目的:通过检测先天性肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction, UPJO)患儿梗阻段组织上皮屏障结构分子、缺氧诱导因子和血管内皮标志分子的分布和表达情况，了解UPJO梗阻段上皮屏障缺陷和缺氧表型，探讨尿路上皮细胞屏障缺陷和缺氧的相关性。方法:收集2019年1～8月复旦大学附属儿科医院手术切除的UPJO患儿梗阻段17例作为UPJO组，另收集2019年5月至2020年1月因肾肿瘤行肾全切患儿的正常输尿管5例作为正常对照组。利用免疫荧光染色观察石蜡切片UPK3A、E-cadherin、ZO-1、HIF-1α以及CD34的表达与分布情况。利用氯化钴(cobalt chloride，CoCl 2)建立尿路上皮细胞系SV-HUC-1的缺氧模型，并用CCK-8法筛选最佳建模CoCl 2浓度。采用实时荧光定量RT-qPCR和蛋白质印迹法检测E-cadherin、ZO-1在mRNA和蛋白水平的表达情况，使用Stata 13.0对比分析组间差异，并用GraphPad Prism 7.0绘图。 结果:UPJO组梗阻段UPK3A、E-cadherin、ZO-1蛋白的相对表达量分别为0.338(0.154，0.585)、0.739±0.155和0.146±0.130，与对照组0.898(0.779，0.925)、1.000±0.050和1.000±0.404比较均显著减少，差异有统计学意义( P＝0.020 8、0.001 5和<0.000 1)。UPJO梗阻段HIF-1α和CD34蛋白的相对表达量分别为5.473(2.896，15.969)和3.021±0.949，较对照组1.256(0.615，1.299)和1.000±0.752明显增加，组间比较差异亦均有统计学意义( P＝0.000 9和0.000 4)。蛋白质印迹法和CCK-8实验显示，诱导SV-HUC-1细胞缺氧模型的最适CoCl 2浓度为200 μmol/L(24 h)，对细胞活力无显著影响。缺氧组SV-HUC-1细胞的ZO-1和E-cadherin的相对表达量在mRNA水平分别为0.452±0.083和0.693±0.100，与空白对照组1.029±0.291和1.000±0.045比较均显著下降，差异均有统计学意义( P＝0.008 9和0.008 2)。缺氧组SV-HUC-1细胞的相对表达量在ZO-1和E-cadherin蛋白水平分别为0.572±0.241和0.942±0.022，与空白对照组1.000±0.253和1.000±0.026比较，差异亦有统计学意义( P＝0.025 3和0.041 1)。 结论:UPJO患儿梗阻段存在上皮屏障缺损，同时也存在缺氧。在细胞水平，缺氧会使SV-HUC-1细胞间连接分子表达减少，缺氧可能是引起上皮屏障破坏的原因之一。

目的 探究木犀草素对反复尿路感染大鼠模型尿路上皮屏障的影响.方法 选取SPF级SD雌性大鼠45只,其中空白组、模型组、低剂量组、高剂量组各10只;空白组、模型组只进行生理盐水灌胃,不做其他任何处理,低剂量组在模型组的基础上给予木犀草素10 mg/kg灌胃,高剂量组给予40 mg/kg灌胃;检测尿量、尿白细胞水平、炎症因子、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、尿乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平、尿路上皮屏障功能情况及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路相对表达量.结果 与空白组比较,模型组、低剂量组、高剂量组尿量情况、E黏钙蛋白(E-cadherin)、闭合小带蛋白-1(ZO-1)水平降低,尿白细胞、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、SIg A、NAG水平、TLR4、NF-κB相对表达量均升高(P＜0.05);与模型组相比,低剂量组、高剂量组,尿量、E-cad-herin、ZO-1水平升高,尿白细胞、IL-6、IL-8、SIgA、NAG、TLR4、NF-KB相对表达量均降低(P＜0.05);与低剂量组比较,高剂量组尿量、E-cadherin、ZO-1水平升高,尿白细胞、IL-6、IL-8、SIgA、NAG、TLR4、NF-KB相对表达量均降低(P＜0.05).结论 木犀草素能对反复尿路感染大鼠尿路上皮屏障情况进行改善,减轻炎症情况,提高排尿功能,调节免疫功能,通过调节TLR4/NF-κB信号通路能反映出对反复尿路感染的干预效果.

