目的:评估宏基因组二代测序（mNGS）技术在支气管肺泡灌洗液（BALF）中检测病原菌对重症监护病房（ICU）器官移植患者肺部感染的诊断价值。方法:采用回顾性研究方法，收集2018年8月至2021年8月中国科学技术大学附属第一医院重症医学科收治的46例器官移植后肺炎/疑似肺炎患者的BALF，均进行了同步mNGS和常规微生物综合试验（CMT）检测，并以CMT结果作为参考标准，比较mNGS和CMT在器官移植患者肺部感染中诊断价值的差异，并分析mNGS对于混合感染的诊断价值。结果:①肺炎病原体：在入组的35例患者中共检测出31种病原体，包括细菌（16种）、真菌（9种）、病毒（6种），其中mNGS和CMT共同检测到25种病原体，仅mNGS检测到19种病原体。采用mNGS方法分离出的微生物中，铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌及肺炎克雷伯菌的检出率较高〔分别为51.4%（18/35）、42.9%（15/35）、31.4%（11/35）〕；白色假丝酵母菌、曲霉属和肺孢子菌属是最常检测出的真菌〔分别为31.4%（11/35）、22.9%（8/35）、22.9%（8/35）〕；有20例患者病毒检测呈阳性，最常检测到的病毒为巨细胞病毒、疱疹病毒和EB病毒〔分别为28.6%（10/35）、20.0%（7/35）、17.1%（6/35）〕。此外mNGS还检测出1例布鲁氏菌。②诊断效能：就细菌检测而言，对纳入研究的35例患者样本进行CMT检测有20例阴性结果，对阴性样本采用mNGS方法检测共产生10例阳性结果；mNGS阳性样品的百分比显著高于CMT阳性样品〔优势比（ OR）＝5.5，95%可信区间（95% CI）为1.2~24.8， P＝0.02〕；mNGS对于诊断细菌的敏感度和特异度分别为93.3%、50.0%，而阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）分别为58.3%、91.1%。就真菌检测而言，两种检测方法阳性样品的百分比无明显差异（ OR＝1.5，95% CI为0.5~4.2， P＝0.60）；mNGS对于诊断真菌的敏感度和特异度分别为72.2%、64.7%，PPV和NPV分别为68.4%、68.8%；对纳入35例样本进行CMT检测产生17例阴性结果，对检测阴性样本使用mNGS检测共产生6例阳性结果。共20例患者样本采用mNGS检测到病毒阳性。此外，23例患者（占65.7%）被确诊为肺部混合感染。 结论:使用mNGS检测BALF中的病原体提高了危重症器官移植患者肺部感染细菌鉴定的敏感度和特异度，mNGS在检测病毒和识别混合感染方面有明显优势。

目的:探讨游泳池肉芽肿的临床病理特征。方法:回顾性分析2018年1月至2021年1月天津市中医药研究院附属医院56例游泳池肉芽肿的临床及病理特点。结果:56例患者中，男16例，女40例，平均年龄60.84岁。水产从业人员及居民日常烹饪中处理受感染的鱼或海产品是本组病例感染的主要暴露方式（31/56），平均潜伏期4.58周，平均诊断时间为3.19个月；56例患者皮损均位于上肢，以红斑、丘疹结节为主，有时表现为脓疱、溃疡、肉芽肿或疣状斑块。单发孤立性皮损11例，36例表现为孢子丝菌病串珠样皮损，6例表现为双侧串珠样皮损。组织病理学上除4例无特异性改变外，52例患者表现为感染性肉芽肿，其中37例出现特征性的渗出坏死，中央为不等量的纤维素样渗出或坏死物，其内或周边伴随大量中性粒细胞、组织细胞及多核巨细胞浸润。56例病原微生物宏基因组DNA测序均检测到海分枝杆菌序列。结论:天津地区游泳池肉芽肿以老年女性患病为主，处理受感染的鱼或海产品是最主要的暴露方式，组织病理可表现为特征性的渗出坏死性肉芽肿。

