13/15）， P=0.021］。与模型组血清FSH［（10.239±1.091）μg/L］、雌二醇［（103.325±4.952）ng/L］和AMH［（1.133±0.494）μg/L］水平相比，hAMSCs组FSH水平［（7.664±0.735）μg/L］明显降低（ P<0.001），雌二醇［（126.883±23.370）ng/L］和AMH［（2.204±0.453）μg/L］水平均明显升高（ P=0.015， P<0.001）。与模型组不同，hAMSCs组卵巢指数、子宫指数增高；卵巢组织不同发育阶段的卵泡数增加，间质纤维化和闭锁卵泡少见，子宫壁与子宫内膜增厚，腺体数量和体积增加。HOXA10吸光度（absorbance， A）值hAMSCs组（5.90±1.94）高于模型组（2.79±1.27， P=0.029），TNF-α A值hAMSCs组（3.83±1.23）低于模型组（6.26±0.96， P=0.002）；FSHR A值hAMSCs组（3.61±1.66）与模型组（2.74±0.22）差异无统计学意义（ P>0.05），但模型组低于正常组（4.13±0.54， P=0.006）。 结论:移植hAMSCs在恢复自身免疫性POI小鼠卵巢功能的同时，可明显改善子宫内膜容受性，有助于提高生育能力。

目的:研究脐带间充质干细胞改善卵巢早衰家兔卵巢功能的潜在机制。方法:将10只家兔按随机数表法分为治疗组和模型组各5只，均采用腹腔注射环磷酸酰胺（50 mg·kg -1·d -1，连续2 d）构建卵巢早衰模型。造模1周后，治疗组予以耳缘静脉注射人脐带间充质干细胞（2 mL/d，连续3 d），模型组予以注射等量无菌水。第28日后采集两组家兔卵巢组织标本，通过苏木精-伊红染色法观察两组家兔卵巢组织形态结构，并采用蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR及免疫组织化学技术检测两组家兔卵巢组织内基质金属蛋白酶组织抑制物1（tissue inhibitor of metalloproteinases 1，TIMP1）、纤连蛋白（fibronectin，FN）、纤维形成相关因子基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP9）在蛋白及mRNA水平上的表达。 结果:①模型组家兔卵巢组织内原始卵泡数量少，闭锁卵泡多，各级卵泡颗粒层排列紊乱，卵细胞核出现固缩，发生凋亡，卵巢间质出现纤维化；而治疗组家兔卵巢组织内原始、初级卵泡数量多，闭锁卵泡少，各级卵泡颗粒细胞排列规则。②与模型组相比较，治疗组家兔卵巢组织内TIMP1蛋白（0.546±0.021比0.820±0.085）和FN蛋白表达量增多（0.221±0.065比0.516±0.064）（ P均<0.001），而MMP9蛋白表达量减少（0.504±0.049比0.204±0.066， P<0.001）。③与模型组相比较，治疗组家兔卵巢组织内 TIMP1 mRNA（0.217±0.024比0.470±0.039）和 FN mRNA的表达量增多（0.039±0.006比0.125±0.012， P均<0.001），而 MMP9 mRNA的表达量减少（0.009±0.000比0.002±0.000， P<0.001）。④TIMP1和FN主要表达在颗粒细胞和卵细胞膜，TIMP1还表达在卵巢间质组织，治疗组TIMP1和FN的表达多于模型组，差异均具有统计学意义（ P<0.001， P=0.005）。MMP9主要表达在颗粒细胞和卵巢间质组织，治疗组MMP9的表达少于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.001）。 结论:脐带间充质干细胞能够通过调节卵巢组织内TIMP1、FN和MMP9水平来改善卵巢功能。

目的:探索自体移植冻融卵巢组织诱导青少年女性青春期发育的可行性。方法:重度β地中海贫血患儿造血干细胞移植术前于2019年在中山大学附属第六医院生殖医学中心冷冻卵巢组织11片。患儿造血干细胞移植术后复诊出现卵巢早衰，无青春期发育征象，仍无月经初潮。2022年1月20日通过腹腔镜为患者行原位卵巢组织移植术，共移植卵巢组织5片。术后随访患者性激素水平、生长发育情况及月经是否来潮。结果:患者卵巢移植术后5个月现月经初潮。性激素水平表现为卵泡刺激素与黄体生成素明显下降，雌二醇水平明显升高，提示卵巢组织移植成功，卵泡已开始募集及发育。患者彩色超声提示子宫明显增大，子宫内膜增厚，盆腔左侧移植部位探及窦卵泡声像。结论:青春期前儿童通过卵巢组织冷冻保存生育力的临床价值。对已经出现卵巢功能衰竭、青春期发育延迟甚至停滞的患儿通过自体冻融卵巢组织移植可诱导自然的青春期发育，恢复患者的生殖内分泌功能。

