目的 探讨姜黄素调控胰腺癌细胞增强吉西他滨敏感性的机制.方法 为验证姜黄素对胰腺癌PANC1细胞中p53及核因子-κB(NF-κB)p65核易位的影响,将细胞以0、10、20、30μmol/L姜黄素处理,得到空白组、10μmol/L姜黄素组、20μmol/L姜黄素组和30μmol/L姜黄素组;采用免疫荧光染色技术在荧光显微镜下确定NF-κB p65细胞内分布情况;Western blot技术确定细胞内p53蛋白的表达水平;逆转录-实时荧光定量PCR技术确定细胞内p53 mRNA的表达水平;联合采用miRstar和JASPAR软件预测寻找可能受NF-κB p65核转位调控的微RNA(miRNA);采用双荧光素酶报告实验分别验证miRNA与p53的关系.为验证姜黄素是否通过NF-κB p65/miR-26b-5p/p53轴影响吉西他滨对PANC1细胞的敏感性,以10μmol/L的吉西他滨处理细胞得到吉西他滨组,以20μmol/L姜黄素及10μmol/L吉西他滨处理细胞得到姜黄素联合吉西他滨组;经姜黄素(20μmol/L)和吉西他滨(10μmol/L)联合处理细胞后,分别将寡核苷酸对照(mimic NC)和miR-26b-5p模拟物(mimic)转染至细胞,得到mimic NC和mimic miR-26b-5p组;将pcDNA3.1空载质粒和pcDNA 3.1-p53过表达质粒分别转染至细胞,得到pcDNA3.1组和p53组;采用MTT实验检测细胞活力;采用膜联蛋白-V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术测定细胞凋亡水平.结果 与空白组比较,各姜黄素处理组(10、20、30μmol/L姜黄素组)细胞内p53 mRNA及蛋白表达水平均升高;与空白组比较,20μmol/L姜黄素组细胞核内NF-κB p65表达水平降低;miRstar和JASPAR预测软件找到8个miRNA可能受NF-κB p65核易位调控,其中有3个具有靶向p53基因的潜力,尤其以miR-26b-5p效果最明显.双荧光素酶报告实验验证发现miR-26b-5p与p53确有相互作用.与mimic NC组比较,mimic miR-26b-5p组p53 mRNA和蛋白表达水平均下降;与吉西他滨组比较,姜黄素联合吉西他滨组细胞活力降低、细胞凋亡率增加;与mimic NC组比较,mimic miR-26b-5p组细胞活力升高、细胞凋亡率下降,且与pcDNA 3.1组比较,pcDNA3.1-p53组细胞活力下降、细胞凋亡率升高.结论 姜黄素通过抑制NF-κB p65蛋白核转位降低miR-26b-5p基因的表达,进而增加p53基因和蛋白的表达,通过NF-κB p65/miR-26b-5p/p53轴增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性.

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-762对胰腺癌PANC-1细胞株吉西他滨(GEM)耐药性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-762在GEM耐药的胰腺癌细胞株PANC-1/GEM和购自中国科学院上海生科院细胞资源中心的非耐药株PANC-1中的表达。通过Lipofectamine? 2000将miR-762 mimics、miR-762 inhibitors及其scramble序列分别转染PANC-1/GEM细胞。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖及GEM敏感性；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达。应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料采用均值±标准差( Mean± SD)表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验。 结果:miR-762 mRNA在GEM耐药的胰腺癌细胞株PANC-1/GEM中的表达量(2.88±0.37)显著高于非耐药株(1.22±0.32)，差异有统计学意义( t＝7.340， P<0.01)。转染miR-762 mimics后PANC-1/GEM细胞miR-762 mRNA相对表达量(4.96±0.67)与阴性对照组(2.87±0.45)比较显著增高( t＝－4.920， P<0.01)，差异有统计学意义，而转染miR-762 inhibitors后PANC-1/GEM细胞miR-762 mRNA表达量(0.72±0.18)与阴性对照组(2.87±0.45)比较显著降低( t＝8.430， P<0.01)，差异有统计学意义。同时miR-762 mimics组吸光度( A) 450值、半数抑制浓度(IC 50)值及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达量显著增高，细胞凋亡率及bcl-2相关X蛋白(bax)表达量显著降低；而miR-762 inhibitors组 A450值、IC 50值及bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量显著降低，细胞凋亡率及bax蛋白表达量显著增高( P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:miR-762在胰腺癌耐药细胞株中高表达，能够诱导胰腺癌细胞增殖并抑制其凋亡，从而导致胰腺癌细胞对GEM耐药，其机制可能与上调bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β表达、下调bax表达有关。

