目的:研究玉竹地上部位的化学成分及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性.方法:采用大孔吸附树脂HP-20、Sephadex LH-20、MCI gel CHP 20P、Chromatorex C18、半制备型高效液相等色谱法对玉竹地上部位75％甲醇提取物进行分离纯化,通过1 H-NMR、13C-NMR等波谱技术对化合物进行结构鉴定,并采用α-葡萄糖苷酶活性筛选模型对部分化合物进行活性筛选.结果:从玉竹地上部位中分离得到16个化合物,分别鉴定为:对羟基苯甲酸(1)、芹菜素-6-C-葡萄糖苷(2)、异金雀花素(3)、异槲皮苷(4)、肥皂草苷(5)、山柰酚-3-O-β-芸香苷(6)、芦丁(7)、异鼠李素-3-O-芸香苷(8)、牡荆素-2″-O-葡萄糖苷(9)、牡荆素-4″-O-葡萄糖苷(10)、牡荆素-2″-O-β-D-(6′″-乙酰基)-葡萄糖苷(11)、异牡荆素-2″-O-β-D-葡萄糖苷(12)、芹菜素-6-C-阿拉伯糖-葡萄糖苷(13)、槲皮素-7-O-[α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷](14)、金圣草黄素-7-O-槐糖苷(15)、金圣草黄素-7-O-[β-D-芹菜糖-(1→6)]-β-D-葡萄糖苷(16),并筛选了部分化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性.结论:其中,化合物2～6、10～16为首次从该植物中分离得到.化合物2具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性.

目的:探讨紫花牡荆素(CAS)对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:体外培养T24细胞，分为对照组、5、10、20 μmol/L CAS组、si-NC组、si-TM7SF4组、CAS+pcDNA组和CAS+pcDNA-TM7SF4组，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞的增殖抑制情况，Transwell法检测细胞迁移和侵袭的能力，Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和7次跨膜超蛋白家族成员4(TM7SF4)蛋白的表达水平，实时荧光定量PCR检测TM7SF4 mRNA的表达水平。结果:5、10、20 μmol/L CAS组T24细胞增殖抑制率分别为(17.68±1.41)%、(33.54±3.16)%和(61.44±5.50)%，均高于对照组[(0.00±0.00)%，均 P<0.001]。5、10、20 μmol/L CAS组细胞迁移数分别为(72.83±5.66)个、(59.13±4.27)个和(41.25±3.22)个，细胞侵袭数分别为(55.83±5.15)个、(42.19±3.06)个和(31.13±3.22)个，均低于对照组[分别为(86.11±5.16)个和(68.82±5.29)个，均 P<0.001]。5、10、20 μmol/L CAS组T24细胞中cyclin D1、MMP-2、MMP-9、TM7SF4蛋白表达水平、TM7SF4 mRNA表达水平均低于对照组(均 P<0.001)，p21蛋白表达水平高于对照组( P<0.001)。si-TM7SF4组T24细胞增殖抑制率[(50.35±4.67)%]高于si-NC组[(6.31±0.58)%， P<0.001]，si-TM7SF4组细胞迁移数[(53.51±4.18)个]和细胞侵袭数[(42.92±3.81)个]均低于si-NC组[分别为(85.26±4.99)个和(67.93±4.64)个，均 P<0.001]。si-TM7SF4组T24细胞中TM7SF4、cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均低于si-NC组(均 P<0.001)，p21蛋白表达水平高于si-NC组( P<0.001)。CAS+pcDNA-TM7SF4组T24细胞增殖抑制率[(21.45±2.46)%]低于CAS+pcDNA组[(64.06±4.49)%， P<0.001]，CAS+pcDNA-TM7SF4组细胞迁移数[(75.66±6.57)个]和侵袭数[(59.35±5.40)个]均高于CAS+pcDNA组[分别为(40.43±3.85)个和(30.25±3.32)个，均 P<0.001]。CAS+pcDNA-TM7SF4组T24细胞中TM7SF4、cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均高于CAS+pcDNA组(均 P<0.001)，p21蛋白表达水平低于CAS+pcDNA组( P<0.001)。 结论:CAS可能通过抑制TM7SF4表达抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭。

