目的:研究广泛耐药肺炎克雷伯菌（XDRKP）耐药表型特点及相关耐药机制。方法:收集山西白求恩医院2018年1月至2020年12月内分离的3 201株肺炎克雷伯菌并根据已有药敏结果筛选116株广泛耐药肺炎克雷伯菌纳入研究。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及梅里埃VITEK-compact 2进行菌株鉴定及药敏试验，药敏结果K-B法或微量肉汤稀释法复核。改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）联合乙二胺四乙酸协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM）检测XDRKP碳青霉烯酶表型，并与碳青霉烯酶基因扩增结果比对。聚合酶链反应（PCR）扩增耐药基因：碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA）；氨基糖苷耐药基因：16S rRNA甲基化酶基因（rmtA、rmtC、rmtD、rmtG、rmtH、armA、npmA、rmtB、rmtE、rmtF），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；喹诺酮耐药基因：DNA解旋酶保护蛋白qnr家族基因（qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS），外排泵蛋白基因（oqxAB、qepA），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；替加环素耐药Tet蛋白基因［外排泵蛋白基因：tet（A）和tet（L）］，核糖体保护蛋白基因［tet（M）］，替加环素修饰酶基因［tet（X）］。对照分析各XDRKP耐药表型与相应耐药基因携带情况间的关系。结果:共收集到XDRKP 116株。头孢菌素类及喹诺酮类抗菌药物耐药率100%（116/116），碳青霉烯类抗菌药物耐药率99.14%（115/116），氨基糖苷类抗菌药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星耐药率分别为95.69%（111/116）、94.83%（110/116）、88.79%（103/116），磺胺类抗菌药物耐药（44/116）与替加环素耐药（3/116）检出率较低。mCIM联合eCIM试验结果与碳青霉烯酶基因扩增结果一致率95.65%（110/115）。各耐药基因阳性率：blaKPC 90.52%（105/116），blaNDM 10.34%（12/116），rmtB 81.90%（95/116），armA 2.59%（3/116），oxqAB 65.52%（76/116），qnrB 6.03%（7/116）、qnrS 12.93%（15/116）、aac（6′）-Ib-cr 7.76%（9/116），tet（A）21.55%（25/116）。其余各耐药基因未检出。匹配分析发现，共有65株XDRKP耐药表型与耐药基因型不匹配，即抗菌药物耐药表型不能用携带相应耐药基因来解释。结论:XDRKP中各类耐药基因的广泛分布和某些基因［如aac（6′）-Ib-cr、oqxAB］的多重耐药作用是广泛耐药产生的潜在原因。不同菌株针对同一类抗菌药物可能携带一种或多种耐药基因。此外，部分菌株耐药表型与耐药基因不匹配，提示耐药基因的表达调控及存在其他耐药机制也与XDR的产生有关。

目的:探讨降钙素基因相关肽（CGRP） rs155209和受体活性蛋白1（RAMP1）rs3754701两个基因位点突变是否与干扰素治疗慢性乙型肝炎（乙肝）预后有关。方法:采用调查问卷的方法收集317例研究对象的一般资料，收集其抗凝血，提取DNA，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱实验平台进行SNPs分型，使用单因素及多因素logistic回归方法分析CGRP及RAMP1基因多态性与干扰素治疗慢性乙肝预后的关系。结果:携带RAMP1基因rs3754701T者更容易出现DNA应答和ALT应答（ OR＝2.277，95 %CI：1.386～3.741， P＝0.001； OR＝1.694，95 %CI：1.073～2.675， P＝0.024），而携带CGRP基因rs155209C者更不易出现DNA应答和ALT应答（ OR＝0.150，95 %CI：0.083～0.271， P<0.001； OR＝0.583，95 %CI：0.367～0.925， P＝0.022）。 结论:在中国北方汉族人群中，CGRP基因的rs155209和RAMP1基因的rs3754701位点与干扰素治疗慢性乙肝预后有关，rs3754701T在干扰素治疗后的DNA应答和ALT应答中起保护作用，而rs155209C携带者不易出现DNA应答和ALT应答。

