目的:检测翼状螺旋转录因子叉头框家族蛋白(FOX) A1在膀胱癌组织及细胞中的表达水平，探讨FOXA1对膀胱癌细胞生物学功能的影响及机制。方法:收集郑州大学第一附属医院2016年1月1日至2020年1月1日膀胱癌根治术石蜡病理92例，癌旁组织79例，采用免疫组织化学检测膀胱癌患者及正常膀胱上皮组织中FOXA1蛋白的表达水平，并分析FOXA1表达与患者临床病理特征的关系。在膀胱癌细胞系5637中转染小干扰RNA(siRNA)-FOXA1，将细胞分为对照组(shctrl)及转染组(shFOXA1)采用蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。采用荧光细胞增殖实验检测细胞增殖能力，采用Matrigel检测细胞侵袭能力。采用Western blot检测snail、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平，两组间比较采用 t检验。 结果:免疫组化显示FOXA1在膀胱癌中表达水平显著低于正常膀胱上皮组织[0.45(41/92)比0.63(50/79)， χ2＝5.986， P<0.05]，高级别尿路上皮癌、Ⅲ＋Ⅳ期、T3＋T4膀胱癌组织中FOXA1表达水平更低，差异有统计学意义[0.43(21/49)比0.70(30/43)，0.39(13/33)比0.64(38/59)，0.29(6/21)比0.63(45/71)， χ2＝6.713、5.360、7.949， P<0.05]，shFOXA1转染5637细胞系成功后，对照组在3、5 d时细胞增殖数目低于转染组[5637细胞系shctrl比shFOXA1-1为，3 d：(157.67±1.53)个比(420.00±21.52)个；5 d：(421.00±23.00)个比(1 387.01±32.36)个， t＝21.061、39.652， P<0.01；shctrl比shFOXA1-2为，3 d：(157.67±1.53)个比(407.00±16.37)个；5 d：(421.00±23.00)个比(1 493.00±40.73)个， t＝26.673、30.132， P<0.05]。Matrigel实验中对照组侵袭细胞数目低于转染组[5637细胞系shctrl比shFOXA1-1为(151.62±13.77)个比(343.14±20.44)个， t＝21.551， P<0.05；shctrl比shFOXA1-2为(151.62±13.77)个比(407.50±22.50)个， t＝26.422， P<0.05]。Western blot实验显示FOXA1下调组snail、Vimentin表达显著高于对照组(snail：5.24±0.94比1.00±0.09， t＝7.831， P<0.05；Vimentin：5.88±0.48比1.00±0.10， t＝17.141， P<0.05)，FOXA1下调组E-cadherin表达水平显著低于对照组(0.18±0.03比1.00±0.06， t＝22.445， P<0.05)。 结论:FOXA1在膀胱癌组织中异常低表达，可作为抑癌基因在膀胱腺癌发生发展发挥重要作用。

本研究通过抗雄激素药物作用于慢病毒转染构建的叉头框家族蛋白A1(FOXA1)高表达管腔样雄激素受体型(LAR)三阴性乳腺癌(TNBC)细胞株，探究抗雄激素治疗在LAR型TNBC中的作用。

目的:通过比较不同时期大脑类器官脑区分化和神经细胞标志物的改变，分析萝卜硫素对大脑类器官发育的影响及可能机制。方法:使用萝卜硫素处理人诱导多能干细胞分化形成的大脑类器官。实验组为不同浓度（1 μmol/L、2 μmol/L、5 μmol/L）萝卜硫素处理组，对照组为空白对照组，每组20个类器官。采用免疫荧光、苏木精-伊红染色法观察比较萝卜硫素处理后不同时期脑区标志物和神经细胞标志物表达特点；RNA测序分析差异表达基因并进行基因本体论（Gene Ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）功能富集分析；实时定量反转录聚合酶链反应（real-time quantitative reverse transcriptase-mediated polymerase chain reaction，qRT-PCR）进一步筛选验证可能参与萝卜硫素促进大脑类器官生长潜在基因或可能的靶点。结果:加入萝卜硫素处理40 d的大脑类器官中性别决定区Y框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2）、前脑标志蛋白叉头框G1（forkhead box G1，FOXG1）、前额叶皮质孤独症易感候选基因2（autism susceptibility candidate 2，AUST2）、配对盒基因6（paired box 6，PAX6）表达明显增强；加入萝卜硫素处理70 d大脑类器官中神经元标志蛋白神经元Ⅲ型β-微管蛋白（β-tubulin，TUJ1）、神经元核（neuronal nuclei，NeuN）、微管相关蛋白2（recombinant microtubule associated protein 2，MAP2）、T脑蛋白家族1（T-brain-1，TBR1）等表达增强。RNA测序分析显示，相比于对照组，实验组显著上调基因105个，下调基因512个，共617个。qRT-PCR验证差异表达基因（SFTPC、AKR1C3、CXCR6、PRAP1、TMC8、GPR182、F2RL2、KCNJ10）的转录水平与测序结果基本一致。结论:差异表达基因AKR1C3、KCNJ10可能参与萝卜硫素促进大脑类器官前额发育和神经元分化，这有助于为萝卜硫素改善精神疾病和神经退行性疾病患者的认知和症状提供证据支持。