目的:探讨精脒/精胺N1-乙酰转移酶2(SSAT2)对胰腺癌细胞吉西他滨化疗耐药的影响及其分子机制。方法:利用梯度浓度法构建耐药细胞株MiaPaCa-2 GR和PANC-1 GR，蛋白印迹法检测耐药前后细胞中SSAT2及铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达变化；慢病毒载体构建稳定过表达SSAT2的耐药细胞株；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞对吉西他滨敏感性的变化；丙二醛(MDA)检测细胞内脂质过氧化水平变化。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:两种耐药细胞株中SSAT2表达高于野生型细胞株[(0.692±0.026)倍比(0.953±0.132)倍， t＝3.360， P<0.05；(0.581±0.036)倍比(0.751±0.080)倍， t＝3.356， P<0.05]，而铁死亡负调控标志物GPX4在两种耐药细胞株中均显著升高[(2.295±0.753)、(52.794±1.680)倍， t＝4.013、10.701， P<0.05]。上调SSAT2后耐药细胞胰腺癌株对吉西他滨的敏感性高于对照组[(0.047±0.017) μmol/L比(1.507±0.283) μmol/L， t＝8.920， P<0.01；(0.216±0.063) μmol/L比(2.238±0.582) μmol/L， t＝5.983， P<0.01]，且铁死亡抑制剂ferr-1处理过表达SSAT2组细胞对吉西他滨的耐药性提高[(1.019±0.193)、(1.633±0.482) μmol/L， t＝8.689、5.049， P<0.05]，同时MDA水平低于过表达SSAT2组[(2.298±0.099)、(1.986±0.269)倍， t＝3.908、6.430， P<0.05]。过表达SSAT2组GPX4蛋白表达水平显著低于对照组[(0.453±0.040)倍比(1.086±0.094)倍， t＝10.732， P<0.01；(0.236±0.045)倍比(1.337±0.479)倍， t＝3.964， P<0.05]。 结论:SSAT2通过抑制GPX4蛋白水平促进铁死亡，增强胰腺癌细胞化疗敏感性。

目的:利用基底膜相关基因(BMRG)构建一个新的预后风险模型，以探索乳腺癌与基底膜之间的关系。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达综合数据库(GEO)中收集转录组和临床数据，将TCGA数据库作为训练集，GEO数据库作为验证集，应用单因素Cox回归、最小绝对收缩和选择算子(LASSO)和多因素Cox回归分析建立BMRG预后模型。通过Kaplan-Meier方法和受试者操作特征(ROC)曲线进一步验证和评估风险模型。然后结合风险模型和临床特征构建列线图来预测乳腺癌的总生存率。通过基因集富集分析(GSEA)研究其可能参与的生物学途径。同时使用Wilcoxon秩和检验评估高风险组和低风险组患者对药物的敏感性差异。结果:共鉴定了193个差异表达基因，并构建了基于8个BMRG的风险模型，包括 COL6A2、 CTSA、 EVA1B、 ITGAX、 MMP-1、 ROBO3、 SDC1和 UNC5A。Kaplan-Meier生存曲线和ROC曲线分析表明，该模型可以很好地预测乳腺癌的预后，曲线下面积为0.779，表明准确度也很高。此外，列线图也显示出了良好的预测一致性和临床净收益。单因素和多因素Cox回归分析验证了BMRG模型是乳腺癌的独立危险因素。GSEA显示高风险组主要富集在细胞外基质受体相互作用通路。此外，高风险患者对紫杉类化疗药物和靶向治疗药物的敏感性更高，而低风险患者对吉西他滨和雷帕霉素的敏感性更高。 结论:基于8种BMRG构建的风险模型可作为乳腺癌的有效预后指标，可以提高临床医师对患者治疗反应的预测。