报道国内首例慢性播散性副球孢子菌病。患者男，49岁，因皮肤丘疹、结节1年，口腔黏膜丘疹、溃疡2个月入院。皮肤科检查：左足水肿，左足底多发溃疡，表面结痂，左足第3、4趾间及第4、5趾间溃疡，基底呈颗粒状，伴点状出血、渗出；左足背、左足内侧及左膝多发丘疹、结节、斑块，中央溃疡、结痂；左腕部2个丘疹，上唇左侧1个丘疹，表面结痂；牙龈、颊黏膜、唇黏膜及上颚可见红色斑块伴溃疡、点状出血，皮损以左侧为主。浅表淋巴结彩超：双侧颈部及锁骨上窝淋巴结肿大，左侧为著。胸腹部计算机断层扫描图像示：双肺弥漫粟粒样结节影及条索状、云絮状、结节状高密度影，左侧肾上腺明显增粗。口腔、左下肢皮损组织真菌免疫荧光染色，可见酵母细胞。口腔黏膜、左下肢皮损组织病理：肉芽肿性炎，多核巨细胞内外可见酵母细胞，折射双膜，无芽、单芽或多芽；过碘酸希夫染色、六胺银染色阳性。左下肢皮损组织真菌培养：25 ℃、37 ℃沙氏葡萄糖琼脂培养基中培养阳性，均为菌丝相。口腔黏膜及肺泡灌洗液宏基因组学测序：巴西副球孢子菌。诊断：慢性播散性副球孢子菌病。予伊曲康唑胶囊400 mg/d口服，1个月后皮肤、黏膜皮损明显好转，肺部及左侧肾上腺影像学表现亦好转，3个月后伊曲康唑减量至200 mg/d。随访10个月，病情进一步好转。

患者男，65岁，主诉左小腿红斑及增殖性斑块伴痒30余年，加重半年。患者于1990年左右无明显诱因左外踝出现瘙痒，搔抓后形成红斑、丘疹，逐渐累及左小腿，部分皮损较肥厚，呈增殖性改变，且瘙痒加重，无关节痛及发热等不适，否认有足癣病史。1997年在当地医院手术切除部分增殖性皮损后，左小腿外侧形成溃疡。2007年至2016年多次在各地皮肤科就诊，诊断为真菌感染（具体不详）。在医生指导下口服伊曲康唑200 mg每日2次，疗程1年，效果不明显，遂遵医嘱改为盐酸特比萘芬250 mg/d疗程2年，自觉效果不佳，遂自行停药，未再治疗。2016年8月无明显诱因患者发现皮疹再次增多，并向大腿蔓延，遂就诊，无发热、咳嗽咳痰，无关节畸形及疼痛，无明显体重减轻，饮食睡眠及二便尚可。家族中无类似疾病患者。既往无输血及应用血制品史，无高血压、糖尿病等病史，无传染性疾病史，无食物、药物过敏史。系统检查：一般情况尚可，各系统无明显异常。实验室检查：血尿常规、肝肾功能正常，梅毒螺旋体和人免疫缺陷病毒相关检查均为阴性。皮肤科检查：左小腿可见多发性黄豆至鸽蛋大小红斑、丘疹及增生性结节、斑块，小腿外侧部分斑块破溃，见较多黏性渗出物及黄褐色结痂，左踝及足背肿胀（图1A）。溃疡边缘行组织病理检查：表皮角化过度，棘层增生肥厚，呈假上皮瘤样增生，真皮中上可见密集中性粒细胞、淋巴细胞、组织细胞及多核细胞浸润（图1B），过碘酸希夫染色可见硬壳小体（图1C）。真菌直接镜检：取溃疡处脓液和黑色小点部位脓液涂片可见少量杆状细菌和少量真菌菌丝。组织液细菌培养：血平板37 ℃培养7 d有细菌生长，通过VITEK2 COMPAC型全自动药敏分析系统鉴定为奇异变形杆菌、摩尔摩根菌摩根亚种（ Morgamella morganii subsp. morganii）。脓液真菌培养：沙氏培养基27 ℃培养4周见单个黑色菌落，表面凸起灰黑色菌落，背面呈深橄榄黑色，表面可见气生绒毛（图2A）。行小培养4周，显微镜下见大片枝孢型或喙枝孢型分支，分生孢子主要位于孢子梗顶端，以单细胞性紧密堆积成球状或排列成短链状（图2B）。药敏检测显示，伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、特比萘芬、两性霉素B和卡泊芬净最小抑菌浓度值分别为128、128、256、4、512、256和256 μg/ml。分子生物学鉴定：提取真菌DNA送至北京华大基因公司进行序列测定，Genbank BLAST比对结果提示该菌株与 Fonsecaea nubica碱基序列一致性大于99%，该菌序列已上传至Genbank数据库并获得编号MW269556（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MW269556），通过内部转录间隔序列构建系统发育树，并使用MEGA7.0建立邻里连接，最终显示菌株的来源属 Fonsecaea nubica。