目的 分析二陈汤化裁方破壁饮片水溶液的化学成分及入血成分.方法 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive-MS)法对比复方样品、空白血清、含药血清色谱图,分析二陈汤化裁方破壁饮片水溶液在大鼠血清中的原形及代谢产物.结果 从复方样品中共鉴定出151个化学成分,通过对照品比对,最终确定了 11个成分(柠檬酸、绿原酸、橙皮苷、茯苓酸B、熊果酸、天麻素、巴利森苷A、牡荆素、金丝桃苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd).共鉴定出33个入血成分,其中28个为原形成分,5个为代谢产物.结论 本实验通过UHPLC-Q-Exactive-MS分析二陈汤化裁方破壁饮片的入血成分,为进一步阐明二陈汤化裁方破壁饮片的药效物质基础提供了参考.

目的 基于Notch信号通路探究牡荆素对哮喘模型小鼠的改善作用及机制.方法 采用卵清蛋白与氢氧化铝混悬液腹腔注射和卵清蛋白雾化激发的方法构建哮喘小鼠模型.将哮喘小鼠随机分为模型组、牡荆素组(40 mg/kg)、Notch激活剂组(1 mg/kg Jagged1)、牡荆素+Notch激活剂组(40 mg/kg牡荆素+1 mg/kg Jagged1),每组12只;另取12只小鼠设为对照组.各组小鼠灌胃/腹腔注射相应药物或生理盐水,每天1次,连续14 d.末次给药后,检测小鼠静息每分钟通气量(VE)、呼气峰流速(PEF),观察肺组织病理形态并检测纤维化变性情况,测定外周血中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例并计算Th17/Treg值,测定血清中白细胞介素18(IL-18)、IL-6、IL-17、IL-10水平,检测肺组织中Notch1、Delta样配体4(DLL4)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生严重病理损伤及炎症细胞浸润;VE、PEF、外周血中Treg细胞比例、血清中IL-10水平均显著降低(P＜0.05);肺组织中胶原容积分数(CVF),外周血中Th17细胞比例、Th17/Treg值,血清中IL-18、IL-6、IL-17水平,肺组织中Notch1、DLL4、Hes1蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05).与模型组比较,牡荆素组小鼠肺组织病理损伤明显改善,上述指标变化趋势被显著逆转(P＜0.05),且Notch激活剂Jagged1可显著逆转牡荆素对哮喘小鼠的上述药理功效(P＜0.05).结论 牡荆素可通过抑制Notch信号通路,改善哮喘小鼠肺功能、Th17/Treg免疫失衡及炎症反应,减轻肺组织病理损伤及纤维化.

目的 建立HPLC法同时测定知黄抗癌方中红景天苷、绿原酸、芒果苷、虎杖苷、盐酸小檗碱、异牡荆素、白藜芦醇的含量.方法 分析采用SPOLAR C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长275 nm.结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 7),平均加样回收率91.32%～106.95%,RSD 0.4%～2.9%.结论 该方法简便快速,专属性好,可用于知黄抗癌方的质量控制.

目的 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术比较板蓝根Isatidis Radix和大青叶 Isatidis Folium 的化学成分.方法 采用 Accliam 120 C18 色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm;Thermo Fisher),以 0.1％甲酸的乙腈溶液-0.1％甲酸的水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3mL/min,柱温为40 ℃,采用电喷雾离子源(ESI),在正、负离子模式下进行数据采集,以PeakView 1.2质谱分析软件分析数据.结果 通过化合物的保留时间、精确质荷比、二级质谱裂解碎片等信息,结合对照品、参考文献和Massbank等数据库共鉴定或指认出板蓝根和大青叶的71个共有成分,主要包括生物碱、黄酮、木脂素、含硫化合物、有机酸等类化合物;板蓝根特有成分6个,主要包括含硫化合物类等;大青叶特有成分2个,均为生物碱类.结论 该方法能够系统、快速地比较分析板蓝根和大青叶的化学成分,为其质量控制和药效物质基础研究提供了重要依据.

