目的:醛酮还原酶家族1成员B10（AKR1B10）与肝癌的发病机制、早期诊断和预后密切相关，故探讨AKR1B10在肝癌细胞中对细胞周期的影响及其作用机制。方法:采用慢病毒LV-AKR1B10-shRNA感染HepG2细胞，或AKR1B10抑制剂依帕司他处理HepG2细胞，蛋白质印迹法（Western blot）及实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测AKR1B10的表达水平；通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸在340 nm处吸光度值的下降检测AKR1B10的活性；CCK-8法及流式细胞术检测AKR1B10低表达及不同浓度依帕司他处理HepG2细胞后对细胞增殖和细胞周期的影响；Western blot检测HepG2细胞中p-Rb，细胞周期蛋白D1、E1，p27的蛋白表达水平；两样本均数采用独立样本 t检验。 结果:AKR1B10在肝癌细胞中表达显著升高，与正常肝细胞相比，HepG2细胞中AKR1B10蛋白相对表达水平为6.71±1.11（ P = 0.012）。依帕司他对AKR1B10的酶活性有明显抑制作用，呈剂量依赖性特点。HepG2细胞中AKR1B10基因被有效沉默，不同浓度AKR1B10抑制剂依帕司他处理HepG2细胞24、48、72 h后均可抑制细胞增殖，促进G 0/G 1细胞周期阻滞，使p-Rb、周期蛋白D1、E1表达降低，周期素依赖性激酶抑制蛋白p27表达升高。 结论:抑制AKR1B10表达和活性可通过p27/p-Rb通路，促进HepG2细胞G 0/G 1细胞周期阻滞。

目的:探讨结直肠癌CDKN1B表达与临床病理特征的关系及预后意义。方法:利用人类蛋白谱（HPA）数据库和基因表达谱交互分析（GEPIA）数据库分析CDKN1B在人结直肠癌组织中的表达情况及其与结直肠癌患者预后的相关性。回顾性分析扬州大学医学院宜兴临床学院自2020年1月至2021年12月经手术治疗的98例结直肠癌患者资料，收集病理标本。采用免疫组织化学法检测结直肠癌及癌旁正常组织（距癌灶2 cm）中CDNK1B蛋白表达水平，分析CDNK1B表达与患者临床病理特征的相关性。结果:经既往生物信息学分析结果及HPA数据库、GEPIA数据库预测提示CDKN1B在结直肠癌中表达水平较正常结直肠组织低；HPA数据库中，CDKN1B高表达患者（425例）5年总生存率高于低表达患者（172例）（65%比51%），两组总生存差异有统计学意义（ P<0.001）；应用GEPIA数据库分期模块分析显示，CDKN1B基因表达水平与结直肠癌患者病理分期相关（ P＝0.033）。免疫组织化学法检测显示，CDKN1B定位于细胞核和细胞质。结直肠癌组织中CDKN1B高表达者比例低于癌旁正常组织[18.37%（18/98）比90.82%（89/98）， P<0.01]。低分化[低分化比高-中分化：3.70%（1/27）比23.94%（17/71）]、淋巴结转移[转移比未转移：6.38%（3/53）比29.41%（15/45）]、TNM分期越高[Ⅳ期比Ⅲ期比Ⅱ期比Ⅰ期：5.00%（1/20）比13.95%（3/33）比20.59%（8/30）比36.36%（6/15）]结直肠癌患者癌组织CDKN1B高表达者比例均较低（均 P<0.05），患者性别、年龄、肿瘤大小亚组间癌组织CDKN1B高表达者比例差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:CDKN1B主要表达于细胞核和细胞质，在结直肠癌组织中低表达；其表达越低，提示患者预后越差。CDKN1B可能成为结直肠癌临床诊疗与预后评估的标志物。

目的:探讨2,4,6-三甲基苯甲酰基苯基膦酸乙酯(TPOL)对细胞凋亡的影响及其潜在机制.方法:在光照或非光照条件下用不同浓度的TPOL处理TPOL敏感的HEK293T细胞,或在TPOL处理前加入不同的抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、pifithrin-α和Z-DVED-FMK.CCK-8法测定细胞活力;膜联蛋白V/碘化丙啶染色定量凋亡细胞数;DCFH-DA染色结合流式细胞术测量活性氧(ROS)水平;JC-1染色评估线粒体膜电位;Western blot分析凋亡相关蛋白和细胞周期调节分子的表达.结果:TPOL以剂量依赖的方式增强HEK293T细胞的凋亡(P<0.05),与Bcl-2的减少、Bax和细胞色素C(Cyto C)的增加、激活的caspase-9和caspase-3的上调以及PARP的裂解有关(P<0.05).TPOL增强的caspase-3切割和PARP裂解可以被Z-DVED-FMK挽救(P<0.01).TPOL处理会导致细胞内ROS迅速增加、线粒体膜电位降低和Cyto C的释放(P<0.01),而ROS清除剂NAC可逆转这一现象(P<0.01).TPOL诱导的p21、p27、Rb和细胞周期蛋白依赖性激酶2的变化也可以被p53抑制剂pifithrin-α恢复(P<0.05).pifithrin-α预处理能不同程度恢复TPOL诱导的Bax、Bcl-2、切割的caspase-9、活化的caspase-3和裂解的PARP的变化(P<0.05).结论:TPOL可通过激活ROS依赖的p53/p21/p27/Rb/Bax/Cyto C/caspase信号诱导细胞凋亡,伴随ROS介导的线粒体膜损伤.

