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临床细菌与H3N2流感病毒共感染特征及病毒血凝素裂解位点的变异研究
编辑人员丨6天前
目的:了解流感样病例中临床细菌与H3N2流感病毒共感染及病毒血凝素(HA)裂解位点的变异特征。方法:收集2013年1月至2018年12月的流感样病例样本12 250份,实时荧光PCR检测H3N2流感病毒。选取部分流感阳性病例样本,采用实时荧光PCR的方法进行金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌的检测,分析其临床感染特征。分离流感病毒,RT-PCR扩增病毒HA,测序,构建进化树,并分析裂解位点氨基酸变异特征。结果:2013年以来,每年都有H3N2流感病毒的流行,H3N2在流感阳性病例中的占比为44.69%。随机选取2013—2018年间流感流行高峰的H3N2阳性病例样本295份,29.2%的病例存在临床细菌感染。对分离到的210株H3N2流感病毒进行HA裂解位点测序,68株存在变异,其中63株为K342R单氨基酸位点变异,裂解位点由PEKQTR转变为PERQTR。裂解位点未变异样本的细菌共感染率为31.25%(45/144),裂解位点变异样本的细菌感染率为23.53% (16/68),二者的差异没有统计学意义(χ 2=1.34, P>0.05)。杭州地区流行的H3N2流感病毒主要属于3C.3a和3C.2a两个进化簇,裂解位点发生K342R变异的病毒属于3C.3a进化簇。 结论:H3N2流感病毒在杭州地区的流感病毒流行中占据重要地位。流感阳性病例存在着一定程度的细菌共感染。裂解位点变异具有一定的地域流行特征,但与细菌共感染没有显著相关性。
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编辑人员丨6天前
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LiaSR双组分信号转导系统调控变异链球菌耐酸和生物膜形成能力的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探究LiaSR双组分信号转导系统对变异链球菌(Sm)593号(Sm 593)临床株耐酸和生物膜形成的影响及相关机制。方法:以Sm 593及其liaS和liaR基因敲除株为研究菌株,采用全自动生长曲线测定仪检测并绘制pH=5.5环境中各菌株的生长曲线;用菌落计数法检测细菌的适应性耐酸能力;使用Laurdan探针、氢-钾腺苷三磷酸(ATP)酶试剂盒、质子通透性检测实验和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)探究LiaSR双组分信号转导系统介导的耐酸机制。体外构建各菌株的生物膜,通过结晶紫染色法、菌落计数法、SYTOX探针检测法和蒽酮-硫酸法探究各菌株的生物膜总量、活菌数、胞外DNA(eDNA)和胞外多糖含量;采用RT-qPCR法检测胞外多糖合成相关基因的表达情况。结果:pH=5.5环境中,liaS和liaR基因敲除株的生长受到显著抑制( P<0.05)。适应性耐酸曲线显示敲除株与野生株相比,固有耐酸和适应性耐酸能力均显著下降( P<0.05)。对三菌株无预酸化处理20和40 min以及预酸化处理20和40 min后,liaS基因敲除株生存率[(8.98±2.00)%、(0.18±0.07)%、(14.88±8.64)%、(0.82±0.91)%]和liaR基因敲除株生存率[(0.38±0.19)%、(0.34±0.18)%、(7.89±2.02)%、(1.52±0.37)%]均分别显著低于野生株[(32.49±9.75)%、(1.27±0.32)%、(62.76±29.06)%、(8.02±1.25)%](均 P<0.05)。此外,liaS和liaR敲除株膜流动性(0.18±0.04和0.18±0.05)均显著低于野生株(0.08±0.05)(均 P<0.01);不饱和脂肪酸合成基因fabM表达水平(0.52±0.11和0.57±0.05)与野生株(1.04±0.30)相比均显著降低约1/2(均 P<0.001);H +-ATP酶活性(917.06±59.53和469.53±47.65)与野生株(127.00±50.71)相比显著升高7.22和3.70倍(均 P<0.001),且编码H +-ATP酶基因atpD的表达水平(3.39±0.21和1.94±0.17)也较野生株(1.00±0.15)显著升高3.39和1.94倍(均 P<0.01)。