目的:探讨圆柱瘤基因(CYLD)在非小细胞肺癌中的表达及其对增殖和转移特性的影响。方法:选取2021年6月到2023年12月阜外华中心血管病医院、河南省人民医院和郑州大学人民医院收治的93例非小细胞肺癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析组织中CYLD mRNA表达水平；采用对照慢病毒和CYLD过表达慢病毒感染人非小细胞肺癌H1299细胞系，建立对照组和CYLD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、EdU和体外移植瘤分析CYLD对细胞增殖的影响；采用划痕实验、Transwell实验和体外移植瘤分析CYLD对非小细胞肺癌的转移的影响。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析CYLD对细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)、c-MYC、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和活化因子蛋白1(AP1)蛋白表达水平的影响。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织CLYD蛋白表达水平(1.02±0.17)明显高于非小细胞肺癌组织(0.49±0.29)，差异有统计学意义( t＝15.300， P<0.05)。癌旁组织CLYD mRNA表达水平(1.52±0.23)明显高于非小细胞肺癌组织(0.68±0.12)，差异有统计学意义( t＝30.860， P<0.05)。对照组细胞活力[(86.84±6.05)%]明显高于GLYD组细胞[(57.95±3.79)%]，差异有统计学意义( t＝9.909， P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(82.97±5.65)%]明显高于GLYD组细胞[(49.95±9.43)%]，差异有统计学意义( t＝7.352， P<0.05)。对照组细胞成瘤体积[(919.09±61.86) mm 3]明显高于GLYD组细胞[(639.93±51.24) mm 3]，差异有统计学意义( t＝8.512， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.49±4.20)%]明显高于GLYD组细胞[(46.71±5.15)%]，差异有统计学意义( t＝13.560， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合数[(141.83±11.48)个]明显高于GLYD组细胞[(87.17±7.70)个]，差异有统计学意义( t＝9.686， P<0.05)。对照组细胞体内转移灶[(11.17±2.79)个]明显高于GLYD组细胞[(5.67±2.07)个]，差异有统计学意义( t＝3.884， P<0.05)。对照组细胞细胞Ki-67、c-MYC、Cyclin D1、JNK和AP1蛋白表达水平(0.95±0.10、1.20±0.06、0.93±0.06、1.48±0.09、1.31±0.08)明显高于GLYD组细胞(0.63±0.07、0.81±0.10、0.67±0.12、1.04±0.13、0.63±0.07)，差异有统计学意义( t＝6.612、9.613、4.657、6.724、15.770， P<0.05)。 结论:CYLD在非小细胞癌组织中呈低表达，过表达CYLD可抑制非小细胞肺癌的增殖和转移能力，主要与JNK1信号通路相关。

目的 探讨携带人硫氧还蛋白(hTRX)的重组腺病毒对柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠心肌炎症反应的影响及其机制.方法 雄性Balb/c小鼠60只,4周龄,体重l2~14 g,分为3组,即对照组、心肌炎组和hTRX组,每组20只.hTRX组及心肌炎组小鼠腹腔注射100 TCID50的CVB3病毒0.1 ml,对照组同时给予等量的生理盐水.接种病毒前2 d,hTRX组小鼠心包腔穿刺注射滴度为2.5× 108pfu/ml的TRX重组腺病毒30 μl,心肌炎组小鼠心包腔穿刺注射滴度为2.5×108pfu/ml的空载体重组腺病毒30 μl.于接种病毒的第7天将小鼠处死取心脏.心脏病理切片苏木素伊红染色观察各组心肌病理改变,电镜观察心肌超微结构改变,Western blot法检测心肌组织核因子κB(NF-κB)蛋白含量,ELISA法检测心肌组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白含量.结果 (1)各组小鼠心肌组织光镜观察结果:心肌炎组小鼠心肌炎病变检出14只,hTRX组检出5只,对照组未检出.光镜下观察可见,对照组小鼠心肌组织未见炎性细胞浸润及坏死灶,细胞排列整齐,呈圆柱状,细胞质丰富红染,胞核卵圆,位于细胞中央;心肌炎组小鼠可见局灶性心肌坏死和炎性细胞浸润;hTRX组小鼠可见点状心肌坏死和炎性细胞浸润.(2)各组小鼠心肌组织透射电镜观察结果:心肌炎组小鼠心肌细胞肿胀、大量肌丝溶解、线粒体肿胀空化.而与心肌炎组相比,hTRX组小鼠心肌细胞肿胀较轻、肌丝溶解较少、线粒体肿胀空化较少.(3)各组小鼠心肌细胞核中NF-κB的蛋白含量:心肌炎组小鼠心肌组织细胞核NF-κB蛋白含量高于对照组(F=6.237,P<0.01), hTRX组则低于心肌炎组(F=6.009,P<0.01).(4)各组小鼠心肌组织中TNF-α和IL-1β的蛋白含量:心肌炎组小鼠心肌组织TNF-α和IL-1β蛋白含量均高于对照组(F值分别为8.670和8.462,P均<0.01),而hTRX组则均低于心肌炎组(F值分别为7.542和7.219,P均<0.01).结论 hTRX可减轻病毒性心肌炎小鼠的心肌损伤和炎症反应,其机制可能与hTRX可下调NF-κB、TNF-α和IL-1β蛋白表达密切相关.