孢子丝菌病是我国最常见的皮下深部真菌病,由申克孢子丝菌复合体感染所致.孢子丝菌复合体是由多个隐蔽种构成,其菌种之间在毒力、传播途径、药敏等方面存在较大差异.我国有着多种多样的生态环境,全国各地区基本上都有孢子丝菌病的报道,致病菌种主要以球形孢子丝菌为主,近年来也分离出申克孢子丝菌.孢子丝菌病在世界其他地区常见于热带或亚热带,而在我国多见于寒冷的东北地区.深入了解孢子丝菌的病原体分类、生态位、感染途径、药敏等,有助于我国孢子丝菌病的防治.

患者女,38岁,左上肢多发结节4个月,加重半个月.皮肤科情况:左侧中指掌指关节处、左侧手背、左上臂、肘部伸侧可触及蚕豆至乒乓球大小结节,呈孢子丝菌病样分布,触之质硬无触痛,手背及手掌处结节周围皮肤红肿,部分中央可见黄褐色结痂.组织菌种鉴定结果提示:嗜血分枝杆菌.诊断:系统性红斑狼疮合并嗜血分枝杆菌感染.治疗:予以乳酸环丙沙星、克拉霉素片、利福平胶囊抗感染,吗替麦考酚酯分散片、醋酸泼尼松、硫酸羟氯喹控制红斑狼疮,治疗1个月后皮损部分较前减退;治疗10个月后皮损大部分消退.患者目前仍在随访中.

目的 探讨AB-PAS染色在临床病理诊断中的应用价值.方法 对包括肺黏液表皮样癌、胃印戒细胞癌、膜性肾病和真菌感染在内的40例病理标本进行AB-PAS染色,判定组织内是否含有黏液、糖原或是真菌感染,从而辅助这类疾病的临床病理诊断.结果 通过AB-PAS染色,肺黏液表皮样癌肿瘤细胞胞质呈现紫红色或蓝色的液滴状;组织细胞样的胃印戒细胞癌,可呈蓝色或紫红色;膜性肾病可清晰地显示增厚的基底膜;真菌菌丝及孢子均呈阳性,曲菌菌丝在显呈紫红色,杂乱排列,粗细均匀,有隔,分支状,常呈45°的锐角分支;放线菌的菌丝呈紫红色,交织形成菌落,周围部分菌丝排列成放线状,菌丝末端膨大成棒状.结论 AB-PAS染色可直观观察到组织内的黏液、糖原和真菌等物质,可用于诊断及鉴别一些分泌黏液、糖原的肿瘤以及判定引起感染性疾病的真菌类型,为疾病的诊断及鉴别诊断提供重要依据.

