目的:探讨低分子肝素(LMWH)对氧糖剥夺(OGD)诱导的PC12细胞炎症反应的影响及相关机制。方法:体外培养神经细胞株PC12，随机分为Sham(对照)组、OGD组、LMWH组及阻断剂组，其中阻断剂组又分为：Eritoran+OGD组、LMWH+Eritoran+OGD组、ST2825+OGD组、LMWH+ST2825+OGD组、吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)+OGD组及LMWH+PDTC+OGD组；建立OGD细胞模型，应用CCK-8法检测细胞活力，应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、MyD88和核因子κB(NF-κB)的mRNA和蛋白表达情况，ELISA法检测IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和S100β的浓度变化。结果:OGD组第1、2、3天的细胞活性较Sham组明显降低( P<0.05)，LMWH处理后，可显著提高PC12细胞OGD后第2、3天的细胞活性( P<0.05)，但较Sham组低。与Sham组相比，OGD组中TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA表达量明显升高( F＝144.9，710.5，79.51， P<0.01)，当用LMWH处理后三种物质mRNA表达量下降，与OGD组比较差异均有统计学意义( P<0.01)，且TLR4/MyD88/NF-κB通路的特异性阻断剂Eritoran、ST2825、PDTC均可强化LMWH的抗炎作用。TLR4、MyD88及NF-κB的蛋白表达量同基因相一致。OGD组IL-1β、IL-6、TNF-α和S100β的表达显著高于Sham组( P<0.05)；LMWH组其表达被抑制，与OGD组比较差异均有统计学意义( P<0.05)，应用Eritoran、ST2825和PDTC分别阻断TLR4、MyD88和NF-κB，炎症因子和S100β的浓度明显降低，但仍高于Sham组( P<0.05)。 结论:OGD会导致PC12细胞病理性损伤，S100β含量增多，炎症反应加重；应用LMWH可以改善细胞活性，下调炎症反应程度，对细胞有保护作用，同时使用TLR4/MyD88/NF-κB通路各个环节的抑制剂后，OGD上调炎症因子的作用皆被不同程度地抑制，提示LMWH可能通过TLR4/MyD88/NF-κB通路调节OGD诱导的PC12细胞的炎症反应。

目的:观察小青龙汤和清气化痰丸对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的人肺癌细胞H292黏液高分泌模型及核转录因子-κB/微小RNA-494（NF-κB/miR-494）信号通路相关分子的影响，探讨两者改善病理性气道黏液的作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度小青龙汤、清气化痰丸对IL-1β诱导的H292细胞活性的影响并选择合适浓度进行后续实验。将细胞随机分为空白组、模型组（5 μg/L IL-1β）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（PDTC）组（5 μg/L IL-1β+100 μmol/L PDTC）、小青龙汤组（5 μg/L IL-1β+1 000 mg/L小青龙汤）和清气化痰丸组（5 μg/L IL-1β+1 000 mg/L清气化痰丸）；采用5 μg/L IL-1β诱导H292细胞24 h建立气道上皮黏液高分泌细胞模型。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞分泌黏蛋白5AC（MUC5AC）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-8水平及细胞内MUC5AC和囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）蛋白含量；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测MUC5AC mRNA、CFTR mRNA和miR-494的表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路关键蛋白p65和NF-κB抑制因子（IκB）的蛋白表达。结果:选择浓度为1 000 mg/L的小青龙汤和清气化痰丸进行后续实验。与空白组比较，模型组细胞分泌MUC5AC、TNF-α和IL-8水平显著升高，细胞内MUC5AC蛋白含量和mRNA表达也显著升高，细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达均显著降低，且细胞内p65蛋白表达显著上调，IκB蛋白表达显著下调，miR-494表达显著升高。与模型组相比，PDTC组、小青龙汤组和清气化痰丸组细胞分泌MUC5AC、TNF-α、IL-8水平显著降低，细胞内MUC5AC蛋白含量和mRNA表达也显著降低，且细胞内p65蛋白表达均显著下调，IκB蛋白表达均显著上调，miR-494表达均显著降低；PDTC组和清气化痰丸组细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达均显著升高。与PDTC组相比，小青龙汤组细胞分泌TNF-α水平显著升高（ng/L：22.77±3.14比11.09±3.37， P<0.05），细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达、IκB蛋白表达均显著降低〔CFTR蛋白（ng/L）：97.38±6.62比227.04±19.48，CFTR mRNA（2 -ΔΔCt）：0.99±0.08比1.21±0.08，IκB/β-actin：1.69±0.11比2.00±0.18，均 P<0.05〕；清气化痰丸组细胞分泌TNF-α水平显著升高（ng/L：19.08±3.71比11.09±3.37， P<0.05）。与小青龙汤组相比，清气化痰丸组细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达、IκB蛋白表达均显著升高〔CFTR蛋白（ng/L）：235.01±22.71比97.38±6.62，CFTR mRNA（2 -ΔΔCt）：1.32±0.15比0.99±0.08，IκB/β-actin：1.94±0.16比1.69±0.11，均 P<0.05〕。 结论:小青龙汤改善气道上皮黏液高分泌炎症的机制可能与抑制NF-κB/miR-494炎症信号介导的MUC5AC高分泌有关，而清气化痰丸则可能与抑制NF-κB/miR-494炎症信号介导的MUC5AC高分泌及CFTR功能障碍有关，因此，二者治疗病理性气道黏液的机制差异主要在对CFTR基因和蛋白的调控上。