liaR基因敲除株的终末pH值(4.76±0.01)显著低于野生株(4.90±0.00),liaS基因敲除株的终末pH值(5.19±0.01)显著高于野生株(均 P<0.001)。liaS和liaR基因敲除株与野生株相比,Sm 593生物膜总量未发生明显变化,生物膜活菌数均显著少于野生株(均 P<0.05),且eDNA含量均显著高于野生株(均 P<0.01)。liaS基因敲除株生物膜水溶性多糖含量与野生株相比显著增加1.88倍( P=0.003)。liaS和liaR基因敲除株胞外多糖合成相关基因gtfD表达水平较野生株显著升高47.43和16.90倍(均 P<0.05),liaS基因敲除株中gtfC基因比野生株显著高表达1.65倍( P=0.014)。 结论:LiaSR双组分信号转导系统通过调控膜不饱和脂肪酸合成和胞膜流动性,参与Sm 593的耐酸过程;LiaR反应调节蛋白还可参与调节膜质子通透性,增强Sm 593的耐酸能力;此双组分信号转导系统可负向调控生物膜胞外基质的产生。
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编辑人员丨6天前
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儿童化脓性脑膜炎流行病学、治疗及遗传学研究进展
编辑人员丨6天前
化脓性脑膜炎(purulent meningitis,PM)是导致儿童中枢神经系统感染及后遗症的主要原因之一。PM致病菌的种类与地区、社会经济、环境因素及年龄等有关。随着疫苗的普及,PM流行病学特征发生改变,肺炎链球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、B族链球菌仍是我国儿童PM主要病原菌。抗生素是主要治疗手段,皮质类固醇在PM的治疗中存在争议。常规疫苗接种可预防PM及其并发症。免疫系统的遗传变异被证实与PM的易感性有关。该文综述了儿童PM流行病学变迁、治疗及遗传关联的最新进展,为该疾病的诊断、治疗提供帮助。
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编辑人员丨6天前
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csn2基因缺失对变异链球菌饥饿耐受和寡营养环境下胞外多糖合成的影响
编辑人员丨6天前
目的:探索csn2基因缺失对变异链球菌( Streptococcus mutans,Sm)饥饿耐受和寡营养环境下胞外多糖合成的影响。 方法:培养Sm csn2基因的缺失菌株及回补菌株,通过设置不同浓度梯度培养基创造寡营养生长环境供其生长。生长曲线检测寡营养生长环境下Sm的生长,结晶紫染色,扫描电镜、激光共聚焦显微镜检测寡营养生长环境下Sm的生物膜表型,蒽酮硫酸法检测Sm生物膜中胞外多糖的量,实时荧光定量PCR检测胞外多糖合成相关基因的表达。结果:生长曲线结果显示csn2基因缺失抑制了饥饿胁迫下Sm的生长,激光扫描共聚焦显微镜检测结果显示野生型菌株、csn2基因缺陷株、回补菌株在营养充足培养条件下所得生物膜胞外多糖/细菌比值为0.44±0.07、1.05±0.13和0.57±0.08,在寡营养条件下所得生物膜胞外多糖/细菌比值为0.93±0.24、3.05±0.21和1.32±0.46,表明csn2基因缺失增强了Sm在寡营养环境下胞外多糖的合成能力;在饥饿胁迫下,胞外多糖合成相关基因gtfB、gtfC的表达水平分别显示出2.5和1.8倍的增加,gtfD的表达水平下调2/3。结论:csn2基因对Sm的生理功能及毒力特性表现出多种影响,包括饥饿耐受和胞外多糖合成,这些改变可能与csn2基因缺失引发复杂的调控网络相关。
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编辑人员丨6天前
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白细胞介素1受体相关激酶4缺陷症一例并文献复习
编辑人员丨6天前