目的 观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对于小鼠MC3T3-E1细胞系成骨分化、增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度梯度的硼替佐米作用于培养的MC3T3-E1细胞,利用茜素红染色检测成骨分化,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,Western blot分析细胞周期相关蛋白变化.结果 ①硼替佐米剂量依赖性地抑制MC3T3 E1细胞的增殖活力[IC50=(7.37±0.34) nmol/L];②低浓度硼替佐米能够诱导MC3T3-E1细胞发生成骨分化;③高浓度硼替佐米对于MC3T3-E1细胞表现出明显的毒性,诱导细胞凋亡发生;④低浓度硼替佐米所诱导的MC3T3-E1成骨分化进程中,伴随有明显的G0/G1期细胞周期阻滞.Western blot检测发现,G0/G1期细胞周期阻滞与细胞周期素依赖性激酶CDK2和CDK4表达水平降低,以及细胞周期蛋白内质网应激活化引起的细胞周期抑制蛋白p21Cip1和p27Kip1的表达上调有关.结论 低剂量蛋白酶体抑制剂硼替佐米能够诱导成骨前体细胞MC3T3-E1发生成骨分化,并引起G0/G1期细胞周期阻滞介导的增殖抑制.

目的 分析细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期调节因子p21和p27在生长激素腺瘤中的表达水平,观察CDK2抑制剂环O6-己基甲基鸟嘌呤(O6)对GH3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 构建包含3例垂体和46例腺瘤标本的组织芯片,按Knosp分级将肿瘤分为侵袭组(n=15)和非侵袭组(n=31),免疫组织化学技术分析CDK2、p21和p27的蛋白水平,结合随访信息分析其与临床特性的关系.GH3细胞分为O6组(0.4μmol/L和4μmol/L)和二甲基亚砜组(DMSO),细胞增殖实验MTS法检测细胞活力;Annexin V实验检测细胞凋亡;Brdu实验检测细胞周期,Western blotting实验检测CDK2、p21和p27变化.结果 腺瘤标本中CDK2、p21和p27的H-score评分分别为(104.8±28.3)分、(195±39.2)分、(158.8±32.3)分,CDK2在侵袭组表达较非侵袭组明显增高[(140±31.7)分vs.(87.8±26.7)分],p21[(152.3.1±35.2)分vs.(215.7±41.2)分]和p27[(118.1±28.4)分vs.(173.7±34.3)分]则明显降低(P<0.05).O6处理GH3细胞后,细胞活力与DMSO组相比,不同剂量O6处理组细胞活力分别为DMSO组的(84.5±7.6)％和(76.2±7.1)％(24 h)、(75.7±7.3)％和(69.6±6.2)％(48 h)、(70.2±6.4)％和(61.3±5.5)％(72 h).处理24 h后,O6组Annexin V阳性细胞分别为(8.86±1.78)％(P<0.05)和(19.36±4.20)％(P<0.01),而DMSO组为(3.35±0.73)％,PI阳性则分别为(3.82±0.53)％(P<0.05)、(10.14±2.65)％(P<0.01)和(1.34±0.33)％.Brdu实验显示,O6将GH3细胞阻滞在G1期,分别为(50.4±4.1)％和(59.4±4.7)％(P<0.05),DMSO组为(45.7±3.7)％.同时,蛋白印迹实验显示,O6处理后p21和p27呈现升高趋势(P<0.05).结论 CDK2、p21和p27表达与生长激素腺瘤侵袭密切相关,其抑制剂O6-己基甲基鸟嘌呤诱导GH3细胞凋亡,抑制细胞增殖.

目的 通过研究STL基因对牙髓干细胞(DPSCs)增殖的影响,为促进DPSCs在牙组织工程中的应用提供理论依据.方法 利用慢病毒敲减DPSCs的STL基因,用CCK8法和CFSE法检测其细胞增殖能力,用碘化丙啶染色检测细胞周期的分布,用实时定量RT-PCR检测细胞周期依赖素激酶抑制剂(CDKIs)相关基因的表达.结果 STL的敲减效率超过70％.敲减STL能明显抑制DPSCs的增殖,DPSCs的细胞周期阻滞于G0/G1期,CDKIs相关基因(p15INK4B、p16INK4A、p18INK4C、p19INK4D、p21Cip1、p27Kip1)的表达显著性上调.结论 敲减STL能通过上调p15INK4B、p16INK4A、p18INK4C、p19INK4D、p21Cip1、p27Kip1的表达使细胞周期停滞于G0/G1期,抑制DPSCs的增殖.