目的 探讨吡咯烷二硫代基甲酸铵(PDTC)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠半暗带神经炎症损伤的作用及机制.方法 将60只Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为PDTC组、TBI组、假手术组、对照组,每组15只.PDTC组大鼠于术前15 min腹腔注射PDTC(100 mg·kg-1),TBI组、假手术组及对照组大鼠腹腔注射等体积双蒸水.TBI组和PDTC组大鼠开颅窗后,将内径6.0 mm的2.5 g钢棒从内径7.0 mm聚氯乙烯透明管高度自75 cm自由下落,撞击硬脑膜致右顶叶脑挫裂伤,制备TBI模型;假手术组大鼠开颅窗后用骨蜡封闭,不施加打击;对照组大鼠正常饲养.造模后1、4、7 d,应用改良的神经损伤评分(mNSS)评估各组大鼠神经行为学损害程度;造模后2 d,取4组大鼠各5只,断头处死,取脑组织,行苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜下观察脑组织形态学改变;应用免疫组织化学染色检测各组大鼠脑组织中β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.造模后24 h,4组大鼠各取5只,断头取右侧损伤半暗带组织,应用Western blot检测各组大鼠右侧损伤半暗带组织中核转录因子-κB(NF-κB)P65、磷酸化NF-κB P65、NF-κB抑制蛋白(IκB)、磷酸化IκB、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及caspase-1蛋白的表达,实时定量聚合酶链式反应检测各组大鼠右侧损伤半暗带组织中NF-κB P65、IκB、NLRP3及caspase-1 mRNA的表达.结果 造模后1、4、7 d,TBI组大鼠mNSS评分均显著高于PDTC、对照组、假手术组,PDTC组大鼠mNSS评分显著高于对照组和假手术组(P＜0.05);假手术组与对照组大鼠mNSS评分比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组及假手术组大鼠的神经元及神经胶质细胞形态正常,无肿胀,细胞间质无增宽.TBI组大鼠脑组织出现弥漫性出血性改变,神经元胞体形态不一,细胞膜与细胞质分辨不清,细胞核固缩,常为三角形,正常结构及核仁皆消失,弥漫性白细胞、红细胞填充视野.PDTC组大鼠病灶周边呈缺血性改变,神经元体积轻度缩小,呈均匀淡红色,细胞核固缩,细胞核、质分离,正常结构及核仁皆消失,神经炎症局限化.对照组及假手术组大鼠脑组织无明显β-APP和GFAP表达,TBI组和PDTC组大鼠脑组织中均可见β-APP、GFAP在神经元浆膜下和(或)轴突处积累.与TBI组比较,PDTC组大鼠大脑皮质β-APP和GFAP阳性染色体神经元细胞数减少、表达强度减弱.假手术组、TBI组和PDTC组大鼠脑组织中NF-κB P65蛋白相对表达量显著高于对照组,PDTC组大鼠脑组织中NF-κB P65蛋白相对表达量显著高于TBI组(P＜0.05).PDTC组和假手术组大鼠脑组织中磷酸化NF-κB P65蛋白相对表达量显著低于对照组,TBI组大鼠脑组织中磷酸化NF-κB P65蛋白相对表达量显著高于对照组和假手术组,PDTC组大鼠脑组织中磷酸化NF-κB P65蛋白相对表达量显著低于TBI组和假手术组(P＜0.05).假手术组与对照组大鼠脑组织中IκB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);TBI组大鼠脑组织中IκB蛋白相对表达量显著高于对照组,PDTC组大鼠脑组织中IκB蛋白相对表达量显著低对照组、假手术组和TBI组(P＜0.05).TBI组大鼠脑组织中磷酸化IκB蛋白相对表达量显著低于对照组和假手术组,PDTC组大鼠脑组织中磷酸化IκB蛋白相对表达量高于TBI组(P＜0.05).假手术组大鼠脑组织中NLRP3蛋白相对表达量显著高于对照组,TBI组和PDTC组大鼠脑组织中NLRP3蛋白相对表达量显著低于假手术组和对照组,TBI组大鼠脑组织中NLRP3蛋白相对表达量显著低于PDTC组(P＜0.05).假手术组、PDTC组及TBI组大鼠脑组织中caspase-1蛋白相对表达量显著高于对照组,PDTC组大鼠脑组织中caspase-1蛋白相对表达量显著低于TBI组(P＜0.05).PDTC组、TBI组、假手术组大鼠脑组织中NF-κB P65 mRNA相对表达量显著高于对照组,PDTC组和TBI组大鼠脑组织中NF-κB P65 mRNA水平显著高于假手术组,PDTC组大鼠脑组织中NF-κB P65 mRNA相对表达量显著低于TBI组(P＜0.05).PDTC组和TBI组大鼠脑组织中IκB mRNA相对表达量显著低高对照组,假手术组大鼠脑组织中IκB mRNA表达显著低于对照组(P＜0.05);PDTC组和TBI组大鼠脑组织中IκB mRNA相对表达量显著高于假手术组,PDTC组大鼠脑组织中IκB mRNA相对表达量显著低于TBI组(P＜0.05).PDTC组和TBI组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著高于对照组,假手术组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著低于对照组,PDTC组和TBI组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著高于假手术组,PDTC组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著低于TBI组(P＜0.05).假手术组、TBI组、PDTC组大鼠脑组织中caspase-1 mRNA相对表达量显著低于对照组,TBI组、PDTC组大鼠脑组织中caspase-1 mRNA相对表达量显著高于假手术组(P＜0.05).结论 PDTC可有效改善TBI大鼠神经功能缺损评分、减轻神经炎症损伤,其机制可能通过调节NF-κB/NLRP3轴相关炎症损伤指标mRNA和蛋白表达及调控下游炎症因子而发挥作用.