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响.方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮).将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20 μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预).RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达.Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平.ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平.流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA 及蛋白表达和 GSH、FSH 水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA 及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe2+、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P＜0.05).与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe2+、T、LH水平降低.卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P＜0.05).结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡.

转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)最初被发现在早期非小细胞肺癌(NSCLC)中过表达.MALAT1因其结构的特殊性呈现的半衰期使其在NSCLC组织或血液中被检测到,并在NSCLC发生、发展中起关键作用.MALAT1的表达与NSCLC的肿瘤大小、分期、转移和远处浸润显著相关.MALAT1可促进NSCLC进展,其机制为下调miR-202表达,通过miR-185-5p上调鼠双微体4表达,下调叉头框蛋白P3泛素化影响轧棉厂复合亚基1转录;靶向miR-374b-56上调富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子7表达;靶向miR-200a上调锌指E盒结合同源盒因子家族表达.因此,MALAT1可作为NSCLC患者早期诊断、病情评估、预后预测的生物标志物.

目的 研究热量限制(CR)在改善db/db小鼠胰岛β细胞退分化中的作用.方法 选取 3 周龄的db/db小鼠,随机分为自由进食(db-FD)组和CR(db-CR)组,相同周龄的雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照(C-FD)组.C-FD和db-FD组自由进食,db-CR组每日进食量为C-FD组的 60%.饮食干预 6 w,每周测小鼠体质量、空腹血糖.干预结束后,检测糖耐量、胰岛素耐量、空腹胰岛素水平、胰腺胰岛素含量;免疫组化检测胰岛结构和形态;胰岛RNA-seq分析寻找热量限制后表达改变的胰岛β细胞功能相关基因;免疫荧光染色检测胰岛β细胞特异转录因子和退分化相关蛋白的表达.结果 饮食干预期间db-CR组体质量(2～6 w)和空腹血糖(4～6 w)较db-FD组明显减轻(P<0.05).干预结束时,与db-FD组相比,db-CR组糖耐量和胰岛素耐量明显改善,胰腺胰岛素含量明显提高(P<0.05),胰岛结构完整,胰岛素淡染区减少.RNA-seq分析和免疫荧光染色显示,db-CR组胰岛β细胞特异转录因子[胰腺十二指肠同源蛋白(Pdx)1,NK6 同源框 1(Nkx6.1)]表达升高,退分化相关因子乙醛脱氢酶家族1 成员(Aldh1)A3 表达减少,叉头盒(FOX)O1 表达升高.结论 CR可通过减少β细胞退分化改善db/db小鼠胰岛β细胞功能

目的 探究牡荆素对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤的保护作用及其调控机制.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、牡荆素(3、6、12 mg/kg),及牡荆素(12 mg/kg)+EX527(5 mg/kg)组,每组各 10 只.除对照组外,其余各组大鼠均采用卵清白蛋白诱导建立变应性鼻炎大鼠模型,模型构建成功后,各组大鼠ip相应剂量药物,对照组和模型组大鼠ip等量的生理盐水,1 次/d,连续14 d.末次给药结束后 30 min,记录各组大鼠行为学评分,观察鼻黏膜组织病理形态学变化;检测鼻黏膜组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧气簇(ROS)、铁离子(Fe2+)水平,铁死亡相关蛋白溶质载体家族 7 成员 11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(ACSL4)以及沉默信息调节因子 1(Sirt1)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、p-FoxO1、Ac-FoxO1 蛋白表达.结果 与模型组相比,牡荆素各剂量组大鼠行为学评分均显著降低,鼻黏膜损伤显著改善(P＜0.05);大鼠鼻黏膜组织匀浆SOD、GSH活性显著升高,MDA、ROS、Fe2+含量均显著降低(P＜0.05);大鼠鼻黏膜组织SLC7A11、GPX4、Sirt1、FoxO1 蛋白表达显著升高,p-FoxO1、Ac-FoxO1、ACSL4 蛋白表达显著降低(P＜0.05),且呈剂量相关性.结论 牡荆素能够改善变应性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤,其机制与激活鼻黏膜组织Sirt1/FoxO1 通路,抑制细胞铁死亡有关.