早发性卵巢功能不全(POI)是一种复杂的内分泌疾病,具体发病机制尚不明确,目前研究表明,遗传、免疫、环境、手术及放化疗等因素与之相关;同时,氧化应激、血管损伤、卵巢颗粒细胞(OGC)和膜间质细胞(TIC)的凋亡会伴随疾病发生.近年来POI的发病率逐渐上升且出现年轻化趋势,临床上常用的激素替代疗法、免疫疗法及辅助生殖技术皆无法从根本上改善卵巢功能.人脐带间充质干细胞(hUCMSC)属于多能干细胞,具有多向分化和自我更新能力,能够减少体内活性氧(ROS)的堆积、调节自噬、减少TIC凋亡及抑制卵巢纤维化、促进卵泡发育和OGC增殖.可见,hUCMSC具有"一对多"的生物学效应,本文就hUCMSC治疗POI的研究进展进行综述,或许能为hUCMSC恢复受损卵巢组织功能的机制提供理论依据.

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)尾静脉移植和卵巢原位移植对化疗诱导早发性卵巢功能不全(POI)大鼠的影响及机制.方法 将32只性成熟雌性SD大鼠随机均分为4组,空白对照组不给予特殊处理,模型组、hUCMSCs尾静脉移植组(hUCMSCs-iv组)和hUCMSCs卵巢原位移植组(hUCMSCs-oi组)先通过连续腹腔注射环磷酰胺15 d建立POI模型.成模后模型组大鼠尾静脉注射500 μl生理盐水,hUCMSCs-iv组一次性尾静脉注射1×106个hUCMSCs(重悬于500 μl生理盐水),hUCMSCs-oi组从卵巢系膜侧一次性多点注射25 μl hUCMSCs悬液(重悬于生理盐水,浓度为4×107/ml).治疗14 d后取材检测.统计各组大鼠体重、卵巢指数、动情周期变化,HE染色观察卵巢病理形态变化,酶联免疫吸附法统计大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)和抗苗勒管激素(AMH)水平,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测卵巢组织凋亡相关基因和蛋白表达水平,TUNEL染色观察卵巢细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测卵巢组织卵泡刺激素受体(FSHR)表达水平.结果 (1)与对照组比较,模型组大鼠多数(87.5％)动情周期紊乱,体重、卵巢湿重和卵巢指数均显著降低(P＜0.05),卵泡数减少;血清FSH水平显著升高而E2和AMH水平显著降低(P＜0.05);卵巢组织Bax mRNA表达水平显著升高(P＜0.05)而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);TUNEL染色阳性率显著增加、FSHR阳性表达显著减少(P＜0.05).(2)与模型组比较,两个hUCMSCs治疗组(hUCMSCs-iv组和hUCMSCs-oi组)动情周期异常率(分别为37.5％、25.0％)均明显降低,卵巢组织结构及各级卵泡数量均有不同程度的恢复,大鼠体重和卵巢指数均显著增加(P＜0.05);血清FSH水平均显著降低(P＜0.05)而E2和AMH水平均显著升高(P＜0.05);卵巢组织Bax mRNA表达水平均显著降低(P＜0.05)而Bcl-2 mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05);卵巢组织Bax蛋白和cleaved caspase-3/caspase-3蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)而Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);卵巢组织细胞TUNEL染色阳性率均显著降低(P＜0.05);卵巢颗粒细胞膜上的FSHR蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05).结论 本研究通过尾静脉和卵巢原位移植hUCMSCs两种途径,均可有效改善化疗诱导的POI大鼠卵巢功能和卵泡结构,这种治疗作用可能与hUCMSCs的抗凋亡效应有关.