分析临床1例脑梗死患者体温达38.4 ℃时外周静脉血及导管血检出的长孢洛德酵母菌的生物学特性，观察科玛嘉念珠菌显色平板的菌落形态和醋酸钠培养基上子囊孢子的产生情况，利用Vitek 2 compact、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）、测序分析分别进行鉴定，并进行药敏试验研究，以提高实验室对该菌的鉴定水平。药敏试验结果显示此例分离株对多种抗真菌药物的MIC值较低。临床给予拔除中心静脉置管，并使用抗真菌药物治疗至最后一次血培养阳性后2周，用药期间多次复查血培养均为阴性，患者无发热，各项感染指标基本降至正常，可供临床参考。

目的:探讨不同正畸矫治阶段唾液多肽组学的差异。方法:纵向观察不同矫治阶段(初戴矫治器2个月、矫治18个月)的正畸患者共30例，在两个时间点分别收集其总唾液，利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionisation time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)结合弱阳离子磁珠进行检测分析，并利用数据库和软件进行蛋白预测。结果:MALDI-TOF质谱分析结果平均检测到了130个有意义的多肽谱峰，两组比较结果显示不同矫治阶段患者的唾液多肽组分存在明显差异，统计分析发现两组共有7个多肽峰其峰值的差异具有统计学意义，其中有5个谱峰在18个月组的峰值强度高于2个月组，另外2个谱峰在18个月组的峰值强度低于2个月组；此外本研究预测2022.1Da为C3补体，2863Da为载脂蛋白A1。结论:本研究提示正畸矫治及牙齿移动的过程中唾液多肽组分存在着变化和差异，相关生物学标记物可能发挥重要作用，可能与正畸过程中的机械力作用产生的牙槽骨改建、牙根吸收等有关，提出了基于唾液检测的精准医疗探索正畸矫治及牙齿移动相关的生物标记物的新思路。

目的:基于多重聚合酶链式反应（PCR）与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）联用的高通量检测技术，构建不同菌种的特征性单核苷酸多态性图谱以建立血流感染病原菌快速、准确、高灵敏的诊断方法。方法:选取血流感染常见的大肠埃希菌等7种病原菌作为检测对象，优化多重PCR条件，采用MALDI-TOF MS检测各目标菌特征峰，建立多重PCR联合质谱检测体系；分别设计普通引物对及中部同序引物对，分析引物二聚体的形成情况；采用模拟的细菌感染血液样本，测定上述建立体系的特异度及灵敏度；收集2020年6—9月解放军总医院检验科疑似菌血症患者血液样本150份，并将上述体系的鉴定结果与临床应用的传统鉴定方法结果使用χ2检验进行比较。结果:本研究设计的中部同序引物对的引物二聚体循环阈值（Ct）值在38以上，比普通引物对延迟出现6~10个循环；建立的联合质谱检测体系可同时检测分为两组的7种细菌，目标菌均可检测到特异的产物峰，除目标菌外的临床菌株只有引物峰，所有图谱无非特异的杂峰；大肠埃希菌的灵敏度可以达到50 CFU/ml，其余各菌的检测限为100 CFU/ml；对150例患者的血液样本进行检测，传统方法鉴定出阳性46例，阳性检出率为30.67%（46/150），包括2例混合感染，联合质谱方法鉴定出阳性48例，阳性检出率为32.0%（48/150），包括3例混合感染；阴性符合率为100%（101/101），核酸质谱敏感度为97.82%（45/46），特异度为97.11%（101/104），一致性检验Kappa=0.938（ P=0.625），2种方法检测一致性良好。 结论:所建立的检测体系不仅能快速、准确地鉴定引起血流感染的7种常见病原菌，有效缩短传统培养鉴定所需时间，还可检测多重细菌混合感染，弥补混合感染漏检可能。该方法也可用于其他病原菌的鉴定。

