目的:优化超声辅助酶提取天麻中天麻素工艺并通过双水相萃取和大孔树脂进一步纯化,为精制天麻素提供工艺参考.方法:通过单因素试验考察和正交优化试验得到最佳超声辅助酶提取条件.通过双水相工艺考察得到最佳双水相萃取条件.通过大孔树脂工艺考察对大孔树脂型号进行筛选,对上样条件、洗脱条件进行优化.结果:超声辅助酶提取选择α-淀粉酶,最佳提取条件设定为料液比为1∶30,加酶量为0.8%,酶解时间为80 min,酶解温度为60℃,酶解pH值为5.5.最佳双水相萃取条件设定为乙醇体积分数为47.5%,硫酸铵质量分数为15.0%,萃取液浓度为0.2 g/mL,大孔树脂筛选型号为HPD100,最佳上样浓度为0.2 g/mL,径高比为1∶5,上样流速为3 BV/h,上样量为100 mL,最佳洗脱液体积分数为30.0%,洗脱流速为4 BV/h,洗脱液用量为230 mL.结论:本研究对超声辅助酶提取工艺优化结果较好,采用双水相体系和大孔树脂纯化,使天麻素纯度明显提高.且这一系列工艺稳定可靠,可为后续制剂及新药研发奠定基础.

离子液体具有结构可调、不易挥发、选择性高等优点,被认为是一种新型可替代传统溶剂的绿色溶剂,近年来受到广泛关注.现就离子液体的结构、性质与分离机制进行阐述,并从微波辅助萃取(MAE)、超声辅助萃取(UAE)、超声微波协同萃取、双水相萃取四方面介绍离子液体在中药提取中的应用.

目的 通过星点设计-响应面法优化黄芪双水相(乙醇-磷酸氢二钾)萃取工艺.方法 以乙醇质量分数、磷酸氢二钾溶液质量分数和黄芪投料比为影响因素,总黄酮、总皂苷萃取率为评价指标,星点设计-响应面法优化工艺.结果 最佳条件为乙醇质量分数27.97％,磷酸氢二钾溶液质量分数22.03％,黄芪投料比1∶58.85,总黄酮萃取率达74.13％(集中在上层),总皂苷萃取率达81.34％(集中在下层).结论 该方法简单精确,预测性良好,可用于萃取黄芪中的总黄酮和总皂苷.

阿尔兹海默病是一种神经退化性疾病,石杉碱甲作为一种强效可逆性胆碱酯酶抑制剂,成为国内外治疗的首选药物之一.但因石杉碱甲植物提取原料短缺产量低,无法满足市场需求.近年研究可采用酸浸取,酶辅超声,双水相萃取或氯仿萃取,柱层析及阳离子交换树脂纯化等方法使石杉碱甲提取率由原来的0.02281％提高到5％,生产周期从一个月缩短至2d左右.通过优化提取工艺可使提取率大大提高,但要解决石杉碱甲产量过低的根本问题,还需从分子生物学层面入手,寻找编码石杉碱甲生物合成过程中的关键酶基因,进而利用基因工程方法改造菌种,从而达到工业化生产要求.目前报道的赖氨酸脱羧酶、酮胺氧化酶、N-甲基转移酶、细胞色素P450推测均不是限速酶,而加双氧酶极有可能为限速酶.

为探讨麦麸酯酶应用于农残检测的可行性,采用固蓝B染色体系,以酶活抑制率为指标,研究了经Sephadex Gr-200凝胶过滤层析、双水相萃取、硫酸铵分段盐析3种方式纯化后的麦麸酯酶对6种农药的敏感性及最低检测限(LOD).结果显示,经Sephadex G-200凝胶过滤层析、双水相萃取、硫酸铵分段盐析后的麦麸酯酶对6种农药的LOD范围分别是0.003～0.193 mg/L、0.005～0.116 mg/L和0.039～0.386 mg/L.其中,经凝胶过滤层析和双水相萃取后的麦麸酯酶对6种农药的敏感性相对于粗酶液均有不同程度的提高,而经硫酸铵分段盐析后的麦麸酯酶对6种农药的敏感性低于粗酶液.该研究为麦麸酯酶应用于农药残留检测奠定了一定的技术基础.