圆柱瘤基因(CYLD)是一种肿瘤抑制基因,其突变或缺失将会导致圆柱瘤的发生.由其编码的去泛素化酶CYLD蛋白是去泛素化酶家族的成员.CYLD通过移除底物蛋白K63连接的泛素链来改变靶分子的功能,并参与核因子κB、JNK和Wnt等信号通路的调控.现就近年CYLD的研究进展,尤其在肝脏相关疾病进展中的负向调控作用进行综述.

目的 探讨圆柱瘤基因(CYLD)干扰对实验性视网膜脱离中光感受器细胞坏死性凋亡伴发自噬的影响.方法 大鼠视网膜下注射慢病毒载体3周后,在各实验组建立视网膜脱离的模型,分为正常对照组、未干预组、CYLD干预组、阴性干预组.建模3d后,使用电镜观察光感受器细胞的形态学特点并判断其死亡方式.采用Western blot法检测视网膜裂解的LC3蛋白、beclin-1蛋白表达.结果 电镜检测结果显示CYLD干预组光感受器细胞坏死数明显低于未干预组和阴性干预组(P＜0.05).Western blot结果表明CYLD干预组LC3蛋白、beclin-1蛋白表达水平显著低于未干预组和阴性干预组(P＜0.01).结论 电镜检测和West-ern blot检测结果共同显示CYLD干扰可以通过抑制LC3和beclin-1的活化,从而抑制光感受器细胞的坏死性凋亡伴发的自噬.

去泛素化酶(deubiquitinase,DUB)圆柱瘤蛋白(cylindromatosis,CYLD)是肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)介导的炎症反应和细胞死亡的重要调节因子,然而CYLD特异性识别底物的机制尚不清楚.本研究通过生物识别(BiolD)筛选得到CYLD的相互作用蛋白——精子发生相关蛋白2(spermatogenesis associated 2,SPATA2),并利用免疫沉淀法(immunoprecipitation,IP)和双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)证实了CYLD与SPATA2的相互作用.SPATA2敲降或敲除抑制了TNF-α诱导的细胞凋亡和程序性死亡,增强了炎症相关基因的表达.机制研究发现,响应TNF-α刺激,SPATA2促进CYLD向肿瘤坏死因子受体信号复合物(tumor necrosis factor receptor signaling complex,TNFRSC)招募和催化受体相互作用蛋白1(receptor-interacting protein 1,RIP1)去泛素化,进而将TNF-α信号的效果由促炎反应向细胞死亡转变.小鼠模型研究发现,SPATA2敲除小鼠在从出生到成年过程中其生长发育和生殖方面均无明显异常.然而对12～15个月龄小鼠器官的苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和病理形态学分析发现,SPATA2敲除小鼠的结肠和肺部较野生型小鼠出现更为严重的自发性炎症反应,说明SPATA2在体内也具有抑制炎症的功能.本研究揭示了SPATA2通过调控CYLD抑制炎症反应、促进细胞死亡的作用和分子机制,为炎症性相关疾病的治疗提供了新的潜在靶点.

目的 研究中国汉族多发性家族性毛发上皮瘤1家系CYLD基因突变,初步分析该基因突变位点与多发性家族性毛发上皮瘤表型的关系.方法 收集该家系患者的临床资料,抽取该家系中2例患者、1例正常人及100例无亲缘关系的健康对照的外周血并提取DNA,通过Sanger测序检测CYLD基因9～20号外显子突变.结果 在该家系的2例患者CYLD基因的第20号外显子中均检测到杂合无义突变c.2806C＞T,家系中l例正常人及100例健康对照均未检测到上述突变.该突变在多发性家族性毛发上皮瘤、家族性圆柱瘤和Brooke-Spiegler综合征中已有报道.结论 CYLD基因的无义突变c.2806C＞T是该家系中患者的致病突变.同1个突变在不同的家系中的临床表型可能有差异.