目的:总结儿童白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)缺陷症的临床特点。方法:回顾性分析2019年6月至2020年8月多次入住深圳市儿童医院神经内科的1例确诊IRAK4缺陷症患儿的临床资料及诊治经过,并分别以“IRAK4基因变异”“白细胞介素1受体相关激酶4缺陷症”“IRAK4 gene variation”“IRAK4 deficiency”为检索词分别在中国知网、万方、维普及PubMed数据库查询建库至2021年1月的相关文献,总结分析该病的临床特点。结果:患儿 男,6岁,易反复患呼吸道感染性疾病,予抗菌药物治疗后好转,临床表现有严重的肺炎链球菌脑膜脑炎、多发性硬化、侵袭性椎间盘炎、炎性骨质破坏。家系全外显子测序显示其IRAK4基因存在1个纯合移码变异:NM_016123. 3:c.540del(p.Phe180Leufs*26),父母均为杂合子。10篇英文文献共详细报道23例,加上本例,合计24例患儿,其中男13例、女11例,起病年龄8日龄至7岁,主要表现为复发性侵袭性细菌感染23例,肺炎链球菌脑膜炎11例,肺炎链球菌和(或)金黄色葡萄球菌败血症9例,铜绿假单胞菌脑膜炎、沙门菌感染、金黄色葡萄球菌皮肤脓肿、复发性病毒感染各1例。有2例合并自身免疫性疾病,1例为自身免疫性脑炎,1例为幼年特发性关节炎。24例患儿中10例死亡,其中9例在婴儿期死亡。存活患儿中多确诊早且预防性使用抗菌药物和静脉注射用人免疫球蛋白,但易感性逐年降低,14岁可接近正常儿童。24例患儿中IRAK4基因纯合变异21例,复合杂合变异3例。共有15种变异,移码变异9种、无义变异4种、错义变异2种。有一个备选变异热点:c.877 C>T,有3例。结论:IRAK4缺陷症主要表现为复发侵袭性细菌感染,以肺炎链球菌脑膜炎或败血症多见,少数伴自身免疫性疾病。婴儿期病死率高,早期确诊并治疗可避免重症或病死。
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编辑人员丨6天前
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基于网络药理学及实验验证探讨黄连治疗龋齿的作用机制
编辑人员丨6天前
目的:探索使用网络药理学方法和动物实验研究黄连治疗龋齿的作用机制。方法:通过中药系统药理学(TCMSP)数据库与分析平台筛选出黄连有效成分及其靶点,并通过GeneCards数据库在线检索疾病靶点。在Venny 2.1网站筛选出黄连和龋齿的交集靶点,并将交集靶点在线进行蛋白-蛋白相互作用分析和基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。然后,使用Cytoscape制作"成分-靶点-通路"网络图。将大鼠随机分为模型组和黄连组,建立龋齿大鼠模型。模型组大鼠用浸有150 μl 0.9%氯化钠溶液小棉球反复涂擦大鼠磨牙各面5 min,黄连组大鼠将浸有黄连(5.8 mg黄连融入150 μl 0.9%氯化钠溶液)的小棉球反复涂擦大鼠磨牙各面5 min。2组大鼠每周处理1次,连续处理4周。对变异链球菌菌落数进行计数,并采用酶联免疫法检测血清丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、JUN、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果:黄连中有11个有效成分,通过干预54个靶点,调节多个分子通路,从而治疗龋齿。槲皮素、小檗碱、黄藤素、小檗浸碱和四氢小檗碱等是核心成分,AKT1、JUN、IL-6、TNF、Bcl-2为核心靶点。GO分析显示,BP主要包括细胞因子活性、信号受体激活剂活性、信号受体调节剂活性、细胞因子受体结合和受体配体活性等;CC主要包括对脂多糖的反应、对细菌分子的反应、细胞对脂质的反应、炎症反应和细胞群体增殖负调控等;MF主要包括膜筏、膜微区、细胞外基质、外部封装结构和质膜蛋白复合物等。KEGG分析显示晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、TNF、IL-17、Toll样受体、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子-κB(NF-κB)、表皮生长因子受体(EGFR)、Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAK-STAT)、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)等信号通路与黄连治疗龋齿相关。动物实验结果显示,黄连治疗后血清Bcl-2蛋白表达增加,血清AKT1、JUN、IL-6、TNF等蛋白表达减少。结论:黄连可以通过多种通路参与调控龋齿的靶点,具有良好的治疗效果和广泛的作用机制,有望成为开发治疗龋齿的中成药的重要组分。
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编辑人员丨6天前