[目的]探讨加味生肌玉红膏对肛瘘术后大鼠模型创面修复的影响及其内在机制.[方法]70只SD大鼠随机分为空白组、凡士林组(模型组)、康复新液组(对照组)、加味生肌玉红膏组(实验组)、吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(ammonium pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)+凡士林组(PDTC+模型 组)、PDTC+康复新液组(PDTC+对照组)、PDTC+加味生肌玉红膏组(PDTC+实验组).建立肛瘘术后大鼠湿热创面模型,并予以不同药物干预,同时PDTC干预组术后需在药物干预基础上连续5 d腹腔注射核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制剂PDTC.记录各组大鼠创面愈合情况,计算各组大鼠创面愈合率,分别于第3、7、14天取各组大鼠创面肉芽组织,以免疫印迹法和免疫组化法检测创面组织中NF-κB p65的蛋白表达;以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测 白介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达;采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法进行组织形态学观察.[结果]与其他各组比较,实验组和PDTC+实验组均可明显缩短创面愈合时间,PDTC+实验组和实验组的创面愈合率更高(P＜0.05).HE染色结果亦证实,PDTC+实验组可有效地促进肉芽组织快速生长.免疫组化及免疫印迹检测结果表明,实验组和PDTC+实验组大鼠创面组织的NF-κB p65的蛋白表达被显著抑制,与其余各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测显示,治疗3 d、7 d、14d各组IL-1β含量呈逐渐递减趋势,其中PDTC+实验组IL-1β的含量最低(P＜0.05);各组VEGF的含量呈逐渐递增趋势,其中PDTC+实验组与实验组VEGF的含量最高(P＜0.05).[结论]加味生肌玉红膏可通过NF-κB信号通路,抑制NF-κB p65和IL-1β蛋白表达,上调VEGF蛋白表达,从而促进血管内皮细胞新生,减轻炎症反应,促进湿热型肛瘘术后创面的愈合.