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对卵巢早衰模型大鼠卵巢超微结构和储备功能的影响.方法:将62只健康SD大鼠随机分成阴性对照组(18例)、模型对照组(22例)和hUCMSCs移植组(22例).阴性对照组大鼠不进行任何处理,模型对照组和hUCMSCs移植组大鼠腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立卵巢早衰动物模型.建模成功后,hUCMSCs移植组通过尾静脉注射hUCMSCs进行治疗.观察大鼠的一般情况,观察大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的改变,测定血清中雌二醇(E 2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抑制素B(INHB)和抗苗勒管激素(AMH)水平,并分析卵巢储备功能的变化.结果:电镜下显示,模型对照组颗粒细胞核溶解、核膜消失、线粒体空泡化,线粒体与内质网数量逐渐减少;hUCMSCs移植组颗粒细胞细胞核膜逐渐修复,核仁出现,内质网与线粒体少量存在.造模后1d,与阴性对照组比较,模型对照组和hUCMSCs移植组E 2含量降低,FSH含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);hUCMSCs移植后1d,模型对照组和hUCMSCs移植组INHB、AMH含量均较阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);hUCMSCs移植后17d,hUCMSCs移植组的INHB水平高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:hUCMSCs移植对POF大鼠的卵巢超微结构及储备功能具有一定的修复作用.

早发性卵巢功能不全(POI)是指女性在40岁之前卵巢功能衰退的临床综合征,并且以月经紊乱(停经或稀发月经)伴有高促性腺激素和低雌激素为特征,约80％POI患者属于特发性.随着近年癌症诊疗技术的提高,癌症患者接受放、化疗后面临POI的风险.国内外应用干细胞治疗POI,使患者恢复卵巢功能及生育力的研究取得较大进展,这为恢复POI患者内分泌功能及生育功能指出新的方向.干细胞包括骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、人羊膜上皮细胞(hAECs)和人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)等,干细胞可能通过分化为颗粒细胞或通过旁分泌,为卵母细胞提供微环境和抑制卵泡凋亡达到修复受损卵巢的目的 .笔者拟对人羊膜治疗POI的研究进展进行综述.

目的 探讨补肾养阴药左归丸联合干细胞(MSCs)治疗对化疗后卵巢早衰大鼠的影响.方法 60只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、干细胞组、补肾养阴组及干细胞+补肾养阴组,每组12只.除外空白组,其余各组连续腹腔注射环磷酰胺(CTX)15日建立卵巢早衰模型.干细胞组:单次尾静脉注射 MSCs(3 ×106/mL,1 mL),之后生理盐水灌胃(2 mL/d)28日.补肾养阴组:单次尾静脉注射生理盐水 1 mL,之后左归丸灌胃(3 g/kg)28日.干细胞+补肾养阴组:单次尾静脉注射MSCs(3 ×106/mL,1 mL),之后左归丸灌胃(3 g/kg)28日.空白组及模型组:单次尾静脉注射生理盐水1 mL,之后生理盐水灌胃(2 mL/d) 28日.观察大鼠给药前、给药14日及28日的体重,左归丸给药结束后称取卵巢、子宫湿重,HE染色观察卵巢及子宫组织病理变化;ELISA法检测外周血雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠体重随造模时间延长而日趋降低(P ＜0. 01);与模型组比较,干细胞组、补肾养阴组、干细胞+补肾养阴组大鼠在左归丸给药14日及28日体重增加(P ＜0.01 ).与模型组比较,各治疗组成熟卵泡、黄体细胞及颗粒细胞均增多,子宫内膜增厚、腺体增多,尤以干细胞+补肾养阴组最显著.与空白组比较,模型组卵巢、子宫湿重下降(P＜0.01 ),E2水平下降,FSH、LH水平升高(P ＜0.01 );与模型组比较,补肾养阴组和干细胞+补肾养阴组卵巢、子宫湿重增加(P ＜0.05, P ＜0.01 ),干细胞+补肾养阴组 LH水平降低(P＜0. 05),干细胞组、补肾养阴组、干细胞+补肾养阴组E2水平均升高,FSH水平均降低(P ＜0. 05,P ＜0. 01),治疗组中以干细胞+补肾养阴组各指标改善最为显著(P ＜0. 05).结论 左归丸及干细胞治疗可改善化疗所致的卵巢功能损害,其能显著提高E2含量,降低FSH、LH含量,且能有效抑制卵巢颗粒细胞凋亡,二者联合应用疗效更佳.