目的:探讨不同药物行膀胱内灌注治疗对非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)的疗效。方法:通过计算机系统检索PubMed、SpringerLink、The Cochrane Library、OVID、CNKI、万方、维普数据库中关于不同药物治疗NMIBC的随机对照试验(RCTs)，检索时限为2000年1月1日至2022年3月1日，文献语言仅限定为中英文。对不同干预措施治疗NMIBC后的肿瘤复发率、膀胱刺激症状、血尿进行网状Meta分析，通过敏感性分析评价研究结果的稳定性。结果:共纳入26篇RCTs，包含4 403例患者，涉及6种干预措施：卡介苗(BCG)、表柔比星(EPI)、吉西他滨(GEM)、吡柔比星(THP)、丝裂霉素C(MMC)、羟基喜树碱(HCPT)。网状Meta分析结果显示，使用BCG者治疗后的1年复发率显著低于使用EPI和MMC者，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。1年复发率的累计排序概率图下面积(SUCRA)依次为BCG、THP、GEM、EPI、MMC、HCPT。使用BCG者治疗后的2年复发率均低于使用GEM、EPI、THP、HCPT及MMC者，而使用GEM者低于使用HCPT，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。2年复发率的SUCRA依次为BCG、GEM、EPI、THP、MMC、HCPT。使用GEM者治疗后的膀胱刺激征发生率均低于使用EPI和MMC者，而使用BCG者治疗后的膀胱刺激征发生率均高于使用GEM、EPI、THP、HCPT，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。膀胱刺激征发生率的SUCRA依次为GEM、HCPT、THP、EPI、MMC、BCG。对于6种不同药物治疗NMIBC所引起的血尿发生率比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:BCG治疗能降低术后NMIBC患者的1、2年复发率，但并不能降低膀胱刺激征和血尿的发生。GEM治疗在降低1、2年复发率的疗效仅次于BCG，但能有效预防膀胱刺激征及血尿的发生。

目的:构建小鼠胰腺癌原发灶和肝转移灶成对类器官培养体系，探讨其形态学及生物学行为。方法:取6~8周龄C57BL/6小鼠，将携带荧光素酶的胰腺癌细胞PANC02注射入胰腺体尾部，待小动物活体成像仪监测到肝转移灶形成后处死小鼠，取出成对的胰腺癌原发灶和肝转移灶于体外类器官培养体系中培养。倒置相差显微镜下观察类器官的形成过程，苏木精-伊红染色观察类器官的形态结构；免疫组织化学和免疫荧光染色法检测类器官上皮细胞标志物CK19和增殖标志物Ki67蛋白的表达；蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学检测类器官侵袭性标志物N-cadherin、E-cadherin、vimentin、snail、MMP9的表达；CellTiter-Glo ?3D Cell Viability Assay检测类器官对吉西他滨的药物敏感性，计算类器官的50%抑制浓度（IC 50）。 结果:成功构建了小鼠胰腺癌自发肝转移模型，并建立了胰腺癌原发灶和肝转移灶成对类器官培养体系。类器官呈球样生长，体外可连续传代达10代。肝转移灶类器官和胰腺癌原发灶类器官均呈管腔样结构，均表达上皮细胞标志物CK19和增殖标志物Ki67，且肝转移灶Ki67的阳性比例显著高于胰腺癌原发灶。肝转移性类器官侵袭性标志物N-cadherin、vimentin、snail、MMP9的表达水平显著高于胰腺癌原发灶类器官，而E-cadherin表达水平则显著低于胰腺癌原发灶类器官。肝转移灶类器官对吉西他滨的IC 50值为165.0 nM，高于胰腺癌原发灶类器官的108.5 nM。 结论:成功建立了可以稳定传代的小鼠胰腺癌原发灶和肝转移性类器官。

目的:通过构建胰腺癌患者源性肿瘤类器官（patient derived organoids，PDOs）生物样本库，探索PDOs药敏检测技术指导胰腺癌化疗药物选择的可行性。方法:收集2020年3月至2022年12月在南京大学医学院附属鼓楼医院接受手术切除和穿刺活检患者的胰腺癌组织标本，体外培养胰腺癌PDOs并进行组织学鉴定；采用吉西他滨（Gemcitabine）、白蛋白结合型紫杉醇（nab-Paclitaxel）、氟尿嘧啶（5-Fluorouracil）、奥沙利铂（Oxaliplatin）、伊利替康（Irinotecan）处理PDOs并进行细胞活力测定，分析PDOs药物敏感性与患者实际临床治疗反应的相关性。结果:PDOs可再现原肿瘤组织的病理学特征；不同PDOs对同一化疗药物的敏感性具有显著差异；PDOs药物敏感性与患者实际治疗效果的一致性为75.76%（25/33）；基于类器官的药敏检测对患者治疗反应具有预测价值（AUC＝0.733，95% CI：0.546~0.919， P<0.05）。 结论:本研究成功构建胰腺癌PDOs生物样本库，其药敏检测结果与患者实际用药反应具有显著相关性，基于PDOs的药敏检测技术具有指导胰腺癌个体化治疗的潜力。