目的 建立一测多评(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)结合化学计量学及加权逼近理想解排序(technique for order preference by similarity to ideal solution,TOPSIS)在不同产地葎草Humulus scandens药材多指标定量检测及质量差异评价中的应用方法.方法 对 7 省 18 个批次葎草样品进行回流提取,以木犀草苷、白桦脂酸为内参物,采用QAMS同时测定提取物中 10 种有效成分(芦丁、牡荆素、木犀草苷、大波斯菊苷、木犀草素、芹菜素、齐墩果酸、白桦脂酸、β-谷甾醇和豆甾醇),并与外标法进行比较;按《中国药典》2020 年版四部方法检测浸出物、总灰分和酸不溶性灰分.采用化学识别模式和加权 TOPSIS法对QAMS法计算数据和浸出物、总灰分、酸不溶性灰分检测数据进行分析,建立葎草质量差异评价模型.结果 建立了多成分QAMS定量方法,方法学验证结果良好,以木犀草苷、白桦脂酸为内参物时相对校正因子的均值可用于定量分析,同时耐用性良好,2 种方法所得含量结果无明显差异.浸出物、总灰分和酸不溶性灰分检测结果稳定.18 批样品聚为 3 类,相邻产地聚为一组;木犀草苷、豆甾醇、大波斯菊苷和齐墩果酸可能是影响葎草产品质量主要潜在标志物;加权 TOPSIS法分析结果显示 18 批葎草质量评价贴近度(Jb)在0.244 8～0.688 4,其中S15 最大(0.688 4).结论 建立的QAMS、化学计量学及加权TOPSIS法可用于不同产地葎草中多指标定量检测及质量差异评价.

目的:基于肠道菌群探索帕宁Ⅰ号方改善帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠行为学和神经递质水平的作用机制.方法:从60 只小鼠中随机选取10 只作为正常组,其余小鼠腹腔注射MPTP(30 mg·kg-1)建立PD模型.将造模成功的50 只小鼠随机分为模型组、美多芭组、帕宁Ⅰ号方低剂量组、中剂量组及高剂量组,每组10 只.第 6 次注射MPTP后开始灌胃,连续14 d,每3 天进行1 次爬杆实验、旷场实验和步态分析实验.采用UPLC-HRMS法鉴定帕宁Ⅰ号方的活性成分,ELISA法检测纹状体多巴胺(dopamine,DA)含量,免疫组化法检测纹状体酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平,16S rRNA高通量测序技术检测肠道菌群结构.结果:与正常组比较,模型组小鼠的末次爬杆时间和步宽增加,运动路程和步长减少(P<0.000 1);与模型组比较,帕宁Ⅰ号方低剂量组、中剂量组、高剂量组及美多芭组小鼠的末次爬杆时间和步宽减少,运动路程和步长增加(P<0.000 1).帕宁Ⅰ号方的化学成分主要包括苯丙氨酸、3-吲哚乳酸、牡荆素等.与正常组比较,模型组小鼠纹状体DA含量下降(P<0.000 1);与模型组比较,帕宁Ⅰ号方中剂量组、高剂量组及美多芭组小鼠的纹状体DA含量升高(P<0.000 1).免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组小鼠纹状体TH表达水平降低(P<0.000 1);与模型组比较,帕宁Ⅰ号方高剂量组和美多芭组小鼠纹状体TH表达水平升高(P<0.01).与正常组比较,模型组小鼠Turicibacter、Odoribacter的相对丰度增加,Lactobacillus、Bifidobacterium、Prevotella的相对丰度减少.与模型组比较,帕宁Ⅰ号方高剂量组和美多芭组小鼠Prevotellaceae_Prevotella、Lactobacillus、Bifidobacterium、Prevotella的相对丰度增加.Staphylococcus、Turicibacter、Rikenella相对丰度与爬杆时间呈正相关(P<0.05);Prevotella_Prevotella相对丰度与步长呈正相关(P<0.05);Prevotella相对丰度与爬杆时间呈负相关,与旷场路程呈正相关(P<0.01);Lactobacillus、Bifidobacterium的相对丰度与步宽呈负相关(P<0.05).Staphylococ-ccus、Turicibacter相对丰度与DA含量、TH表达水平呈负相关(P<0.05);Prevotella相对丰度与DA含量、TH表达水平呈正相关(P<0.01);Lactobacillus相对丰度与TH表达水平呈正相关(P<0.05);Allobaculum相对丰度与DA含量呈正相关(P<0.05).结论:帕宁Ⅰ号方可能通过调节肠道菌群结构,增加有益菌比例,减少有害菌比例,从而改善PD小鼠的行为学和神经递质水平.