目的:总结新生儿非脱羧勒克菌感染致晚发型败血症（late-onset sepsis，LOS）的临床特征，为其诊治提供依据。方法:回顾性分析南京医科大学附属苏州医院新生儿科采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）确诊的1例非脱羧勒克菌感染致LOS的早产儿临床资料。以“新生儿/neonate、败血症/sepsis、非脱羧勒克菌/ Leclercia adecarboxylata”为关键词，检索万方、维普、中国知网和PubMed数据库，检索时间为建库至2021年4月，并对新生儿非脱羧勒克菌感染致LOS的临床特征及诊治过程进行文献复习。 结果:本例患儿为胎龄34周 +3早产儿，出生体重2 050 g，男性，因生后呼吸困难14 min入院，入院后予暖箱（温度33～35 ℃，湿度50%～60%）保暖，先后给予经鼻持续气道正压通气、气管插管、气管内注入肺表面活性物质及有创机械通气支持，应用哌拉西林、头孢哌酮/舒巴坦、美洛培南抗感染，于生后11 d发生LOS。虽经扩容、抗感染、呼吸支持等治疗，但病情进行性加重，最终因弥散性血管内凝血、多脏器功能衰竭而死亡。患儿死亡后1 d血培养MALDI-TOF MS鉴定为非脱羧勒克菌，药敏实验提示为多重耐药菌。文献复习获得国外报道新生儿非脱羧勒克菌感染2例，均为早产儿、女婴、敏感菌株导致的LOS，发病初期临床表现均缺乏特异性，经治疗后痊愈1例、死亡1例。 结论:非脱羧勒克菌单一感染可导致早产儿LOS，无特异临床表现，MALDI-TOF MS有助于其诊断及抗生素的合理应用。

质谱技术是一种基于质谱仪设备检测物质分子量的谱学技术方法。质谱类型众多、功能各异，在各个学科领域中广泛用于科学研究与应用技术开发。近年来，质谱技术在核酸检测分析中显现出巨大的潜力，尤其是基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的核酸检测分析技术，因其快速、高通量、准确等特性而成为研究热点。采用质谱技术进行核酸研究，突出表现在对单核苷酸多态性、基因突变、DNA甲基化及DNA拷贝数变异的检测分析。本文对质谱技术在核酸检测中的研究与应用进行阐述，以期为基于质谱的新型核酸检测技术的开发与应用提供参考。

目的:分析皮肤化脓性感染部位分离的金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）耐药、毒力及分子流行病学特征，为临床抗感染用药提供实验依据。方法:收集内蒙古医科大学附属医院2020年5-12月皮肤科住院患者皮肤化脓性感染部位及鼻腔分泌物样本进行细菌分离培养。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定疑似金葡菌菌落，用微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验，PCR扩增金葡菌毒力基因，实时荧光定量PCR检测tsst-1、pvl、hla、clfA 4种毒力基因在不同来源金葡菌菌株中的相对表达量。对金葡菌菌株进行多位点序列分型（MLST）。耐药率及毒力基因检出率比较采用 χ2检验或Fisher确切概率法，计量资料组间比较采用 t检验或曼-惠特尼 U非参数检验。 结果:在210例住院患者中，共分离金葡菌85株，包括皮肤化脓性感染部位54株（病例组），鼻腔部位31株（对照组）。药敏试验结果显示，85株金葡菌中14株为耐甲氧西林金葡菌（MRSA）。85株菌对青霉素耐药率[90.59%（77/85）]最高；对克林霉素和红霉素耐药率分别为60.00%（51/85）、61.18%（52/85），未发现对利福平、万古霉素和利奈唑胺耐药菌株。PCR显示，病例组菌株pvl基因检出率（33.33%，18/54）高于对照组（12.90%，4/31， χ2 = 4.28， P = 0.038）。实时荧光定量PCR显示，对照组菌株clfA相对表达量[3.87（2.30，5.94）]高于病例组[1.63（0.95，2.62）， P = 0.007]。85株金葡菌分型共得到17个ST型别，其中主要优势型别为ST398-甲氧西林敏感金葡菌（20/71）和ST22-MRSA（9/14）。ST22-MRSA菌株毒力基因pvl检出率（14/14）明显高于非ST22型MRSA（0， P < 0.001）。 结论:皮肤化脓性感染部位分离的金葡菌对青霉素、克林霉素和红霉素耐药率较高，这些抗生素不应作为临床经验治疗的首选药；皮肤金葡菌感染性疾病发病可能与毒力基因pvl有关；金葡菌鼻腔定植可能与clfA基因有关。