目的 探讨MiR-767和圆柱瘤基因(CYLD)在皮肤恶性黑色素瘤(CMM)的表达情况和意义.方法采集45例CMN患者肿瘤组织及配对的瘤旁正常组织进行研究,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肿瘤组织及瘤旁组织MiR-767和CYLD表达水平,分析二者相关性及对CMM预后的临床意义.结果肿瘤组织中MiR-767表达水平明显高于瘤旁正常组织(P<0.05),CYLD表达水平显著低于瘤旁正常组织(P<0.05);MiR-767表达在不同性别间比较,差异无统计学意义(P>0.05),与肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤厚度密切相关(P<0.05),CYLD表达在不同性别、肿瘤分期差异无统计学意义(P>0.05),与淋巴结转移、肿瘤厚度密切相关(P<0.05);随着CMM肿瘤组织中MiR-767表达水平升高,CYLD表达呈明显降低趋势,MiR-767与CYLD表达呈明显负相关(r=-0.791,P<0.001);MiR-767高表达组预后5年存活率显著低于低表达组存活率(P<0.05);CYLD高表达组预后5年存活率显著高于低表达组存活率(P<0.05);经Logistic多因素回归分析显示,性别对CMM患者预后无明显影响(P>0.05);肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤厚度、MiR-767是影响CMM患者预后的危险因素(P<0.05),CYLD是影响CMM患者预后的保护因素(P<0.05).结论CMM患者存在肿瘤组织中MiR-767表达水平升高,CYLD表达水平降低现象,与肿瘤侵袭、转移密切相关,同时可作为CMM患者预后潜在的检测指标.

骨重建包含破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的骨形成,生理状态下二者相互耦联维持骨稳态.越来越多的研究发现泛素蛋白酶途径在骨重建过程中扮演重要角色.泛素化的可逆性是由去泛素化酶实现的,其中,泛素特异性蛋白酶(ubiquitin?specific proteases,USPs)是数量最多的去泛素化酶.目前研究表明,泛素特异性蛋白酶可通过调节成骨细胞、破骨细胞的分化及功能,进而影响骨重建过程.本文总结了USPs调控骨重建的相关机制,包括USP4、USP7等通过调控Wnt/β?catenin等信号通路影响骨形成,圆柱瘤基因(cylindromatosis,CYLD)等通过核因子κB(nuclear factor?kappa B,NF?κB)等信号通路调控骨吸收.除了影响骨重建中的骨吸收与骨形成作用,USPs对骨的影响还体现在人牙周膜干细胞的成骨分化与种植体骨结合方面.未来的研究方向应寻找USPs对骨重建是否具有更多的调节作用,以及其调节作用的具体机制,为治疗骨骼疾病提供更多途径.

目的 探讨高频重复经颅磁刺激(HF-rTMS)促进脑梗死大鼠脑神经功能恢复的作用及机制.方法 选择230～250 g的雄性大鼠构建短暂性大脑中动脉闭塞(tMCAO)模型.根据改良神经功能缺损评分(mNSS)选择7～12分的大鼠进行研究,采用随机数字表法分为经颅磁刺激组(rTMS组)、对照组(tMCAO组)和假手术组(Sham组).rTMS组大鼠于术后第1天开始接受为期28 d的10 Hz rTMS的治疗,tMCAO组和Sham组分别予以假刺激治疗.各组大鼠于术后第1、3、7、14、21、28天分别进行mNSS评分、圆柱桶试验和胶布移除试验的行为学功能评估,采用TTC染色检测术后各组大鼠的脑梗死体积,采用ELISA方法检测各组大鼠脑脊液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-4和IL-10水平,并对rTMS组和tMCAO组的脑梗死大鼠的梗死灶周围皮质组织进行RNA测序分析.结果 与tMCAO组相比,rTMS组在术后第14、21和28天的mNSS评分和胶布移除时间显著减少,在术后第7、14、21和28 d的前肢不对称使用评分显著减少,差异均有统计学意义(P均＜0.05).与tMCAO组相比,rTMS组的梗死体积在治疗后第 14天[(45.33±5.89)％vs.(35.98±3.57)％]和第28天[(33.58±4.17)％vs.(23.00±5.29)]显著减小,差异均有统计学意义(P均＜0.05).ELISA检测显示在术后第28天,与tMCAO组相比,rTMS组IL-1β[(9.95±1.27)pg/mL vs.(6.90±0.60)pg/mL]和TNF-α[(103.30±13.35)pg/mL vs.(70.05±9.63)pg/mL]水平均显著减少,而 IL-10水平显著增加[(17.32±3.07)pg/mLvs.(27.31±4.14)pg/mL],差异均有统计学意义(F=15.33、16.25、16.04,P均＜0.05);IL-4的水平[(66.07±7.15)pg/mLvs.(78.41±9.85)pg/mL]增加,差异无统计学意义(F=18.91,P＞0.05).进一步RNA测序分析发现rTMS组和tMCAO组之间共有79个显著差异表达基因(DEGs).KEGG分析显示DEGs主要富集在炎症相关通路:AGE-RAGE信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路.基因集富集分析(GSEA)显示这3条通路在rTMS组中均受抑制.结论 HF-rTMS能通过减轻脑梗死大鼠的神经炎症反应而促进神经功能的恢复,其机制可能与AGE-RAGE信号通路、Toll样受体信号通路和NOD样受体信号通路相关.