培养高级应用型人才是落实教育强国的关键.随着国家对职业技能教育的愈发重视,德国"双元制"教育模式以其理论与实践紧密结合的特点获得普遍认可和借鉴.文章通过分析德国"双元制"护理教育特点,以及其与我国现行护理职业教育的区别,在人才培养模式、医疗企业行业、带教师资、政策法规等方面,探讨在自贸港建设背景下,德国"双元制"对我省"3+2"专升本护理教育改革创新的一些启示.

目的:研究影响医养结合机构医生身份认同的制度逻辑,为提升医养结合机构医生的岗位吸引力、降低流失率提供启示.方法:基于制度逻辑理论,运用清晰集定性比较分析方法,分析影响医养结合机构医生身份认同的制度逻辑.结果:政府逻辑通过多重政策调控,影响医养结合机构医生身份认同;市场逻辑的影响路径有3条,是效率、利润、开拓市场、打造品牌四个因素的不同组合;政府逻辑与市场逻辑兼容作用的影响路径表现为"政策倾斜加强机构合法性实现经济效益"和"资源帮扶助力机构发展"的共同联动;政府逻辑与市场逻辑冲突作用的有效路径为"对政府购买项目过度依赖会弱化医养结合机构的市场竞争能力".结论:制度逻辑的单一作用以及交互作用均会对医养结合机构医生的身份认同产生影响,对此应充分发挥政府的规划引领作用,合理运用市场功能,通过政府的资源助力机构发展,同时减少机构对政府购买服务的依赖性,从而提升医养结合机构医生的身份认同.

菌根是真菌与植物之间形成的互惠互利的营养共生体,对生态环境有重大的意义.外生菌根真菌与植物互作机制以及真菌基因功能的深入研究都需要对菌根真菌进行遗传转化,本研究以外生菌根真菌模式生物双色蜡蘑(Laccaria bicolor)为研究对象,选择细胞核中的核小体蛋白H2B基因为目的基因,以pCEBN为表达载体,融合红色荧光蛋白,最终构建在真菌中表达的双元载体,使用根瘤农杆菌介导转化法转化双色蜡蘑菌丝,随后利用PCR对真菌转化子进行验证后,通过激光共聚焦显微镜观察到菌丝细胞核中的红色荧光,成功将融合荧光蛋白转化菌根真菌,为后续研究菌根真菌中基因的亚细胞定位提供了实验平台.结果表明,利用双元载体和农杆菌转化方法,建立了高效的双色蜡蘑转化体系(93.33％),在激光共聚焦显微镜下观察到菌丝细胞核中红色荧光信号,验证了融合荧光蛋白在双色蜡蘑中的成功表达.本研究成功地构建了菌根真菌中的核小体蛋白和红色荧光蛋白融合表达的真菌转化体系.

[目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达.[方法]根据GenBank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404.农杆菌注射渗透法对意大利生菜叶片进行遗传转化,固相酶联斑点实验和免疫印迹实验检测感染叶片总蛋白提取物,分析外源基因表达效果.[结果]限制酶切验证获得共表达植物表达载体pCAMBIA2301-P1-3CD.感染叶片的外源基因表达产物中具有抗VP1抗体结合活性的蛋白,其分子量约39 kDa.[结论]成功构建EV71 3CD和P1基因双元植物表达载体,其在意大利生菜叶片中的表达产物具有免疫反应性.为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据.

Helitron是一种广泛存在于真核生物中的可移动遗传元件.与其他转座子不同,自主Helitron元件可编码具有复制引发(Rep)和解旋酶(Hel)结构域的转座酶,并通过滚环复制的方式在基因组中进行扩张.本研究对9种尖孢镰刀菌中的自主Helitron元件进行系统分析,结果表明尖孢镰刀菌中存在两类自主Helitron元件FoHeli1与FoHeli2.其中FoHeli1成员间序列高度相似,并具有明晰的边界特征:3’端为保守的“TATTTT”序列,其上游可形成稳定的发夹结构,且发夹上游可与5’端形成12bp的反向互补结构.基于上述分析结果,从尖孢镰刀菌Fo4287菌株中克隆获得完整的FoHeli1元件,并通过构建双元转座系统及PEG介导的原生质体转化,证明尖孢镰刀菌中的FoHeli元件可在禾谷镰刀菌PH-1菌株的基因组中发生跳转.

通过对我国医院效率评价实证研究文献进行筛选和计量分析发现,研究经历了碎片化—双元化—规模化的阶段;研究对象以综合医院、二三级混合医院、地方系统、公立医院为主;研究内容集中于综合效率、技术效率、纯技术效率方面;评价方法以DEA的CCR和(或) BCC为主;指标选择以定性为主(如: 纯文献分析占47.36% ) ,且主要指标几乎为内因设置,使用频次排前3位的是:门急诊人次、床位数和固定资产、总支出;数据来源主要有公开获得、内部资料、各种调查、医院自报,且54.21%为单一渠道.医院效率评价聚焦于二级以上综合公立医院, 主要以DEA相对效率为主, 涉及内容多、地域广、跨度大.但指标选择、数据来源、因素量化等仍制约成果质量,研究者和管理者对效率评价的需求不平衡、认识不充分、知识不对等以及相关政策缺乏共同阻碍了成果转化,需要从顶层设计上建立符合我国医院实情的效率评价机制.