目的 研究战骨叶甲醇部位的化学成分及其抗炎活性.方法 战骨叶甲醇部位采用薄层色谱、柱色谱和HSCCC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.采用RAW264.7模型评价其体外抗炎活性.结果 从中分离得到12个化合物,分别为鉴定为牡荆素(1)、balanophonin(2)、桦褐孔菌二糖(3)、4-allyl-2,6-dimethoxyphenol-β-D-glucopyranoside(4)、去氢催吐萝芙木醇(5)、地芰普内酯(6)、(E)-4-((1S,3R,4R)-1-hydroxy-4,5,5-trimethyl-7-oxabicyclo[4.1.0]heptan-1-yl)but-1-en-3-o-ne(7)、(E)-4-hydroxyphenylprop-7-ene 4-O-β-D-glucopyranoside(8)、4-羟基苯甲酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、vicenin(10)、齐墩果酸(11)、芝麻素(12).化合物 1、2、5、7、10、12 对 NO 均具有良好的抑制活性,IC50值分别为(26.42±2.5)、(21.24±2.2)、(25.88±1.9)、(29.72±2.1)、(8.90±1.1)、(9.73±0.7)μmol/L.结论 化合物2、4～8为首次从豆腐柴属植物中分离得到.化合物1、2、5、7、10、12具有抗炎活性.

目的 研究达立通颗粒主要活性成分在正常和功能性消化不良(FD)模型大鼠胃肠道组织中的分布差异.方法 采用夹尾刺激结合不规律饮食双因素干预方法建立FD模型.12只大鼠(对照、模型各6只)用于FD模型验证,进行胃、小肠排空实验,HE染色后进行胃肠组织病理学观察;36只大鼠(对照、模型各18只)用于胃肠道组织差异分布研究,禁食不禁水18 h,按22.4 g·kg-1剂量(8倍临床等效剂量)ig给予达立通颗粒1次,于给药后1、3、6h收集各组大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠.应用超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)法检测各组织牡荆素-4"-O-葡糖苷、原阿片碱、黄连碱、小檗碱、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素、去甲基川陈皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯、原儿茶酸、伞形花内酯、木犀草苷、橙皮苷、木犀草素、柚皮素、橙皮素、白杨素含量,采用ACQUITY HPLCTM HSS T3(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,柱温为40 ℃,0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min-1,进样量为2μL.结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P＜0.001),胃、小肠排空率显著降低(P＜0.001),十二指肠肠黏膜的紧密连接被破坏,但未出现胃肠组织的器质性病变,符合FD的病理特征.建立的UPLC-QTRAP-MS/MS方法中,各化合物线性关系良好,R2R≥0.990 0.对建立的检测方法进行专属性、精密度与准确度、提取回收率、稳定性和基质效应等方面的考察,均符合要求.各成分在对照和模型组大鼠胃肠道组织中浓度差异明显,且在各组织中达到最高浓度的时间点差异较大,模型组出现达峰时间延后的现象;与对照组比较,模型组大鼠胃组织中化合物的暴露水平降低,可能与FD引起胃肠道蠕动减慢有关.橙皮苷、橙皮素、柚皮素、原儿茶酸、去氢木香内酯、川陈皮素、去甲基川陈皮素、小檗碱和桔皮素在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中暴露水平较高,且在对照组和模型组中各时间点下的浓度差异较显著.结论 经方法学验证,所建立的UPLC-QTRAP-MS/MS法灵敏、专属性强、准确性高,适用于大鼠胃肠道组织中达立通颗粒主要活性成分的胃肠组织分布研究.达立通颗粒主要活性成分在正常和FD模型大鼠胃肠组织分布具有显著性差异.