子痫前期(pre-eclampsia,PE)是妊娠期特发疾病,其发生与发展是导致母儿患病率、死亡率增加的重要原因,胎盘中滋养细胞正常的增殖、迁移与分化与其关系密切.P27作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin de-pendent kinase inhibitors,CKIs),与细胞周期因子结合调控细胞周期.与正常孕妇相比,PE患者胎盘滋养细胞中P27基因的表达明显增加,这可能与滋养细胞的增殖及侵入障碍有关.P27蛋白与不同蛋白质结合发挥不同作用,其调节主要依靠翻译后修饰及亚细胞定位.Nodal作为转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)的成员,在滋养细胞中通过多种机制上调P27 mRNA和蛋白水平,提高了P27蛋白的稳定性并在S10处诱导了P27蛋白的磷酸化,促使P27蛋白和CDK2向细胞质的转移,且加强P27/CDK2/CDK5/Stathmin的结合,从而抑制了细胞增殖、迁移及侵袭.P27蛋白在许多位点被磷酸化,氧化应激、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、蛋白O-岩藻糖基转移酶1(protein O-fucosyltrans-ferase 1,poFUT1)、磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB1-4)等通过使P27蛋白磷酸化,影响其泛素-蛋白酶体降解途径调节细胞周期进程.

目的 探究黄芩苷(BC)对人胆管癌(CCA)细胞QBC939和RBE增殖的影响及其潜在机制.方法 取对数生长期QBC939和RBE细胞,不同浓度的BC处理细胞24 h后,采用CCK-8法分别检测BC对CCA细胞增殖及敲低原癌基因蛋白质(c-Myc)后对BC引起细胞增殖活性改变的影响;高倍显微镜观察BC对细胞生长状态的影响;流式细胞术检测BC对CCA细胞周期的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)实验分别检测BC及小干扰RNA(siRNA)敲低CCA细胞中c-Myc后对周期相关蛋白周期素依赖激酶抑制剂(p27)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及c-Myc表达的影响.结果 与0μmol/L组相比,BC明显抑制QBC939和RBE细胞的增殖活性(P<0.01),且高倍显微镜下观察到细胞生长减缓;BC可将QBC939细胞周期阻滞于S期(P<0.05);随着BC浓度的增加,p27的蛋白水平明显上调,而Cyclin D1则显著降低(P<0.01);BC可下调c-Myc的蛋白表达,且敲低c-Myc后p27和Cyclin D1蛋白表达的变化趋势与BC处理时一致(P<0.05);单独敲低c-Myc后可明显抑制QBC939和RBE细胞的存活率(P<0.01),并能进一步增强BC的抑制作用.结论 BC通过抑制c-Myc信号通路阻滞细胞周期,进而抑制CCA细胞的增殖.

p27是细胞周期素依赖激酶抑制剂的一种，属于p21家族的非特异性多功能分子。本文主要阐述P27的发现，基因、蛋白结构特征，参与细胞周期调控及其与肿瘤的关系，并提出了问题和展望。

目的 通过观察叉头框蛋白O亚型3a(Foxo3a)和p27激酶蛋白抑制剂1(p27 kip1)在电针治疗面神经压榨性损伤过程中的表达变化,探讨电针促进面神经再生可能的作用机制.方法 将42只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为3组.正常组6只,不做任何处理;模型组18只,建立右侧面神经上颊支压榨损伤模型;电针组18只,建立右侧面神经上颊支压榨损伤模型后予穴位电针治疗.模型组、电针组均于术后4、14、28 d分别随机抽取6只大鼠取材.采用苏木素-伊红染色观察面神经元的形态变化,蛋白免疫印迹法及免疫组化法检测面神经元中Foxo3a及p27 kip1的表达,进行统计分析.结果 与模型组比较,电针组面神经元在术后各时间点细胞团更聚集,边界更清晰,细胞数目、神经元突起增多.术后模型组及电针组Foxo3a、p27 kip1蛋白表达量及免疫组化阳性细胞数均呈现出先下降后上升的趋势.术后4、14 d与正常组比较,模型组和电针组Foxo3a、p27 kip1蛋白表达量及免疫组化阳性细胞数均低于正常组(P<0.05),且电针组低于模型组同期(P<0.05).术后第28 d,模型组、电针组Foxo3a蛋白表达量及免疫组化阳性细胞数与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05);术后28 d,电针组p27 kip1蛋白表达低于正常组(P<0.05),p27 kip1免疫组化阳性细胞数低于模型组同期(P<0.05).结论 电针能加快面神经压榨性损伤的修复,其机制可能与促进面神经核团中Foxo3a、p27 kip1的表达量下降、缩短细胞周期有关.