尿路上皮屏障指被覆于肾盏、肾盂、输尿管、膀胱、尿道和前列腺腺管的上皮组织及管腔表面的黏液层.尿路上皮屏障是肾小球外的另一个血-尿屏障,起到防止尿液内高渗性溶质及病原菌侵袭尿路组织和进入血液的作用,同时可以分泌炎症介质、神经递质,还可作为感受器官传导尿路自身及外界的信号.随着研究的深入,发现膀胱上皮屏障完整性的破坏及功能障碍与多种下尿路症状(LUTS)的发生发展有关[1-3].本文将对膀胱尿路上皮屏障的功能和在相关疾病中的作用进行综述.

目的 观察老年雄性SD大鼠前列腺导管内尿路上皮屏障的病理学特点.方法 取10只老年雄性SD大鼠,予水合氯醛麻醉后取膀胱、前列腺部尿道及前列腺组织行病理连续切片,完成HE染色镜检和免疫组织化学染色法分别检测组织内细胞角蛋白7(CK7)、细胞角蛋白20(CK20)、尿斑蛋白Ⅲ(UP Ⅲ)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)及闭锁蛋白(Occludin)的表达情况;各抗体免疫组化结果行平均吸光度(Ia)值分析.结果 HE染色观察到在膀胱、前列腺部尿道和前列腺导管近端存在尿路上皮伞状细胞.免疫组织化学染色示膀胱、前列腺部尿道及前列腺导管中CK7、UP Ⅲ、ZO-1及Occludin均呈阳性,CK20呈阴性;CK7和UP Ⅲ在前列腺导管近端呈阳性,导管腺泡腔底部呈阴性;ZO-1和Occludin在前列腺导管中呈阳性.IOD/Area显示CK7和UPⅢ在膀胱、前列腺部尿道、前列腺导管近端、中段和腺泡腔底部的表达分别为0.16、0.13、0.06、0.05、0.00和0.17、0.16、0.08、0.05、0.00 (P＜0.05);ZO-1和Occludin在膀胱(0.14和0.13)表达高于其他部位(0.11～0.12和0.09～ 0.10,P＜0.05);ZO-1和Occludin从前列腺导管近端到中段和腺泡腔底部表达无明显差异(0.12～0.11和0.09～ 0.09,P＞0.05);CK20的IA值极低(0.00～ 0.01,P＞0.05).结论 老年雄性SD大鼠前列腺导管内存在部分尿路上皮屏障,随着前列腺导管逐渐延伸至腺泡腔,尿路上皮屏障逐渐消失.该结果为进一步研究前列腺切除术后尿路上皮屏障的修复奠定基础.