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基于环介导等温扩增和干式试剂技术的结核分枝杆菌快速检测方法的建立
编辑人员丨6天前
本研究使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和干式试剂技术,研发一种可以常温存储的结核分枝杆菌快速检测试剂。LAMP核酸扩增技术基于4或6条特异性引物,依靠链置换DNA聚合酶,使DNA在恒定温度下不断合成。所研LAMP技术反应体系使用实时荧光检测方法在20 min内检出结核分枝杆菌IS6110靶基因,且灵敏度接近PCR法,但精密度不及PCR法(LAMP法变异系数18.9%,PCR法变异系数3.4%),故LAMP法更适合定性检测。LAMP体系对脑膜炎双球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、风疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道腺病毒(3 型)、呼吸道腺病毒(7 型)、呼吸道合胞病毒B和副流感病毒2型等10种病原体均无扩增,表现出较好的特异度。在此基础上,使用烘干和冻干技术,研发干式LAMP技术反应试剂。干式试剂在50 ℃环境下存储10 d性能无衰减,等效常温(25 ℃)可保存6个月以上。在临床样本测试中,干式试剂可20 min内有效检出结核分枝杆菌的核酸。综上,本文研发的常温存储快速检测试剂搭配等温扩增仪可对结核分枝杆菌进行快速鉴定。
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编辑人员丨6天前
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胆总管结石合并胆道感染患者胆汁细菌谱和耐药性变异分析
编辑人员丨6天前
目的:分析胆总管结石合并胆道感染患者胆汁培养病原菌分布,以期指导临床优化抗生素的应用。方法:选择2017年3月30日至2021年12月31日在青岛大学附属医院行经内镜逆行胆胰管造影术治疗的753例胆总管结石合并胆道感染患者,抽取胆汁进行细菌培养、菌株种类鉴定和药敏试验,分析胆汁病原菌的分布、变化趋势和耐药情况。采用卡方检验进行统计学分析。结果:2017至2021年,753例胆总管结石合并胆道感染患者的胆汁培养总阳性率为90.17%(679/753)。2017至2021年胆汁培养阳性率分别为82.05%(64/78)、88.81%(119/134)、88.03%(125/142)、93.87%(199/212)、91.98%(172/187),各年份间的胆汁培养阳性率比较,差异有统计学意义( χ2=10.78, P=0.029);2017年胆汁培养阳性率低于2020和2021年,差异均有统计学意义( χ2=9.43、5.57, P=0.002、0.018);其余年份间胆汁培养阳性率比较,差异均无统计学意义(均 P>0.05)。胆汁培养结果呈阳性的679份胆汁标本中,共检出病原菌1 033株;革兰氏阴性杆菌总占比为57.02%(589/1 033),2017至2021年的占比分别为66.38%(77/116)、66.47%(111/167)、59.43%(104/175)、54.75%(173/316)、47.88%(124/259);革兰氏阳性球菌总占比为41.05%(424/1 033),2017至2021年的占比分别为31.90%(37/116)、31.74%(53/167)、38.86%(68/175)、44.30%(140/316)、48.65%(126/259);真菌总占比为1.94%(20/1 033),2017至2021年的占比分别为1.72%(2/116)、1.80%(3/167)、1.71%(3/175)、0.95%(3/316)、3.47%(9/259)。2017至2021年,胆汁培养阳性的病尿菌中革兰氏阴性杆菌的占比逐渐降低,而革兰氏阳性球菌的占比逐渐升高,差异均有统计学意义( χ2=20.14、17.91, P<0.001、=0.001);2017至2021年真菌的占比比较,差异无统计学意义( P>0.05)。胆汁培养致病菌中主要的革兰氏阴性杆菌为大肠埃希菌(31.36%,324/1 033)、肺炎克雷伯菌(12.68%,131/1 033);主要的革兰氏阳性球菌为屎肠球菌(14.04%,145/1 033)、唾液链球菌(4.36%,45/1 033)。