目的 探讨汉黄芩素(WG)对自身免疫性肝炎(AIH)大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响.方法 随机选出 10 只大鼠作为对照组,其余大鼠通过尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(ConA,12.5 mg/kg)溶液构建AIH模型大鼠.将造模成功大鼠随机平分为AIH组、L-WG组(10 mg/kg)、M-WG组(20 mg/kg)、H-WG组(30 mg/kg)、H-WG+VPA组[30 mg/kg WG+300 mg/kg Notch信号通路激活剂丙戊酸(VPA)],每组10只,每天给药1次,持续10 d.ELISA检测血清中炎性因子及肝功能指标;HE染色观察肝脏组织病理形态;流式细胞测量术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western blot检测脾脏类视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)以及肝组织Notch信号通路蛋白质的表达.结果 对照组大鼠肝组织结构正常,染色清晰;AIH组大鼠肝组织细胞出现水肿,细胞体积增大导致肝窦受压变窄,出现大量炎性细胞浸润以及少量坏死现象.AIH组较对照组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白介素(IL)-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、hes家族bHLH转录因子 1(HES1)、含YRPW基序的bHLH转录因子hes相关家族1(HEY1)蛋白表达均显著上升(P＜0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3蛋白水平均显著下降(P＜0.05);与AIH组相比,L-WG组、M-WG组、H-WG组肝损伤情况得到改善,ALT、AST活性、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、HES1、HEY1 蛋白表达均显著降低(P＜0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3 蛋白水平均显著升高(P＜0.05);VPA逆转了H-WG对AIH大鼠的改善效果.结论 WG可能通过下调Notch信号通路促进AIH大鼠Th17/Treg细胞平衡.

本研究通过抗雄激素药物作用于慢病毒转染构建的叉头框家族蛋白A1(FOXA1)高表达管腔样雄激素受体型(LAR)三阴性乳腺癌(TNBC)细胞株,探究抗雄激素治疗在LAR型TNBC中的作用.

目的 基于网络药理学和分子对接研究探讨大蒜Allii Sativi Bulbus抗幽门螺杆菌(Hp)感染的活性成分及可能的作用机制,并通过体外抑菌试验验证大蒜素对Hp菌株的抗菌活性.方法 利用HERB数据库获取大蒜的活性成分,并通过PharmMapper、Swiss Target Prediction、BATMAN-TCM数据库获取活性成分靶点并构建"药物-成分-靶点"网络,筛选出主要活性成分.通过GeneCards、OMIM、DRUGBANK和DisGeNET数据库收集与Hp感染相关的靶点,取药物与疾病靶点交集,筛选出潜在靶点.利用STRING数据库获取潜在靶点的互作关系,并在Cytoscape中构建蛋白相互作用(PPI)网络,筛选出核心靶点.在DAVID数据库中进行潜在靶点的基因本体论(GO)生物分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.通过Autodock进行活性成分与核心靶点的分子对接.用体外抗菌试验检测大蒜素的抗 Hp 活性.结果 共筛选出 36 个大蒜活性成分,291 个潜在靶点,PPI网络分析得到肿瘤蛋白p53(TP53)、酪氨酸蛋白激酶(SRC)、信号传导和转录激活蛋白 3(STAT3)、热休克蛋白 90α家族A类成员 1(HSP90AA1)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK3)5 个核心靶点.GO分析得到 954 个生物过程,KEGG分析得到 176条通路.分子对接结果显示,大蒜活性成分均与核心靶点有较好的结合能力.体外抑菌试验显示大蒜素对 3 株Hp菌均有抑菌活性,最小抑菌浓度为 2 mg/mL.结论 大蒜中的活性成分可能通过作用于TP53、SRC、STAT3、HSP90AA1、MAPK35 个核心靶点参与Hp感染相关过程,其机制与磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、叉头框蛋白O(FoxO)、低氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路有关,且大蒜素对Hp菌有抑菌活性.