目的:探讨血培养分离大肠杆菌（ E. coli）的耐药情况，评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）对 E. coli同源性分析能力，并建立与之匹配的蛋白指纹库，辅助临床经验用药，为院感防控提供参考依据。 方法:回顾性分析2016年1月至2022年12月医院送检血培养 E. coli的耐药性及耐药变迁情况；收集2016年1月至2022年12月青海省人民医院血培养分离 E. coli 1841株；所有菌株均采用MALDI-TOF MS进行鉴定，应用VITEK2.0药敏分析仪对菌株进行药敏分析，并用MALDI-Biotyper软件进行质谱同源性分析及自建蛋白指纹库；利用WHONET5.6软件统计药敏结果，利用SPSS23.0软件分析指纹分型与药敏结果之间的关系，组间比较采用 χ2检验。 结果:2016年1月至2022年12月4 582份血培养阳性标本中共检出 E. coli 1 841株，检出率为40.17%；血培养分离 E. coli对哌拉西林/他唑巴坦和头孢曲松的耐药率呈上升趋势，对头孢吡肟、阿米卡星、左旋氧氟沙星和磺胺甲恶唑略有下降，对其余药物变化不大；经MALDI-Biotyper聚类分析，将血培养分离的 1 841株 E. coli分为两大簇五个亚型，其中Ⅰa 1型约占40%、Ⅰa 2型约占2.7%、Ⅰb型约占3.8、Ⅱa型约占46%、Ⅱb型约占7.5%。Ⅰa 1型 E. coli在普外科（50.45%）和急诊外科（50.92%）的检出率较高，Ⅰb型 E. coli在急诊内科检出率（10.05%）高于其他科室。不同分型之间的药敏结果相互比较，Ⅰa 1型 E. coli对头孢吡肟的耐药率21.3%高于其余四型，差异有统计学意义（ χ2=37.74， P=0.000）；Ⅱ型 E. coli对磺胺甲恶唑的耐药率（>60%）整体高于Ⅰ型（<60%），差异有统计学意义（ χ2=15.248， P=0.004）；初步建立了 E. coli同源性蛋白指纹库并进行验证。将验证集中1 288株 E. coli药敏结果进行统计，并与训练集的药敏结果进行比对，差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:本研究血培养分离 E. coli对哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、阿米卡星等抗菌药物的耐药率变化较大；建立 E. coli同源性蛋白指纹库，发现不同指纹分型 E. coli的药敏数据有差异，依据药敏数据可以辅助临床用药。

目的:联合聚合酶链反应与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术，构建检测5种临床常见念珠菌血症病原菌的高通量检测方法。方法:方法学建立。以白色念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌为目标菌株，以内转录间隔区为靶基因，设计特异的单碱基延伸引物，在同一反应体系内进行单碱基延伸反应，用MALDI-TOF MS检测各目的菌特征峰；使用模拟血流感染样本验证上述构建的检测体系敏感度、特异度；前瞻性收集2021年10月至2022年9月解放军总医院第一医学中心检验科108例疑似或确诊念珠菌血症患者血液样本并检测；将核酸质谱检测结果与金标准血培养方法进行比较。结果:用所建立的核酸质谱检测体系同时检测5种临床常见念珠菌，各菌种均可产生特异的产物峰且各菌种之间不存在相互干扰。白色念珠菌的最低检测限可达100 CFU/ml，近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌的最低检测限可达10 CFU/ml。对108份血液样本进行检测，核酸质谱的敏感度为94.74%（36/38），特异度为97.14%（68/70），阳性预测值为92.31%（36/39），阴性预测值为98.55%（68/69），配对四格表的χ 2检验显示2种方法无显著差异（ P>0.05），Kappa一致性检验显示2种方法一致性良好（ Kappa=0.9， P<0.05）。 结论:成功构建了适用临床念珠菌检测的核酸质谱检测体系，方法验证结果与临床血培养具有一致性。