目的:探讨微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)靶向E26转录因子-1(E26 transformation specific-1，ETS1)在胰腺导管腺癌(PDAC)吉西他滨耐药中的作用。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胰腺癌细胞ASPC-1和胰腺癌耐药细胞ASPC-1/GEM中miR-33b-5p和ETS1的表达水平，双荧光素酶报告实验验证miR-33b-5p与ETS1之间的靶向关系；免疫组织化学染色检测PDAC患者敏感组与抵抗组ETS1的表达；转染ASPC-1/GEM细胞，分为NC mimic组、miR-33b-5p mimic组、ETS1小干扰RNA(siRNA) NC组及ETS1 siRNA组，RT-qPCR检测转染后miR-33b-5p、ETS1 mRNA的表达水平，Western blot检测ETS1的表达水平，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性并计算吉西他滨半数抑制浓度(IC 50)，流式细胞术检测细胞凋亡水平。 结果:与ASPC-1细胞比较，ASPC-1/GEM细胞株中miR-33b-5p表达下降( t＝－11.011， P<0.05)、ETS1表达升高( P<0.05)；双荧光素酶报告实验表明miR-33b-5p可明显降低野生型ETS1-33b-5p-WT载体荧光素酶活性( t＝－4.453， P<0.05)；免疫组织化学结果显示ETS1在抵抗组中表达量明显高于敏感组(8.11±2.80比2.78±0.83， P<0.05)；miR-33b-5p mimic组IC 50明显低于NC mimic组[(25.10±1.77)μmol/L比(43.63±3.04) μmol/L， t＝－9.110， P<0.05]，miR-33b-5p表达量明显高于NC mimic组( t＝19.444， P<0.05)，ETS1的表达量明显低于NC mimic组( P<0.05)，凋亡率明显高于NC mimic组[(18.8±1.9)%比(5.3±0.4)%， t＝12.239， P<0.05]；ETS1 siRNA组吉西他滨IC 50明显低于ETS1 siRNA NC组[(20.39±0.89) μmol/L比(37.38±2.62) μmol/L， t＝－10.628， P<0.05]。 结论:miR-33b-5p可能通过抑制ETS1表达促进PDAC对吉西他滨化疗的敏感性。

转移性前列腺癌的标准治疗方案是雄激素剥夺治疗(ADT)，但多数接受治疗患者尤其是转移性激素敏感性前列腺癌(mHSPC)几乎都将发展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，中位总生存时间短。本文回顾性分析1例较年轻mHSPC患者多学科诊疗过程，患者行根治性前列腺切除术(RP)后，辅助多学科综合治疗方案：辅助内分泌治疗＋前列腺术区放疗＋转移灶放疗。患者进展为CRPC后更换方案为阿比特龙＋泼尼松＋戈舍瑞林以及吉西他滨＋顺铂(GP)方案＋内分泌治疗。最后基于基因检测结果，更改方案为阿比特龙＋奥拉帕尼联合内分泌治疗以及PD-1抑制剂信迪利单抗治疗。术后随访35个月后，患者仍存活且临床症状控制理想，生活质量好。

目的:应用综合机器学习(ML)模型开发新的精确生物标志物，以预测胰腺癌(PC)患者预后及药物敏感性。方法:从公共多中心队列中获取768例患者的数据，并从CTRP-V2.0数据库中检索PC细胞的吉西他滨耐药数据。采用由9种ML算法组成的95个ML模型创建吉西他滨耐药相关基因特征(GRGS)。根据GRGS，PC患者被分为高危(共385例)和低危(共383例)两组。通过R 4.1.3软件的不同软件包，在纳入队列中评估GRGS预测PC患者总生存率(OS)的风险比( HR)；并将CRGS与已发表基因标签进行比较。运用AutodockVina 1.2.2软件筛选药物与GRGS核心基因进行分子对接，记录药物与核心基因的结合能评分。单因素多因素分析均采用cox回归模型，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，HR评估两组个体之间生存时间的差异， t检验比较连续性变量，c指数值(c-index)用来比较模型和基因标签效能。 结果:在95个模型中，最小绝对收缩和选择操作＋随机生存森林模型(LASSO＋RSF)开发的GRGS显示出最高的c-index，在5个队列中的平均值为0.674。在癌症基因组图谱(TCGA)中，CRGS分数较高的PDAC患者，其OS越差[ HR＝7.40，95%可信区间( CI)：4.42～12.41， P<0.01]，相较于Grade分级、TNM分期、性别和年龄，CRGS是PADC患者较差OS的独立风险因素[ HR＝1.07，95% CI：1.05～1.08， P<0.01]。与已发表的43个基因标签比较，GRGS在评估多个队列的预后方面表现更佳(c-index＝0.94)。SMC4是组成GMGS的九个基因之一，达沙替尼结合SMC4蛋白分子的效能为－0.246。 结论:GRGS可作为评估PC患者临床预后和全身治疗的有前途的生物标志物。