目的 探讨阿萨希毛孢子菌与西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外抗真菌药敏特点,为临床用药、准确鉴定和流行病学研究提供依据.方法 收集2017年1月-2022年9月广东省人民医院临床分离的2种少见酵母样真菌,其中阿萨希毛孢子菌54株,西弗射盾子囊霉23株,复苏后进行形态学鉴定、生化鉴定和质谱鉴定,同时采用FUNGUS-3 MIC法测定5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的最小抑菌浓度(MIC).结果 阿萨希毛孢子菌主要感染65岁以上人群(46.30％),感染部位以创面感染(27.78％)与尿路感染为主(22.22％),主要分布于外科(35.19％)和内科(35.19％);而西弗射盾子囊霉感染患者主要以18～40岁(39.13％)和41～65岁(47.83％)两个年龄段为主,感染部位以耳道为主(78.26％),分布于耳鼻喉外科病区(60.87％)和耳聋专科门诊(26.09％);在形态学鉴定方面,2种真菌菌落均为白色凸起,呈镶嵌生长,其中阿萨希毛孢子菌生长速度快于西弗射盾子囊霉,菌落革兰染色可见关节孢子、关节菌丝、真假菌丝及芽生孢子,而西弗射盾子囊霉可见分枝分隔菌丝和单细胞、卵圆形的芽生孢子.在生化鉴定方面,阿萨希毛孢子菌尿素酶阳性,可水解七叶苷,同化多种糖类化合物,而西弗射盾子囊霉尿素酶阴性、不水解七叶苷,但可同化多种碳水化合物.微生物质谱对阿萨希毛孢子菌和西弗射盾子囊霉的鉴定率分别为96.30％和91.30％,具有良好鉴定效果;在体外药敏结果方面,两种真菌对5-氟胞嘧啶均表现出高MIC值,其中54株(100％)阿萨希毛孢子菌MIC值均≥4 μg/mL,23株(100％)西弗射盾子囊霉MIC值均≥4 μg/mL;同时也需警惕2种真菌对氟康唑出现高MIC值的情况,其中7株(12.97％)阿萨希毛孢子菌MIC值均≥4 μg/mL,16株(69.56％)西弗念珠菌MIC值≥16 μg/mL;两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑则整体上表现出较低的MIC值(≤2 μg/mL),表现出较好的体外活性.结论 阿萨希毛孢子菌和西弗射盾子囊霉的实验室鉴定与体外药敏结果具有不同特点,对其实现准确鉴定和进行抗真菌药敏试验,对临床用药、实验室鉴定和流行病学的研究具有重要意义.

目的 分析宏基因组学下一代测序(mNGS)在湖南省流行病原体筛查检测中的临床应用价值,并分析不同流行病原体的流行趋势和临床特征.方法 收集整理华中区进行mNGS病原体检测的患者数据,统计高频检出病原体,并分析和追踪其流行趋势及易感特征.结果 共统计2019-2023年常见的流行病原体检测人群共16 627例,其中男性10 811例(65.02％),女性5 816例(34.98％);高频检出的病原体有新冠病毒、疱疹病毒(1、4、5型)、鲍氏不动杆菌、白假丝酵母、耶氏肺孢子菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯菌、烟曲霉菌、铜绿假单胞菌、结核分枝杆复符合群、纹带棒状杆菌、肺炎链球菌、肺炎支原体、鹦鹉热衣原体;从2021年第四季度开始,对于病原体的检测样本逐年上升,呼吸科、重症科、感染科和儿科对于mNGS的接受度较高.结论 mNGS能缩短病原体检测时间,提高病原体识别率和准确率,可作为指导预防流行病学的应用依据.

为探究当归根腐病的病原菌种类、生物学特性并筛选其防治药剂.采用常规组织法分离培养病原菌,利用柯赫氏法则验证其致病性,通过形态学和分子生物学相结合的方法进行病原菌的鉴定、生物学特性分析;采用菌丝生长速率法对病原菌进行室内毒力测定.结果表明,当归根腐病菌菌落毛毡状,在三种培养基上大型分生孢子呈镰刀形,大小为(27.5-47.5)μm ×(3.8-7.5)μm(n=50),隔膜数1～5;小型分生孢子在PDA和SNA培养基上呈椭圆形、肾型、纺锤形,在CLA培养基上肾型,(3.8-15.0)μm ×(2.5-7.5)μm(n=50),隔膜数0～3;厚垣孢子在CLA培养基上呈串生,PDA培养基上呈不规则形,SNA培养基上厚垣孢子着生方式多样,串生、圆形、不规则形,大小为(2.5-3.8)μm ×(2.5～5.0)μm(n=50).EF-1α、RPB1和RPB2联合序列系统发育树表明,该菌为锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum),其最适生长温度为25℃,最适生长初始pH为9,光照对其生长无显著影响.室内毒力测定显示10％苯醚甲环唑(WG)对其抑制效果最好,EC50值为83.71 mg/L.本研究可为当归根腐病病原鉴定及田间药剂防治提供参考.