目的 探讨缺氧环境下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和细胞因子C-X-C基序趋化因子6(CXCL6)在髓核细胞中的特异性调控机制.方法 在缺氧条件下(2％O2)分别培养髓核细胞0、3、6、12、24 h,分别采用Western blot法、荧光定量PCR(qPCR)法及ELISA法检测缺氧条件下髓核细胞HIF-1α和CXCL6蛋白表达、mRNA表达及细胞上清液中CXCL6水平.将髓核细胞分为A组(正常氧培养组)、B组(2％O2培养组)和C组(2％O2+HIF-1α抑制剂KC7F2 50 μmol/L培养),24 h后采用Western blot法、qPCR法及ELISA法检测缺氧条件下髓核细胞HIF-1α和CXCL6蛋白表达、mRNA表达及细胞上清液中CXCL6水平.将髓核细胞随机分为D组(正常氧培养)、E组(2％O2 培养)、F 组(2％O2 培养+siNC)、H 组(2％O2 培养+siCXCL6#1)和 L 组(2％O2 培养+siCXCL6#2),且E、F、H、L组同时接受NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵25 μmol/L处理,24 h后采用Western blot法检测缺氧条件下沉默CXCL6表达对C-X-C基序趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,采用流式细胞术检测五组细胞凋亡情况.结果 缺氧条件下,髓核细胞HIF-1α和CXCL6蛋白表达、mRNA表达及细胞上清液中CXCL6水平呈时间依赖性升高(P＜0.05).与A组比较,B组髓核细胞HIF-1α和CXCL6蛋白表达、mRNA表达及细胞上清液中CXCL6水平均升高(P＜0.05);与B组比较,C组上述指标表达均降低(P＜0.05).流式细胞术检测显示,与E、F组相比,H、L组细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 缺氧诱导CXCL6通过NF-κB信号通路促进髓核细胞凋亡.

目的 观察益气活血化痰方通过调控白细胞介素8(IL-8)/黏蛋白5ac(MUC5ac)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重塑及平滑肌厚度的影响.方法 选取53 只SPF级SD雄性大鼠,随机抽取10 只作为健康组,剩余43 只大鼠建立COPD模型,40 只采用数字随机表法分为模型组、中药组、抑制剂组、联合组,每组 10 只.中药组大鼠给予益气活血化痰方32 g/kg灌胃,抑制剂组大鼠予腹腔注射吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)100 mg/kg,联合组予益气活血化痰方灌胃后腹腔注射PDTC 100 mg/kg.健康组、模型组正常饲养,不予干预.采用动物肺功能检测仪测定各组大鼠肺功能[用力肺活量(FVC)、呼气峰值流速(PEF)、第1s用力呼气容积(FEV1)],酶联免疫吸附法检测肺泡灌洗液中IL-8、IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法检测肺组织IKB激酶2(IKK2)、磷酸化IKB激酶α(p-IKBα)、核转录因子κB(NF-κB)、MUC5ac蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态.结果 与健康组比较,模型组、中药组、抑制剂组、联合组FVC、PEF、FEV1 水平均降低(P<0.05);与模型组比较,中药组、抑制剂组、联合组FVC、PEF、FEV1 水平均升高(P<0.05);联合组FVC、PEF、FEV1 水平均高于中药组、抑制剂组(P<0.05).与健康组比较,模型组、中药组、抑制剂组、联合组肺泡灌洗液IL-8、IL-17、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组、抑制剂组、联合组肺泡灌洗液IL-8、IL-17、TNF-α水平均降低(P<0.05);联合组肺泡灌洗液IL-8、IL-17、TNF-α水平均低于中药组、抑制剂组(P<0.05).与健康组比较,模型组、中药组、抑制剂组、联合组支气管平滑肌厚度均增加(P<0.05);与模型组比较,中药组、抑制剂组、联合组支气管平滑肌厚度均降低(P<0.05);联合组支气管平滑肌厚度低于中药组、抑制剂组(P<0.05).与健康组比较,模型组、中药组、抑制剂组、联合组肺组织IKK2、p-IKBα、NF-κB、MUC5ac表达均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组、抑制剂组、联合组肺组织IKK2、p-IKBα、NF-κB、MUC5ac表达均降低(P<0.05);联合组肺组织IKK2、p-IKBα、NF-κB、MUC5ac表达均低于中药组、抑制剂组(P<0.05).结论 益气活血化痰方通过抑制IL-8/MUC5ac通路活化,抑制炎性反应,并降低气管平滑肌厚度,抑制气道重塑,改善肺功能.