2017至2021年大肠埃希菌的占比逐渐降低,分别为39.66%(46/116)、38.92%(65/167)、33.14%(58/175)、28.48%(90/316)、25.10%(65/259),差异有统计学意义( χ2=14.34, P=0.006)。2017至2021年大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)检出率分别为30.43%(14/46)、26.15%(17/65)、29.31%(17/58)、38.89%(35/90)、40.00%(26/65),4/15、20.00%(5/25)、20.00%(5/25)、24.32%(9/37)、31.03%(9/29),各年份间的ESBL检出率比较,差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:2017至2021年胆总管结石合并胆道感染患者的胆汁培养阳性率整体呈上升趋势,革兰氏阴性杆菌仍占主导地位,但是革兰氏阳性球菌占比呈明显上升趋势,胆汁培养细菌谱发生了明显变化,临床医师应根据细菌谱变异和耐药情况调整抗生素用药方案。
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编辑人员丨6天前
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浙江省猪链球菌2型人源分离株分子分型特征
编辑人员丨6天前
目的:了解浙江省猪链球菌2型( Streptococcus suis type 2,SS2)的分子分型特征。 方法:对浙江省2005年1月至2021年7月29株散发SS2人源分离株进行基因分型检测,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST),以及最小核心基因组(minimum core genome,MCG)群方法,分别进行分型检测。结果:29株菌株经PFGE得到10种PFGE图谱带型,3个主要分支簇群,其中21株(72.41%)被分成2个主要分支群,8株(27.59%)呈遗传多样性,相似性为49.7%~94.7%。29株菌株经MLST得到3种序列型,其中ST7型25株(86.21%),ST1型3株(10.34%),ST25型1株(3.45%)。29株菌株得到3个MCG基因型,其中E型12株(41.38%),Group1型16株(55.17%),Group4型1株(3.45%)。结论:浙江省SS2主要流行两大克隆群高致病株,少数菌株传播过程中可能存在遗传变异,进化分析呈遗传多样性。
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编辑人员丨6天前
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变异链球菌反义vicK RNA对口腔链球菌多菌种生物膜致龋性的抑制作用
编辑人员丨6天前
目的:研究变异链球菌(Sm)反义vicK RNA(ASvicK)对3种常见口腔链球菌[Sm、血链球菌(Ss)和戈登链球菌(Sg)]构建的多菌种生物膜致龋性的调控作用。方法:通过重组质粒构建ASvicK过表达株,以Sm标准菌株UA159和ASvicK过表达株分别与Ss及Sg构建的多菌种生物膜(分别为UA159+Ss+Sg组、ASvicK+Ss+Sg组)为研究对象,扫描电镜观察生物膜结构;结晶紫染色法检测细菌生物膜总量的差异;通过乳酸试剂盒及蒽酮法评估生物膜产酸产糖能力;利用TaqMan荧光定量PCR及实时荧光定量PCR检测生物膜中3种菌的比例及Sm致龋相关基因的改变;进一步构建人牙釉质片生物膜脱矿模型,用显微硬度仪检测牙釉质表面硬度变化。结果:ASvicK过表达后,Sm+Ss+Sg多菌种生物膜结构疏松。相较于UA159+Ss+Sg组,ASvicK+Ss+Sg组生物膜总量、乳酸产量分别显著降低78.93%及62.23%(均 P<0.001),而生物膜水不溶性和不溶性胞外多糖产量分别显著降低39.13%及68.00%(均 P<0.001)。与UA159+Ss+Sg组相比,ASvicK+Ss+Sg多菌种生物膜中致龋菌Sm比例显著降低33.00%( P<0.01),Sm致龋相关基因vicK/X、gtfB、gtfC、gtfD和ftf表达显著下调( P<0.05),牙釉质片脱矿后显微硬度值显著上升至183.84%( P<0.001)。 结论:ASvicK过表达可降低口腔链球菌生物膜中致龋菌Sm的比例,并减弱口腔链球菌生物膜致龋毒力及致龋性,可能减缓龋病的进展。
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编辑人员丨6天前