目的 探讨姜黄素对慢性尿路感染大鼠尿路上皮屏障及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路影响.方法 大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、姜黄素(低、中、高)剂量组,每组8只;除假手术组外,其余各组0.1mL大肠杆菌菌液(密度为1×107个/mL)注射入尿道建立慢性尿路感染大鼠模型,阳性对照组大鼠灌胃3.67 g/kg三金片,姜黄素(低、中、高)剂量组分别灌胃(0.075、0.150、0.300) g/kg姜黄素,假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续14d.灌胃后收集6h尿液并量取体积;收集大鼠静脉血和膀胱组织,酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中白介素(IL)-6、IL-8水平;计数尿白细胞;蛋白免疫印迹检测膀胱组织中TLR4、NF-κB、钙黏素(E-cadherin)、闭锁小带蛋白-1 (ZO-1)水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠尿量[(3.47±0.65)vs(2.46±0.35)mL]、膀胱组织中E-cadherin[(0.69±0.07)vs(0.18±0.02)]、ZO-1[(0.43±0.04)vs(0.08±0.02)]蛋白水平降低(P＜0.05);血清中IL-6[(0.13±0.03)vs(0.26±0.05)]、IL-8水平[(0.53±0.16)vs(1.32±0.33)]、尿白细胞数量[(23.48±3.58)vs(115.69±14.89)]、膀胱组织中TLR4[(0.23±0.04)vs(1.05±0.11)]、NF-κB[(0.09±0.01)vs(0.86±0.09)]蛋白表达升高(P＜0.05).与模型组比较,姜黄素中剂量组大鼠膀胱组织中E-cadherin(0.35±0.06)、ZO-1(0.35±0.05)蛋白水平升高(P＜0.05);中高剂量姜黄素组大鼠血清中IL-6(0.18±0.02)、IL-8(0.68±0.14)水平,尿白细胞数量(64.83±7.43),膀胱组织中TLR4(0.35±0.04)、NF-κB(0.33±0.04)蛋白水平降低(P＜0.05).结论 姜黄素对尿路感染大鼠具有一定保护作用,其机制可能与下调TLR4/NF-κB通路表达有关.

Uroplakins(Upk)是尿路上皮分化的关键蛋白,在尿路屏障功能建立中起重要作用.由于Upk在尿路上皮的特异性表达,被认为是尿路上皮系统炎症、肿瘤等疾病发病机制中的关键因素.该文旨在阐述Upk的相关功能和作用,并将其在泌尿外科疾病中的研究进展进行系统性综述.

目的 探索LL-37对膀胱尿路上皮细胞跨膜屏障功能破坏的具体作用,构建适于体外研究间质性膀胱炎(interstitial cystitis,IC)的细胞实验模型.方法 分别用不同浓度的LL-37处理人尿路上皮永生化细胞SV-HUC-1,通过跨上皮电阻测量仪测量跨上皮细胞电阻,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期和钙离子浓度,RT-qPCR和WB检测葡萄糖胺聚糖(GAGs)关键成分硫酸乙酰肝素的表达水平.结果 体外细胞跨上皮电阻测量显示,100和200μg/mL LL-37可显著抑制细胞的跨上皮电阻,破坏SV-HUC-1细胞的跨膜屏障功能.CCK-8和PI染色流式细胞检测显示,100 μg/mL以上的LL-37可显著降低SV-HUC-1细胞的增殖活力,提高SV-HUC-1细胞处于G0/G1期的比例(P＜0.05),提示细胞增值受到显著抑制.进一步流式细胞术检测SV-HUC-1细胞中的钙离子浓度显示,LL-37处理后的尿路上皮细胞内钙离子浓度显著升高(P＜0.05),且增高量与LL-37浓度相关.RT-qPCR和WB检测证实经LL-37处理后SV-HUC-1细胞的GAGs关键成分硫酸乙酰肝素表达显著上调(P＜0.05).结论 抗菌肽LL-37可抑制SV-HUC-1细胞内GAGs关键成分硫酸乙酰肝素的表达,并破坏SV-HUC-1的细胞增殖和跨膜屏障功能.

泌尿系感染(UTI)是泌尿外科常见的感染性疾病,通常由尿路致病性大肠杆菌(UPEC)引起.UPEC入侵及定殖于尿路上皮细胞,造成泌尿系感染以及复杂的宿主免疫清除和病原体免疫逃逸,包括物理屏障的防御、中性粒细胞迁移、募集和吞噬以及细胞因子的分泌等.病原体与宿主之间复杂的免疫反应与免疫逃避是疾病发生发展的关键,也是UTI治疗的基础.本文针对最新的UTI中宿主-尿路致病大肠杆菌相互作用作一综述.