[目的]CRISPR/Cas9是近些年报道较多的基因编辑新工具,具有简便高效、特异性强等优势.BmSuc1是从鳞翅目经济昆虫家蚕Bombyx mori体内发现的编码β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,β-FFase)的基因,也是首个被克隆和鉴定的动物型β-FFase编码基因.β-FFase是作用于果糖基的蔗糖水解酶,BmSUC1可能与家蚕防御桑叶生物碱的生理过程有关,但目前其发挥作用的分子机制尚不清晰.为了解析BmSuc1在蚕体的作用途径及其生理功能,本研究基于CRISPR/Cas9基因编辑系统构建表达双元sgRNA的CRISPR载体,用于敲除家蚕基因组中的BmSuc1基因.[方法]根据目的基因BmSuc1的ORF序列设计2条sgRNA,通过同源重组的方法分别插入CRISPR载体的SalⅠ和Nhe Ⅰ酶切位点.进而利用转基因显微注射技术将该编辑载体注入Go代蚕卵,经催青孵化饲养家蚕并自交制备G1代蚕种.[结果]PCR验证及测序结果均表明CRISPR编辑载体构建成功.根据DsRed2红色蛋白的荧光标记,从G1代家蚕幼虫中成功筛选出阳性转基因个体.[结论]本文详细介绍了表达双元sgRNA的CRISPR载体的构建方法,所获得的阳性转基因家蚕对于下一步探讨BmSuc1在家蚕糖类营养的吸收与利用途径中的作用奠定了重要的实验基础,有助于阐明蚕-桑相互选择和适应的分子机制.

该研究以哥伦比亚生态型野生拟南芥为材料,将甜瓜CmSAMDC基因构建到植物双元表达载体pCAMBIA1304上,采用农杆菌介导法转入拟南芥,在含有50 mg/L潮霉素(Hyg) MS固体培养基上筛选转基因后代,并利用T3代转基因幼苗进行耐盐性分析.结果显示:(1)成功构建了植物超表达载体35S∷CmSAMDC,并经农杆菌介导法转化拟南芥,潮霉素抗性筛选后获得了转CmSAMDC基因拟南芥T3代植株.(2)转CmSAMDC基因拟南芥T3代幼苗在含100、150、200 mmol/L NaCl培养基中,侧根长势比野生型植株更为健壮;在200 mmol/L NaCl浇灌处理后,转CmSAMDC基因T3代植株仍能维持正常生长,而野生型植株的生长明显受到抑制;在400 mmol/LNaCl浇灌处理后16 d,野生型植株逐渐死亡,而转基因植株仍能继续存活;对盐胁迫后植株的脂质过氧化程度(MDA)测定显示,野生型植株MDA水平较转基因植株上升更为明显.研究表明,过表达甜瓜CmSAMDC基因增强了转基因拟南芥的耐盐性.

有害疣孢霉Hypomyces perniciosus是引起双孢蘑菇Agaricus bisporus湿泡病的病原真菌,目前其致病分子机理尚不清楚,而高效稳定的遗传转化体系和突变体库构建是挖掘和研究病原菌致病基因的基础和有效手段.因此,本实验以高致病力的有害疣孢霉菌株WH001为研究对象,采用冻融法将双元载体pBHt1转入农杆菌AGL-1中,建立并优化根癌农杆菌介导的遗传转化体系,并利用其构建T-DNA插入突变体库.结果表明有害疣孢霉菌株WH001的潮霉素(Hygromycin,Hyg)耐受浓度为250ng/L,当农杆菌侵染液浓度OD600=1,侵染时间为30min,乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)浓度为1.5mg/mL,共培养时间为3d时,转化体系效率最高.然后利用该优化体系构建有害疣孢霉的突变体库,通过PCR检测和形态学鉴定获得若干表型发生改变、稳定遗传的T-DNA插入突变体,与原菌种WH001相比,突变体在菌丝形态、生长速率、色素分泌和致病力等方面发生改变.本研究为进一步挖掘有害疣孢霉未知基因功能、解析生物学性状、探讨致病分子机制奠定基础.

为了实现罗汉果生产中免除人工授粉和果实无籽化,该研究利用pBI121-Gus构建果实特异启动子2A11与生长素合成相关基因iaaM的嵌合基因(2A11-iaaM)过量表达载体,以罗汉果雌株叶盘为材料,采用农杆菌介导法建立罗汉果高效遗传转化体系,转化和创制单性结实罗汉果种质,通过基因特异引物对的PCR扩增,初步检测出转基因阳性植株,将之移栽大田,观察转基因植株的单性结实性的表现.结果表明:构建罗汉果单性结实性相关的pBAI-Gus植物双元表达载体获得成功;建立了农杆菌介导的罗汉果叶盘遗传转化优化体系,即农杆菌菌液OD600值为0.3～0.5,侵染10 min,最优选择培养基为MS+TDZ 0.7 mg?L-1+IBA 0.5 mg?L-1+Kan 5 mg?L-1+Cef 300 mg?L-1;经PCR鉴定共获得4株转基因阳性雌株;将阳性植株扩繁后移栽田间,经田间调查发现,24株阳性扩繁植株中有5株正常开花,占总植株数的20.8％,且其子房未经人工授粉发育成幼果,表现单性结实性.在载体构建和农杆菌介导的罗汉果遗传转化体系优化的基础上,将外源单性结实相关嵌合基因整合进罗汉果基因组并得到表达,为后续研究单性结实罗汉果的遗传生理,创制转基因罗汉果单性结实新种质,以及克服其产业化中需要人工授粉和无籽化提供了理论和应用基础.