深山含笑是一种常绿乔木,具有较好的园林观赏价值,其叶片在每年春天新旧叶交替时,会陆续凋落而不能实现其经济价值;我们前期研究发现深山含笑成熟叶片具有较高的过氧化物酶活性,而过氧化物酶在内分泌干扰物生物酶法降解途径中发挥着重要作用.为充分开发深山含笑叶的经济价值,提高资源的利用效率,我们对深山含笑叶过氧化物酶进行了纯化并初步研究了其性质;在此基础上,进一步研究了深山含笑叶过氧化物酶在降解环境污染物双酚A上的特性.结果显示,经过非离子表面活性剂(吐温-80)抽提、双水相萃取、DEAE-Sepharose离子交换层析,首次从深山含笑叶片中快速分离提纯结合态过氧化物酶,相对可溶性过氧化物酶纯化倍数为55.2倍,回收率为19％.该酶的比活力为18 999 U/mg蛋白,以愈创木酚为反应底物的最佳pH值为4.5,最适温度为50℃;具有较宽的pH稳定范围,热稳定性较好,60℃以下不易失活.深山含笑叶过氧化物酶对BPA具有良好的清除能力,在pH4～7,温度30～ 40℃,H2O2/BPA摩尔浓度之比达0.8条件下,经过3h,10000 U/L POD对0.2 mmoL/L BPA清除率达90％以上,深山含笑过氧化物酶在酚类物质生物酶法催化降解途径中具有潜在的重大利用价值.

目的:建立溴化1-己基-3-甲基咪唑离子液体([HMIM]Br)/十二烷基硫酸钠溶液(SDS)双水相紫外光谱法测定达那唑的方法.方法:在HAc-NaAc(pH=7.0)缓冲溶液中,以适量溴化1-己基-3-甲基咪唑离子液体和十二烷基硫酸钠溶液组成的双水相体系萃取达那唑,取富集相适当稀释,采用紫外光谱法对其进行定量分析.结果:在优化条件下,以吸光度对相应的达那唑浓度绘制工作曲线,线性范围为1.5～25.0μg/mL时,线性方程为F=0.002890+0.04978C(μg/mL),r=0.9997,检出限为0.82μg/mL(S/N=3),日内、日间精密度均小于5.0％,回收率大于90％.结论:本方法专属性强,灵敏度高,线性范围宽,操作简便,适用于达那唑胶囊中达那唑的含量测定.

本文综述近年来离子液体结合微波辅助萃取技术、超声辅助萃取技术和双水相萃取技术提取萜类化合物的应用情况,对离子液体的优势和目前存在的问题进行探讨,为离子液体提取萜类化合物及相关研究提供一定借鉴和参考.

目的:建立猴耳环多酚的改良型双水相萃取体系.方法:以猴耳环多酚含量、提取效率和分配系数为指标,采用单因素实验筛选双水相萃取体系的料液比、乙醇质量分数和超声时间.制备猴耳环不同极性部位的双水相萃取液,以多酚含量和抗氧化活性[1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的半数抑制浓度(IC50)]为指标,结合多酚类成分与抗氧化活性的灰色关联度分析,筛选改良剂.考察含不同质量分数(0～90％)改良剂的改良型双水相萃取体系对猴耳环多酚提取的影响,并与传统提取工艺(超声提取和加热回流提取)进行比较.结果:最优双水相萃取体系为料液比1:45,乙醇质量分数40％,硫酸铵质量分数11％,室温下超声提取20 min.3次验证实验中,猴耳环多酚含量、提取效率和分配系数分别为(28.35±1.01)％(RSD=3.56％,n=3)、(98.87±0.19)％(RSD=0.19％,n=3)和13.25±0.71(RSD=5.39％,n=3).改良剂为乙酸乙酯.当乙酸乙酯-乙醇混合溶液中乙酸乙酯的质量分数为70％时,改良型双水相萃取体系提取所得萃取物中多酚含量和抗氧化活性与超声提取、加热回流提取比较差异均无统计学意义(P>0.05),但得率和转移率均显著高于超声提取、加热回流提取(P<0.05).结论:成功建立提取得率和转移率优于传统提取方法的改良型双水相萃取体系,可一步提取猴耳环多酚.

目的 采用双水相萃取技术对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白A(fHBP-A)进行分离纯化,研究不同双水相萃取体系对fHBP-A粗提纯化的影响,应用响应面法优化fHBP-A在PEG/(NH4)2SO4双水相体系中的萃取工艺.方法 首先建立 PEG2 000/(NH4)2SO4、PEG4 000/(NH4)2S04、PEG6 000/(NH4)2SO4和乙醇/(NH4)2SO4共4种双水相萃取体系相图;然后考察PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取体系pH这4个因素对fHBP-A萃取率、下相中fHBP-A纯度的影响;最后采用Box-Behnken试验设计以及响应面分析对fHBP-A双水相萃取工艺进行优化.结果 确定fHBP-A双水相萃取的最佳工艺条件为PEG 4 000质量分数为28％、萃取体系pH为6.0、(NH4)2SO4质量分数为13％.此条件下fHBP-A纯度达到68.11％.结论 采用优化的工艺可以较好地提取及初步纯化fHBP-A,为进一步fHBP-A的纯化研究奠定基础.