目的 建立离子液体分散液液微萃取-石墨炉原子吸收光谱法测定尿中镉的方法.方法 以离子液体1-己基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐([Hmim] [PF6])为萃取剂,以吡咯烷二硫代甲酸铵(APDC)为螯合剂,以乙醇为分散剂,对尿中镉进行微萃取,通过L9(33)正交试验对[Hmim][PF6]、APDC、乙醇用量进行优化,采用单因素轮换模式探究可影响萃取效率的因素如萃取时间、萃取温度、酸碱度,并对洗脱条件进行优化.结果 镉在0.0 ～ 20.0 μg/L范围内线性相关系数大于0.999,方法检出限为0.13 μg/L,加标回收率为95.2％～107.5％,相对标准偏差为1.66％～ 3.98％.结论 该法操作简便,灵敏度高,适用于职业接触人群及正常人群尿样中镉的测定.

目的 建立离子液体微萃取-石墨炉原子吸收光谱法测定尿中痕量铅的方法.方法 用吡咯烷二硫代甲酸铵(APDC)为螯合剂、无水乙醇为分散剂、离子液体1-己基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐([Hmim][PF6])为萃取剂萃取尿中铅,在pH 9和30℃恒温水浴条件下萃取富集,离心后弃上清,以10％硝酸反萃取.离心后,取上清液加入维生素C溶液基体改进剂,混匀后测定.结果 在0.45～ 75.0μg,/L范围内,相关系数大于0.999,方法检出限(s/n =3)为0.45 μg/L,加标回收率为94.20％～106.0％,相对标准偏差为1.35％～ 3.24％(n=6).结论 本法操作简便,灵敏度高,适用于正常人群与职业接触人群尿样中铅的测定.

目的 探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ是否能通过核因子(NF)-κB途径调节巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的表达.方法 佛波酯诱导THP-1细胞48 h并使其转化为巨噬细胞,用CD68进行免疫细胞化学鉴定.第一组:对照组、AngⅡ1×10-8 mol/L组、AngⅡ1×10-7 mol/L组、AngⅡ1×10-6 mol/L组、AngⅡ1×10-5 mol/L组.第二组:对照组、AngⅡ(1×10-6 mol/L)组、AngⅡ(1×10-6 mol/L)+吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)组、PDTC组.Western印迹方法检测第一组细胞核内NF-κB的表达.Re-al time RT-PCR方法检测第二组巨噬细胞MIF mRNA的表达.结果 Western印迹随着AngⅡ浓度的升高,NF-κBp65的表达逐渐增强.Real time RT-PCR:AngⅡ组MIF mRNA表达明显高于对照组;给予NF-κB特异性抑制剂PDTC后,由AngⅡ诱导的MIF mRNA表达明显降低.结论 AngⅡ能通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞MIF mRNA的表达.

目的 探讨黑骨藤追风活络胶囊对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠核因子κB(NF-κB)相关蛋白的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、黑骨藤追风活络胶囊0.315 g/kg组、0.315 g/kg黑骨藤追风活络胶囊联合0.01 g/kg NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)处理组.除对照组外,其余各组建立CIA模型.给药5周后,厚度测量仪测量大鼠足跖厚度,计算脾脏指数(脾脏质量/体质量),免疫组织化学染色法检测脾脏转化生长因子活化激酶1(TAK1)、转化生长因子β活化激酶结合蛋白1(TAB1)的表达,Western blot法检测关节滑膜组织NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、核因子κBp65亚基(NF-κBp65)、磷酸化核因子κBp65亚基(p-NF-κBp65)、NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)蛋白水平,ELISA检测血浆单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、CXC趋化因子配体1(CXCL1)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)水平.结果 与对照组相比,模型组大鼠足跖肿胀度、脾脏指数明显增加;与模型组相比,黑骨藤追风活络胶囊组和联合给药组大鼠足跖肿胀度和脾脏指数明显降低;TAK1和TAB1蛋白表达下调,滑膜组织IκBα蛋白水平增加,NF-κBp65、p-NF-κBp65、RANKL蛋白水平降低;血浆MCP-1、CXCL1、MIP-1水平下降.结论 黑骨藤追风活络胶囊抑制NF-κB通路相关蛋白活性减轻CIA大鼠炎症反应.